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GB/T 18204.3-2013

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GB/T 18204.3-2013 英文版 70 购买 3分钟内自动发货[PDF],有增值税发票。 公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物 有效

   
基本信息
标准编号 GB/T 18204.3-2013 (GB/T18204.3-2013)
中文名称 公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物
英文名称 Examination methods for public places. Part 3: Airborne microorganism
行业 国家标准 (推荐)
中标分类 C51
国际标准分类 13.060
字数估计 12,148
旧标准 (被替代) GB/T 18204.1-2000; GB/T 17220-1998
起草单位 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所
归口单位 中华人民共和国卫生部
标准依据 国家标准公告2013年第27号
提出机构 中华人民共和国卫生部
发布机构 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会
范围 GB/T 18204的本部分规定了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与实验室培养方法。本部分适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌以及嗜肺军团菌的测定, 其他场所可参照执行。

GB/T 18204.3-2013
Examination methods for public places.Part 3: Airborne microorganism
ICS 13.060
C51
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 18204.1-2000
部分代替GB/T 17220-1998
公共场所卫生检验方法
第3部分:空气微生物
2013-12-31发布
2014-12-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
目次
前言 Ⅲ
1 范围 1
2 术语和定义 1
3 细菌总数 1
4 真菌总数 3
5 β-溶血性链球菌 4
6 嗜肺军团菌 5
附录A(规范性附录) 现场采样检测布点要求 8
前言
GB/T 18204《公共场所卫生检验方法》分为六个部分:
---第1部分:物理因素;
---第2部分:化学污染物;
---第3部分:空气微生物;
---第4部分:公共用品用具微生物;
---第5部分:集中空调通风系统;
---第6部分:卫生监测技术规范。
本部分为GB/T 18204的第3部分。
本部分按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本部分代替GB/T 18204.1-2000《公共场所空气微生物检验方法 细菌总数测定》,部分代替
GB/T 17220-1998《公共场所卫生监测技术规范》中的空气微生物采样要求。
本标准与GB/T 18204.1-2000和GB/T 17220-1998相比,主要变化如下:
---增加了真菌总数检验方法;
---增加了β-溶血性链球菌检验方法;
---增加了嗜肺军团菌检验方法。
本部分由中华人民共和国卫生部提出并归口。
本部分由中华人民共和国卫生部负责解释。
本部分负责起草单位:中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所。
本部分参加起草单位:江苏省疾病预防控制中心、深圳市疾病预防控制中心、马鞍山市卫生局卫生
监督所。
本部分主要起草人:金银龙、刘凡、王俊起、陈晓东、余淑苑、潘力军、陈健、张宝莹、张琦、周连、
赵至荣。
本部分参加起草人:孙群露、林弈芝、张大伟、董坤、刘洋。
自本部分实施之日起,GB/T 18204.1-2000全部内容和 GB/T 17220-1998中相应内容同时
废止。
GB/T 18204.1-2000的历次版本发布情况为:
---GB/T 18204.1-2000。
GB/T 17220-1998的历次版本发布情况为:
---GB/T 17220-1998。
公共场所卫生检验方法
第3部分:空气微生物
1 范围
GB/T 18204的本部分规定了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌
的现场采样与实验室培养方法。
本部分适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌以及嗜肺军团菌的测定,其他
场所可参照执行。
注:本部分中同一个指标如果有2个或2个以上检验方法时,可根据技术条件选择使用。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1
细菌总数 totalbacterialcount
公共场所空气中采集的样品,计数在营养琼脂培养基上经35℃~37℃、48h培养所生长发育的嗜
中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
2.2
真菌总数 totalfungicount
公共场所空气中采集的样品,计数在沙氏琼脂培养基上经28℃、5d培养所形成的菌落数。
2.3
β-溶血性链球菌 β-hemolyticstreptococcus
公共场所空气中采集的样品,经35℃~37℃、24h~48h培养,在血琼脂平板上形成的典型菌落。
2.4
嗜肺军团菌 legionelapneumophila
样品经培养在GVPC琼脂平板上生成典型菌落,并在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失
的BCYE琼脂平板不生长,进一步经生化实验和血清学实验鉴定确认的菌落。
2.5
撞击法 impactingmethod
采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过狭缝或小孔产生高速气流,从而将悬浮在空气中的微生
物采集到营养琼脂平板上,经实验室培养后得到菌落数的测定方法。
2.6
自然沉降法 naturalsinkingmethod
将营养琼脂平板暴露在空气中,微生物根据重力作用自然沉降到平板上,经实验室培养后得到菌落
数的测定方法。
3 细菌总数
3.1 原理
采用撞击法或自然沉降法采样、营养琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的细菌总数。
3.2 撞击法
3.2.1 仪器和设备
3.2.1.1 六级筛孔撞击式微生物采样器。
3.2.1.2 高压蒸汽灭菌器。
3.2.1.3 恒温培养箱。
3.2.1.4 平皿:ϕ90mm。
3.2.2 培养基
3.2.2.1 营养琼脂培养基成分:
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
肉膏 5g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
3.2.2.2 制法:将蛋白胨、氯化钠、肉膏溶于蒸馏水中,校正pH为7.2~7.6,加入琼脂,121℃,20min灭
菌备用。
3.2.3 采样
3.2.3.1 采样点:见附录A。
3.2.3.2 采样环境条件:采样时关闭门窗15min~30min,记录室内人员数量、温湿度与天气状况等。
3.2.3.3 采样方法:以无菌操作,使用撞击式微生物采样器(3.2.1.1)以28.3L/min流量采集5min~
15min。采样器使用按照说明书要求进行。
3.2.4 检验步骤
将采集细菌后的营养琼脂平皿置35℃~37℃培养48h,菌落计数。
3.2.5 结果报告
3.2.5.1 采样点细菌总数结果计算:菌落计数,记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3(每立
方米空气中菌落形成单位)。
3.2.5.2 一个区域细菌总数测定结果:一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细
菌总数测定值中的最大值给出。
3.3 自然沉降法
3.3.1 仪器和设备
3.3.1.1 高压蒸汽灭菌器。
3.3.1.2 恒温培养箱。
3.3.1.3 平皿:ϕ90mm。
3.3.1.4 采样支架。
3.3.2 培养基
见3.2.2。
3.3.3 采样
3.3.3.1 采样点:见附录A。
3.3.3.2 采样环境条件:见3.2.3.2。
3.3.3.3 采样方法:将营养琼脂平板置于采样点处,打开皿盖,暴露5min。
3.3.4 检验步骤
见3.2.4。
3.3.5 结果报告
计数每块平板上生长的菌落数,求出全部采样点的平均菌落数,检验结果以每平皿菌落数(CFU/皿)
给出。
4 真菌总数
4.1 原理
采用撞击法或自然沉降法采样、沙氏琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的真菌总数。
4.2 撞击法
4.2.1 仪器和设备
见3.2.1。
4.2.2 培养基
4.2.2.1 沙氏琼脂培养基成分:
蛋白胨 10g
葡萄糖 40g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.2.2.2 制法:将蛋白胨、葡萄糖溶于蒸馏水中,校正pH 为5.5~6.0,加入琼脂,115℃,15min灭菌
备用。
4.2.3 采样
见3.2.3。
4.2.4 检验步骤
将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养,逐日观察并于第5天记录结果。若真菌数量过
多可于第3天计数结果,并记录培养时间。
4.2.5 结果报告
4.2.5.1 采样点真菌总数结果计算:菌落计数,记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3(每立
方米空气中菌落形成单位)。
4.2.5.2 一个区域真菌总数测定结果:一个区域空气中真菌总数的测定结果按该区域全部采样点中真
菌总数测定值中的最大值给出。
4.3 自然沉降法
4.3.1 仪器和设备
见3.3.1。
4.3.2 培养基
见4.2.2。
4.3.3 采样
见3.3.3。
4.3.4 检验步骤
见4.2.4。
4.3.5 结果报告
计数每块平板上生长的菌落数,求出全部采样点的平均菌落数,检验结果以每平皿菌落数(CFU/皿)
给出。
5 β-溶血性链球菌
5.1 原理
采用撞击法采样、血琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的β-溶血性链球菌。
5.2 撞击法
5.2.1 仪器和设备
见3.2.1。
5.2.2 培养基
5.2.2.1 血琼脂平板成分:
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
琼脂 20g
脱纤维羊血 5mL~10mL
蒸馏水 1000mL
5.2.2.2 制法:将蛋白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中,校正pH为7.4~7.6,加入琼脂,121℃,
20min灭菌。待冷却至50℃左右,以无菌操作加入脱纤维羊血,摇匀倾皿。
5.2.3 采样
见3.2.3。
5.2.4 检验步骤
5.2.4.1 培养方法:采样后的血琼脂平板在35℃~37℃下培养24h~48h。
5.2.4.2 结果观察:培养后,在血琼脂平板上形成呈灰白色、表面突起、直径0.5mm~0.7mm的细小菌
落,菌落透明或半透明,表面光滑有乳光;镜检为革兰氏阳性无芽孢球菌,圆形或卵圆形,呈链状排列,受
培养与操作条件影响,链的长度在4个~8个细胞至几十个细胞之间;菌落周围有明显的2mm~4mm
界限分明、完全透明的无色溶血环。符合上述特征的菌落为β-溶血性链球菌。
5.2.5 结果报告
5.2.5.1 采样点β-溶血性链球菌结果计算:菌落计数,记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3
(每立方米空气中菌落形成单位)。
5.2.5.2 一个区域β-溶血性链球菌测定结果:一个区域空气中β-溶血性链球菌的测定结果按该区域全
部采样点中β-溶血性链球菌测定值中的最大值给出。
6 嗜肺军团菌
6.1 原理
采用液体冲击法采样、培养法定性测定公共场所空气中的嗜肺军团菌。
6.2 仪器和设备
6.2.1 微生物气溶胶浓缩器:采样流量≥100L/min,对于直径3.0μm以上粒子的捕集效率应≥80%
(或浓缩比≥8)。
6.2.2 液体冲击式微生物气溶胶采样器:采样流量7L/min~15L/min,对于0.5μm以上粒子的捕集
效率应≥90%。
6.2.3 离心管:容积50mL。
6.2.4 平皿:ϕ90mm。
6.2.5 CO2 培养箱:35℃~37℃。
6.2.6 紫外灯:波长360nm±2nm。
6.2.7 涡旋振荡器。
6.2.8 普通光学显微镜、荧光显微镜。
6.2.9 水浴箱。
6.3 试剂和培养基
6.3.1 采样吸收液1---GVPC液体培养基
6.3.1.1 GVPC添加剂成分:
多黏菌素B硫酸盐 10mg
万古霉素 0.5mg
放线菌酮 80mg
6.3.1.2 BCYE添加剂成分:
α-酮戊二酸 1.0g
N-2酰胺基-2胺基乙烷磺酸(ACES) 10.0g
氢氧化钾 2.88g
L-半胱氨酸盐酸盐 0.4g
焦磷酸铁 0.25g
6.3.1.3 吸收液成分:
活性炭 2g
酵母浸出粉 10g
GVPC添加剂
BCYE添加剂
蒸馏水 1000mL
6.3.1.4 制法:将活性炭、酵母浸出粉加水至1000mL,121℃下高压灭菌15min,加入GVPC添加剂
(6.3.1.1)和BCYE添加剂(6.3.1.2),分装于灭菌后的离心管(6.2.3)中备用。
6.3.2 采样吸收液2---酵母提取液
6.3.2.1 吸收液成分:
酵母浸出粉 12g
蒸馏水 1000mL
6.3.2.2 制法:将酵母浸出粉加水至1000mL,121℃下高压灭菌15min,分装于灭菌后的离心管(6.2.3)
中备用。
6.3.3 盐酸氯化钾溶液[c(HCl·KCl)=0.01mol/L]
6.3.3.1 成分:
盐酸(0.2mol/L) 3.9mL
氯化钾(0.2mol/L) 25mL
6.3.3.2 制法:将上述成分混合,用1mol/L氢氧化钾调整pH=2.2±0.2,121℃下高压灭菌15min
备用。
6.3.4 GVPC琼脂平板。
6.3.5 BCYE琼脂平板。
6.3.6 BCYE-CYE琼脂平板。
6.3.7 革兰氏染色液。
6.3.8 马尿酸盐生化反应管。
6.3.9 军团菌分型血清试剂。
6.4 采样
6.4.1 采样点:见附录A。
6.4.2 将采样吸收液1(6.3.1)20mL倒入微生物气溶胶采样器(6.2.2)中,然后用吸管加入矿物油
1滴~2滴。
6.4.3 将微生物气溶胶浓缩器(6.2.1)与微生物气溶胶采样器(6.2.2)连接,按照微生物气溶胶浓缩器和
微生物气溶胶采样器的流量要求调整主流量和浓缩流量。
6.4.4 按浓缩器和采样器说明书操作,每个气溶胶样品采集空气量1m3~2m3。
6.4.5 将采样吸收液2(6.3.2)20mL倒入微生物气溶胶采样器(6.2.2)中,然后用吸管加入矿物油1滴~
2滴;在相同采样点重复6.4.3、6.4.4步骤。
6.4.6 采集的样品不必冷冻,但要避光和防止受热,4h内送实验室检验。
6.5 检验步骤
6.5.1 样品的酸处理:对采样后的吸收液1(6.3.1)和吸收液2(6.3.2)原液各取1mL,分别加入盐酸氯
化钾溶液(6.3.3)充分混合,调pH至2.2,静置15min。
6.5.2 样品的接种:在酸处理后的两种样品(6.5.1)中分别加入1mol/L氢氧化钾溶液,中和至pH为
6.9,各取悬液0.2mL~0.3mL分别接种GVPC平板(6.3.4)。
6.5.3 样品的培养:将接种平板静置于浓度为5%、温度为35℃~37℃的CO2 培养箱(6.2.5)中,孵育
10d。
6.5.4 菌落观察:从孵育第3天开始观察菌落。军团菌的菌落颜色多样,通常呈白色、灰色、蓝色或紫
色,也能显深褐色、灰绿色、深红色;菌落整齐,表面光滑,呈典型毛玻璃状,在紫外灯下,部分菌落有
荧光。
6.5.5 菌落验证:从平皿上挑取2个可疑菌落,接种BCYE琼脂平板(6.3.5)和L-半光氨酸缺失的
BCYE琼脂平板(6.3.6),35℃~37℃培养2d,凡在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的
BCYE琼脂平板不生长的则为军团菌菌落。
6.5.6 菌型确定:应进行生化培养与血清学实验确定嗜肺军团菌。生化培养:氧化酶(-/弱+),硝酸
盐还原(-),尿素酶(-),明胶液化(+),水解马尿酸。血清学实验:用嗜肺军团菌诊断血清进行分型。
6.6 结果报告
6.6.1 采样点测定结果:两种采样吸收液中至少有一种吸收液培养出嗜肺军团菌,即为该采样点嗜肺
军团菌阳性。
6.6.2 一个区域测定结果:一个区域中任意一个采样点嗜肺军团菌阳性,即该区域空气中嗜肺军团菌
的测定结果为阳性。
附 录 A
(规范性附录) <......
   
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