路径: 主页 > GB > 第29页 > GB 31658.16-2021 | 标准编号 | GB 31658.16-2021 (GB31658.16-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of avermectins residues in animal derived food by high performance liquid chromatography and liquid chromatography-tandem mass spectrometric method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 12,163 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.16-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中阿维菌素类药物残留量的测定 高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
动物性食品中阿维菌素类药物残留量的测定
高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.
本文件系首次发布.
１ 范围
本文件规定了动物性食品中阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的制样和高效液相色谱测定方法.
本文件适用于猪、牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的阿维菌素类药物经乙腈提取,C１８固相萃取柱净化,荧光衍生化,高效液相色谱法测定,
外标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５.１ 试剂
５.１.１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５.１.２ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５.１.３ 正己烷(C６H１４):色谱纯.
５.１.４ 乙酸(CH３COOH):色谱纯.
５.１.５ 三氟乙酸酐(C４F６O３):色谱纯.
５.１.６ 三乙胺(C６H１５N).
５.１.７ １-N-甲基咪唑(C４H６N２).
５.２ 溶液配制
５.２.１ 衍生化试剂A液:取１-N-甲基咪唑５mL、乙腈５mL,混匀.
５.２.２ 衍生化试剂B液:取三氟乙酸酐５mL、乙腈１０mL,混匀.
５.２.３ 洗涤液:取乙腈８０mL、水１２０mL、三乙胺０.２mL,混匀.
５.３ 标准品
阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素含量均≥９５％,具体见附录A.
５.４ 标准溶液制备
５.４.１ 标准储备液(１mg/mL):取阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素标准品各适量(相当于各活性成分约１０mg),精密称定,于１０mL容量瓶中,加乙腈溶解并稀释至刻度,配制成浓度为１mg/mL的标准储备液.-１８℃以下避光保存,有效期６个月.
５.４.２ 混合标准工作液(１０μg/mL):精密量取标准储备液各０.１mL,于１０mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的混合标准工作液.-１８℃以下避光保存,有效期３个月.
５.４.３ 混合标准工作液(１μg/mL):精密量取１０μg/mL的混合标准工作液１mL,于１０mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为１μg/mL的混合标准工作液.-１８℃以下避光保存,有效期3个月.
５.５ 材料
５.５.１ 固相萃取柱:三键键合C１８,５００mg/６mL,或相当者.
５.５.２ 微孔尼龙滤膜:０.２μm.
６ 仪器和设备
６.１ 高效液相色谱仪:配荧光检测器.
６.２ 分析天平:感量０.００００１g和０.０１g.
６.３ 离心机.
６.４ 组织匀浆机.
６.５ 涡旋混合器.
６.６ 固相萃取装置.
６.７ 氮吹仪.
７ 试料的制备与保存
７.１ 试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料.
７.２ 试料的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８.１ 提取
取试料２g(准确至±０.０２g),于５０mL离心管中,加乙腈８mL,涡旋２min,４０００r/min离心
５min.收集上清液,残渣中加乙腈８mL,重复提取１次.合并２次提取液,混匀.取提取液４mL,加水６
mL和三乙胺１０μL,混匀,备用.
８.２ 净化
固相萃取柱依次用乙腈、洗涤液各４mL活化,取备用液过柱,依次用洗涤液５mL和水３mL淋洗,
抽干,用正己烷４mL淋洗,抽干,用乙腈８mL洗脱.收集洗脱液,４０℃水浴氮气吹干.
８.３ 衍生化
加衍生化试剂A液１００μL、衍生化试剂B液１５０μL、乙酸５０μL、三乙胺５０μL,涡旋３０s,２０℃避光静置１５min.加甲醇６５０μL,涡旋１０s,２０℃避光静置１５min,过滤后供高效液相色谱仪测定.
８.４ 标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量,用甲醇稀释,配制成阿维菌素类药物浓度为２.５μg/L、５μg/L、１２.５μg/L、２５μg/L、５０μg/L、１２５μg/L和２５０μg/L的系列标准工作液,４０℃水浴氮气吹干,按８.３衍生化步骤处理,供高效液相色谱仪测定.以测得峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.
８.５ 测定
液相色谱参考条件如下.
a) 色谱柱:C１８(２５０mm×４.６mm,５μm),或相当者;
b) 流动相:乙腈∶水(９０∶１０,体积比);
c) 流速:１.０mL/min;
d) 检测波长:激发波长:３６５nm,发射波长:４７５nm;
e) 柱温:３５℃;
f) 进样量:５０μL.
８.６ 测定法
取试样溶液和标准溶液,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.试样溶液及标准溶液中阿
维菌素类药物的峰面积应在仪器检测的线性范围之内.在上述色谱条件下,标准溶液的高效液相色谱图见附录B.
８.７ 空白试验
取空白试料,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试样中阿维菌素类药物的残留量按标准曲线或公式(１)计算.
１０ 方法灵敏度、准确度和精密度
１０.１ 灵敏度
本方法的检测限为１.５μg/kg,定量限为５μg/kg.
１０.２ 准确度
本方法在５μg/kg~１００μg/kg添加浓度水平上的回收率为６０％~１２０％.
１０.３ 精密度
本方法批内相对标准偏差≤２０％,批间相对标准偏差≤２０％.
方法二 液相色谱-串联质谱法
１１ 范围
本文件规定了动物性食品中阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的制样和液相色谱-
串联质谱测定方法.
本文件适用于猪、牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定.
１２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
１３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
１４ 原理
试样中残留的阿维菌素类药物,用乙腈提取,C１８固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱法测定,外标法
定量.
１５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
１５.１ 试剂
１５.１.１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
１５.１.２ 正己烷(C６H１４):色谱纯.
１５.１.３ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
１５.１.４ 三乙胺(C６H１５N).
１５.２ 溶液配制
洗涤液:取乙腈８０mL、水１２０mL、三乙胺０.２mL,混匀.
１５.３ 标准品
阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素含量均≥９５％.具体见附录A.
１５.４ 标准溶液制备
１５.４.１ 标准储备液(１mg/mL):取阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素标准品各适量(相
当于各活性成分约１０mg),精密称定,于１０mL容量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度,配制成浓度为
１mg/mL的标准储备液.-１８℃以下保存,有效期６个月.
１５.４.２ 混合标准工作液(１０μg/mL):精密量取标准储备液各０.１mL,于１０mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的混合标准工作液.-１８℃以下避光保存,有效期３个月.
１５.４.３ 混合标准工作液(１μg/mL):精密量取１０μg/mL的混合标准工作液１mL,于１０mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为１μg/mL的混合标准工作液.-１８℃以下避光保存,有效期３个月.
１５.４.４ 混合标准工作液(０.１μg/mL):精密量取１０μg/mL的混合标准工作液０.１mL,于１０mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为０.１μg/mL的混合标准工作液.-１８℃以下避光保存,有效期３个月.
１５.５ 材料
１５.５.１ 固相萃取柱:三键键合C１８,５００mg/６mL,或相当者.
１５.５.２ 微孔尼龙滤膜:０.２μm.
１６ 仪器和设备
１６.１ 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源.
１６.２ 分析天平:感量０.００００１g和０.０１g.
１６.３ 离心机.
１６.４ 组织匀浆机.
１６.５ 涡旋混合器.
１６.６ 固相萃取装置.
１６.７ 氮吹仪.
１７ 试料的制备与保存
１７.１ 试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料.
１７.２ 试料的保存
-１８℃以下保存.
１８ 测定步骤
１８.１ 提取
称取试料２g(准确至±０.０２g),于５０mL离心管中,加乙腈８mL,涡旋２min,４０００r/min离心
５min.收集上清液,残渣中加乙腈８mL,重复提取１次.合并２次提取液,混匀.取提取液４mL,加水
６mL和三乙胺１０μL,混匀,备用.
１８.２ 净化
固相萃取柱依次用乙腈、洗涤液各４mL活化,取备用液过柱,依次用洗涤液５mL、水３mL淋洗,抽
干,用正己烷４mL淋洗,抽干,用乙腈８mL洗脱.收集洗脱液,４０℃水浴氮气吹干.加入５０％乙腈水溶液０.５mL,涡旋１min溶解残余物,微孔滤膜过滤,供液相色谱-串联质谱仪测定.
１８.３ 基质匹配标准曲线的制备
精密量取１０μg/mL混合标准工作液５μL和１０μL、１μg/mL混合标准工作液５μL和２５μL、
０.１μg/mL混合标准工作液５μL和２５μL,分别加入６份经提取和净化的空白试样残渣中,４０℃水浴氮气吹干,加入５０％乙腈水溶液０.５mL涡旋溶解残余物,配制成浓度为１μg/L、５μg/L、１０μg/L、５０μg/L、１００μg/L、２００μg/L的基质匹配系列标准溶液,微孔滤膜过滤,供液相色谱-串联质谱仪测定.以测得特征离子峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.
１８.４ 测定
１８.４.１ 色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８(５０mm×２.１mm,１.７μm),或相当者;
b) 柱温:３５℃;
GB ３１６５８.１６-２０２１
c) 进样量:１０μL;
d) 流速:０.３mL/min;
e) 流动相:A为０.１％甲酸水溶液,B为０.１％甲酸乙腈溶液,梯度洗脱条件见表１.
１８.４.３ 定性测定
在同样测试条件下,试样溶液中阿维菌素类药物的保留时间与基质匹配标准工作液中阿维菌素类药
物的保留时间,偏差在±２.５％以内,且检测到的相对离子丰度,应当......
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