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GB/T 21315-2007 150 GB/T 21315-2007 9秒内 动物源性食品中青霉素族抗生素残留量检测方法　液相色谱-质谱/质谱法
   
基本信息
标准编号 GB/T 21315-2007 (GB/T21315-2007)
中文名称 动物源性食品中青霉素族抗生素残留量检测方法　液相色谱-质谱/质谱法
英文名称 Determination of penicillins residues in foodstuffs of animal origin - LC-MS/MS method
行业 国家标准 (推荐)
中标分类 X04
国际标准分类 67.120
字数估计 12,173
发布日期 2007-10-29
实施日期 2008-04-01
引用标准 GB/T 6682-1992
标准依据 中国国家标准批准发布公告2007年第13号（总第113号）
发布机构 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会
范围 本标准规定了动物源性食品中青霉素族抗生素残留量液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。本标准适用于猪肌肉、猪肝脏、猪肾脏、牛奶和鸡蛋中羟氨苄青霉素（AmOXICYLLIN ）、氨苄青霉素（AmPICILLIN）、邻氯青霉素（CLOXACILLIN）、双氯青霉素（DICLOXACILLIN）、乙氧萘胺青霉素（NAFCILLIN）、苯唑青霉素（OXACILLIN）、苄青霉素（GPENICILLIN）、苯氧甲基青霉素（PENICILLIN）、苯咪青霉素（AZLOCILLIN）、甲氧苯青霉素（mETHICILLIN）

GB/T 21315-2007: 动物源性食品中青霉素族抗生素残留量检测方法　液相色谱-质谱/质谱法 GB/T 21315-2007 英文名称: Determination of penicillin residues in foodstuffs of animal origin -- LC-MS/MS method 中华人民共和国国家标准 GB/T ２１３１５-２００７ 动物源性食品中青霉素族抗生素残留量 检测方法　液相色谱-质谱／质谱法 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布 前 言 本标准的附录Ａ、附录Ｂ、附录Ｃ为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：林维宣、唐英章、李一尘、赵彤彤、彭涛、田苗、于灵、李军、孙兴权。 本标准为首次发布。 GB/T ２１３１５-２００７ 动物源性食品中青霉素族抗生素残留量 检测方法　液相色谱-质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了动物源性食品中青霉素族抗生素残留量液相色谱-质谱／质谱测定和确证方法。 本标准适用于猪肌肉、猪肝脏、猪肾脏、牛奶和鸡蛋中羟氨苄青霉素（ａｍｏｘｉｃｙｌｉｎ）、氨苄青霉素 （ａｍｐｉｃｉｌｉｎ）、邻氯青霉素（ｃｌｏｘａｃｉｌｉｎ）、双氯青霉素（ｄｉｃｌｏｘａｃｉｌｉｎ）、乙氧萘胺青霉素（ｎａｆｃｉｌｉｎ）、苯唑青霉 素（ｏｘａｃｉｌｉｎ）、苄青霉素（ｇｐｅｎｉｃｉｌｉｎ）、苯氧甲基青霉素（ｐｅｎｉｃｉｌｉｎ）、苯咪青霉素（ａｚｌｏｃｉｌｉｎ）、甲氧苯青霉 素（ｍｅｔｈｉｃｉｌｉｎ）、苯氧乙基青霉素（ｐｈｅｎｅｔｈｉｃｉｌｉｎ）等１１种青霉素族抗生素残留量的检测。 ２　规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T ６６８２-１９９２　分析实验室用水规格和试验方法（neq ISO ３６９６：１９８７） ３　原理 样品中青霉素族抗生素残留物用乙腈-水溶液提取，提取液经浓缩后，用缓冲溶液溶解，固相萃取小 柱净化，洗脱液经氮气吹干后，用液相色谱-质谱／质谱测定，外标法定量。 ４　试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T ６６８２-１９９２规定的一级水。 ４．１　乙腈：高效液相色谱级。 ４．２　甲醇：高效液相色谱级。 ４．３　甲酸：高效液相色谱级。 ４．４　氯化钠。 ４．５　氢氧化钠。 ４．６　磷酸二氢钾。 ４．７　磷酸氢二钾。 ４．８　０．１ｍｏ／Ｌ氢氧化钠：称取４ｇ氢氧化钠，并用水稀释至１０００ｍＬ。 ４．９　乙腈＋水（１５＋２，体积比）。 ４．１０　乙腈＋水（３０＋７０，体积比）。 ４．１１　０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝８．５）：称取８．７ｇ磷酸氢二钾，超纯水溶解，稀释至１０００ｍＬ， 用磷酸二氢钾调节ｐＨ至８．５±０．１。 ４．１２　０．０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝７．０）：称取３．４ｇ磷酸二氢钾，超纯水溶解，稀释至１０００ｍＬ， 用氢氧化钠调节ｐＨ至７．０±０．１。 ４．１３　０．０１ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液（ｐＨ＝４．５）：称取０．７７ｇ乙酸铵，超纯水溶解，稀释至１０００ｍＬ，用甲酸 调节ｐＨ至４．５±０．１。 ４．１４　１１种青霉素族抗生素标准品：羟氨苄青霉素、氨苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、乙氧萘胺青 GB/T ２１３１５-２００７ 霉素、苯唑青霉素、苄青霉素、苯氧甲基青霉素、苯咪青霉素、甲氧苯青霉素、苯氧乙基青霉素，纯度均大 于等于９５％。 ４．１５　１１种青霉素族抗生素标准储备溶液：分别称取适量标准品（４．１４），分别用乙腈水溶液（４．１０）溶 解并定容至１００ｍＬ，各种青霉素族抗生素浓度为１００μｇ／ｍＬ，置于-１８℃冰箱避光保存，保存期５ｄ。 ４．１６　１１种青霉素族抗生素混合标准中间溶液：分别吸取适量的标准储备液（４．１５）于１００ｍＬ容量瓶 中，用磷酸盐缓冲溶液（４．１２）定容至刻度，配成混合标准中间溶液：各种青霉素族抗生素浓度为：羟氨苄 青霉素５００ｎｇ／ｍＬ，氨苄青霉素２００ｎｇ／ｍＬ，苯咪青霉素１００ｎｇ／ｍＬ，甲氧苯青霉素１０ｎｇ／ｍＬ，苄青霉 素１００ｎｇ／ｍＬ，苯氧甲基青霉素５０ｎｇ／ｍＬ，苯唑青霉素２００ｎｇ／ｍＬ，苯氧乙基青霉素１０００ｎｇ／ｍＬ，邻 氯青霉素１００ｎｇ／ｍＬ，乙氧萘青霉素２００ｎｇ／ｍＬ，双氯青霉素１０００ｎｇ／ｍＬ。置于-４℃冰箱避光保存， 保存期５ｄ。 ４．１７　混合标准工作溶液：准确移取标准中间溶液（４．１６）适量，用空白样品基质配制成不同浓度系列的 混合标准工作溶液（用时现配）。 ４．１８　ＯａｓｉｓＨＬＢ固相萃取小柱，或相当者：５００ｍｇ，６ｍＬ。使用前用甲醇和水预处理，即先用２ｍＬ甲 醇淋洗小柱，然后用１ｍＬ水淋洗小柱。 ５　仪器 ５．１　液相色谱-质谱／质谱仪：配有电喷雾离子源。 ５．２　旋转蒸发器。 ５．３　固相萃取装置。 ５．４　离心机。 ５．５　均质器。 ５．６　旋涡混合器。 ５．７　ｐＨ计。 ５．８　氮吹仪。 ６　试样制备与保存 取代表性样品，用组织捣碎机充分捣碎，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-１８℃以下冷冻 存放。 ７　检测步骤 ７．１　提取 ７．１．１　肝脏、肾脏、肌肉组织、鸡蛋样品 称取约５ｇ试样（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入１５ｍＬ乙腈水溶液（４．９），均质３０ｓ， ４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液转移至５０ｍＬ离心管中；另取一离心管，加入１０ｍＬ乙腈水溶液（４．９）， 洗涤均质器刀头，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混合器上振荡 １ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液合并至５０ｍＬ离心管中，重复用１０ｍＬ乙腈水溶液（４．９）洗涤刀 头并提取一次，上清液合并至５０ｍＬ离心管中，用乙腈水溶液（４．９）定容至４０ｍＬ。准确移取２０ｍＬ入 １００ｍＬ鸡心瓶。 ７．１．２　牛奶样品 称取１０ｇ样品（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入２０ｍＬ乙腈（４．９），均质提取３０ｓ， ４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液转移至５０ｍＬ离心管中；另取一离心管，加入１０ｍＬ乙腈水溶液（４．９）， 洗涤均质器刀头，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混合器上振荡 １ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液合并至５０ｍＬ离心管中，重复用１０ｍＬ乙腈水溶液（４．９）洗涤刀 头并提取一次，上清液合并至５０ｍＬ离心管中，用乙腈水溶液（４．９）定容至５０ｍＬ。准确移取２５ｍＬ入 １００ｍＬ鸡心瓶。 将鸡心瓶于旋转蒸发器上（３７℃水浴）蒸发除去乙腈（易起沫样品可加入４ｍＬ饱和氯化钠溶液）。 ７．２　净化 立即向已除去乙腈的鸡心瓶中加入２５ｍＬ磷酸盐缓冲溶液（４．１１），涡旋混匀１ｍｉｎ，用０．１ｍｏｌ／Ｌ 氢氧化钠调节ｐＨ为８．５，以１ｍＬ／ｍｉｎ的速度通过经过预处理的固相萃取柱，先用２ｍＬ磷酸盐缓冲溶 液（４．１１）淋洗２次，再用１ｍＬ超纯水淋洗，然后用３ｍＬ乙腈洗脱（速度控制在１ｍＬ／ｍｉｎ）。将洗脱液 于４５℃下氮气吹干，用０．０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲溶液（４．１２）定容至１ｍＬ，过０．４５μｍ滤膜后，立即用 液相色谱-质谱／质谱仪测定。 ７．３　测定 ７．３．１　液相色谱条件 ７．３．１．１　色谱柱：Ｃ１８柱，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），粒度５μｍ，或相当者。 ７．３．１．２　流动相：Ａ组分是０．０１ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液（甲酸调ｐＨ至４．５）；Ｂ组分是乙腈。梯度洗脱程 序见表１。 ７．３．１．３　流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。 ７．３．１．４　进样量：１００μＬ。 ７．３．２　质谱条件 ７．３．２．１　离子源：电喷雾离子源。 ７．３．２．２　扫描方式：正离子扫描。 ７．３．２．３　检测方式：多反应监测。 ７．３．２．４　雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测 要求，参考条件见附录Ａ。 ７．３．３　液相色谱-质谱／质谱测定 根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液一起进行色谱分析。标准工作液和 待测液中青霉素族抗生素的响应值均应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积进行测 定。在上述色谱条件下，１１种青霉素的参考保留时间分别约为：羟氨苄青霉素８．５ｍｉｎ，氨苄青霉素 １２．２ｍｉｎ，苯咪青霉素１６．５ｍｉｎ，甲氧苯青霉素１６．８ｍｉｎ，苄青霉素１８．１ｍｉｎ，苯氧甲基青霉素 １９．４ｍｉｎ，苯唑青霉素２０．３ｍｉｎ，苯氧乙基青霉素２０．５ｍｉｎ，邻氯青霉素２１．５ｍｉｎ，乙氧萘青霉素 ２２．３ｍｉｎ，双氯青霉素２３．５ｍｉｎ。青霉素族抗生素标准溶液的定量离子对重构离子色谱图见图Ｂ．１。 ７．３．４　定性测定 按照上述条件测定样品和建立标准工作曲线，如果样品中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶 液相比在±２．５％的允许偏差之内；待测化合物的定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于３ （S／N）≥３），定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于１０（S／N≥１０）；定性离子对的相对......