[PDF] GB/T 18448.2-2008 - 英文版
| 标准号码 | 美元 | 购买PDF | 工期 | 标准名称(英文版) |
| GB/T 18448.2-2008 | 229 | GB/T 18448.2-2008 | <=3 | 实验动物 弓形虫检测方法 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | GB/T 18448.2-2008 (GB/T18448.2-2008) |
| 中文名称 | 实验动物 弓形虫检测方法 |
| 英文名称 | Laboratory animal -- Method for examination of Toxoplasma gondii |
| 行业 | 国家标准 (推荐) |
| 中标分类 | B44 |
| 国际标准分类 | 65.020.30 |
| 字数估计 | 10,150 |
| 发布日期 | 2008-12-03 |
| 实施日期 | 2009-03-01 |
| 旧标准 (被替代) | GB/T 18448.2-2001 |
| 标准依据 | 国家标准批准发布公告2008年第19号(总第132号) |
| 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 |
| 范围 | GB/T 18448的本部分规定了实验动物弓形虫的检测方法和试剂等。本部分适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬及猴等实验动物弓形虫的检测。 |
GB/T 18448.2-2008
Laboratory animal.Method for examination of Toxoplasma gondii
ICS ６５．０２０．３０
B４４
中华人民共和国国家标准
GB/T １８４４８．２-２００８
代替GB/T １８４４８．２-２００１
实验动物 弓形虫检测方法
２００８-１２-０３发布
２００９-０３-０１实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
GB/T １８４４８《实验动物》由１０项实验动物寄生虫检测方法组成。
本部分为GB/T １８４４８的第２部分《实验动物 弓形虫检测方法》。
本部分自实施之日起代替GB/T １８４４８．２-２００１。
本部分与GB/T １８４４８．２-２００１相比主要技术差异如下：
ａ） 增加弓形虫酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫酶染色试验（ＩＥＡ），将ＰＣＲ检测方法列入附录
内容，保留间接血凝试验（ＩＨＡ）作为推荐方法之一；
ｂ） 将检测方法所需的“材料与试剂”和“检测步骤”分别叙述。
本部分附录Ａ是规范性附录。
本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。
本部分起草单位：全国实验动物标准化技术委员会。
本部分主要起草人：潘振业、屈霞琴、陈俏梅、李冠民、王彦平。
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：
---GB/T １４９２６．３４-１９９４，GB/T １８４４８．２-２００１。
GB/T １８４４８．２-２００８
实验动物 弓形虫检测方法
１ 范围
GB/T １８４４８的本部分规定了实验动物弓形虫的检测方法和试剂等。
本部分适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬及猴等实验动物弓形虫的检测。
２ 原理
根据免疫学原理，采用弓形虫抗原检测被检动物血清中的弓形虫抗体。
３ 主要试剂和器材
３．１ 试剂
３．１．１ ＥＬＩＳＡ抗原
３．１．１．１ 特异性抗原
弓形虫（ＲＨ株）速殖子腹腔接种清洁级以上实验小鼠（ＫＭ、ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ等均可），３ｄ～５ｄ后，以
无菌生理盐水灌洗被接种小鼠的腹腔，收集含有虫体的小鼠腹腔液，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取沉淀，
ＰＢＳ洗３次。沉淀物加适量蒸馏水反复冻融５次，或用超声波处理后，１００００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上
清液。上清液用葡聚糖凝胶Ｇ２００进行纯化（柱内径×柱高：１．５ｃｍ×６０ｃｍ），流速为０．２ｍＬ／ｍｉｎ。每
管收集２ｍＬ左右。共收集６０管以上。分别测定每个收集管中蛋白在２８０ｎｍ下的吸光度值。分离纯
化后，出现２个蛋白峰；将第一峰各管合并，即为弓形虫特异性抗原（也称弓形虫可溶性抗原）。
３．１．１．２ 正常抗原
以无菌生理盐水注射清洁级以上实验小鼠（与制备抗原的小鼠同品种或品系）腹腔，３ｄ～５ｄ后，以
无菌生理盐水灌洗被注射小鼠腹腔，收集小鼠腹腔液，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取沉淀，ＰＢＳ洗３次。
沉淀物加适量蒸馏水反复冻融５次，或用超声波处理后，１００００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清液，即为正常
抗原。
３．１．２ 抗原片
弓形虫ＲＨ株速殖子腹腔接种清洁级以上实验小鼠（ＫＭ、ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ等均可），３ｄ～５ｄ后处
死，收取虫体，胰酶消化，以一定浓度涂片，充分晾干后冷丙酮固定，-２０℃保存。
３．１．３ 弓形虫抗原致敏绵羊红细胞
将绵羊红细胞与一定浓度的鞣酸液反应，制成鞣化红细胞，然后，用弓形虫可溶性抗原在适宜的条
件下致敏鞣化红细胞，制成弓形虫抗原致敏绵羊红细胞。
３．１．４ 正常对照绵羊红细胞。
３．１．５ 阳性对照血清
自然感染弓形虫的相应动物抗体阳性血清，或弓形虫免疫血清。
３．１．６ 阴性对照血清
确证无弓形虫感染的动物血清。
３．１．７ 酶结合物
辣根过氧化物酶标记的抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬和猴ＩｇＧ抗体；或辣根过......