[PDF] GB/T 22224-2008 - 自动发货. 英文版
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| GB/T 22224-2008 | 160 | GB/T 22224-2008 | 9秒内发货PDF | 食品中膳食纤维的测定 酶重量法和酶重量法-液相色谱法 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | GB/T 22224-2008 (GB/T22224-2008) |
| 中文名称 | 食品中膳食纤维的测定 酶重量法和酶重量法-液相色谱法 |
| 英文名称 | Determination of dietary fiber in foods -- Enzymatic gravimetric method and enzymatic gravimetric method -- Liquid chromatography |
| 行业 | 国家标准 (推荐) |
| 中标分类 | X04 |
| 国际标准分类 | 67.050 |
| 字数估计 | 12,189 |
| 发布日期 | 2008-05-16 |
| 实施日期 | 2008-10-01 |
| 引用标准 | GB/T 5009.3-2003; GB/T 5009.4-2003; GB/T 5009.5-2003 |
| 采用标准 | AOAC 991.43-2000, MOD; AOAC 2001.03-2004, MOD |
| 标准依据 | 国家标准批准发布公告2008年第10号(总第123号) |
| 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 |
| 范围 | 本标准的第一法规定了酶-重量法测定食品中总、可溶性和不溶性膳食纤维的条件和详细分析步骤。本标准的第一法适用于谷类、蔬菜和水果及其制品中总、可溶性和不溶性膳食纤维的测定, 但不适用于含低分子质量的抗性麦芽糊精、寡果糖、低聚半乳糖、多聚葡萄糖和抗性淀粉等食品的膳食纤维的测定。 |
GB/T 22224-2008: 食品中膳食纤维的测定 酶重量法和酶重量法-液相色谱法
GB/T 22224-2008 英文名称: Determination of dietary fiber in foods -- Enzymatic gravimetric method and enzymatic gravimetric method -- Liquid chromatography
ICS ６７．０５０
X０４
中华人民共和国国家标准
１．１ 范围
本标准的第一法规定了酶-重量法测定食品中总、可溶性和不溶性膳食纤维的条件和详细分析步骤。
本标准的第一法适用于谷类、蔬菜和水果及其制品中总、可溶性和不溶性膳食纤维的测定，但不适
用于含低分子质量的抗性麦芽糊精、寡果糖、低聚半乳糖、多聚葡萄糖和抗性淀粉等食品的膳食纤维的测定。
１．２ 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T ５００９．３-２００３ 食品中水分的测定
GB/T ５００９．４-２００３ 食品中灰分的测定
GB/T ５００９．５-２００３ 食品中蛋白质的测定
１．３ 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准的第一法。
１．３．１具有抗消化特性，即不能被人体小肠消化吸收、而在结肠能部分或全部发酵的碳水化合物及其类似物的总和。
１．３．２包括不溶性膳食纤维（ｉｎｓｏｌｕｂｌｅｄｉｅｔａｒｙｆｉｂｅｒ，ＩＤＦ）和高分子质量在乙醇中沉淀的可溶性膳食纤维
（ｓｏｌｕｂｌｅｄｉｅｔａｒｙｆｉｂｅｒ，ＳＤＦ）。
１．４ 方法提要
干燥后的试样经热稳定α-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通过乙醇沉淀、过
滤、乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重，得到总膳食纤维（ＴＤＦ）残渣；酶解液通过直接过滤、热水洗涤残
渣、干燥后称重，得到不溶性膳食纤维（ＩＤＦ）残渣，滤液用乙醇沉淀，过滤、干燥、称重，得到可溶性膳食
纤维（ＳＤＦ）残渣。ＴＤＦ、ＩＤＦ和ＳＤＦ的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得ＴＤＦ、ＩＤＦ和ＳＤＦ含量。
１．５ 试剂和溶液除非另有说明，在分析中应使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
１．５．１ ９５％乙醇。
１．５．１．１ ８５％乙醇溶液：取８９５ｍＬ９５％乙醇置１Ｌ容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
１．５．１．２ ７８％乙醇溶液：取８２１ｍＬ９５％乙醇置１Ｌ容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
１．５．２ 热稳定α-淀粉酶溶液：ＣＡＳ９０００-８５-５，ＩＵＢ３．２．１．１，不能含丙三醇做稳定剂，０℃～５℃冰箱储存。
（１酶活力单位定义为：４０℃，ｐＨ６．５时，每分钟释放１μｍｏｌ还原糖所需要的酶量）。
１．５．２．２ 酶活力表示２：对硝基苯基麦芽糖为底物：３０００Ｃｅｒａｌｐｈａ单位／ｍＬ＋３００Ｃｅｒａｌｐｈａ单位／ｍＬ
（１个酶活力单位定义为：４０℃，ｐＨ６．５时，每分钟释放１μｍｏｌ对硝基苯基所需要的酶量）。
１．５．３ 蛋白酶：ＣＡＳ９０１４-０１-１，ＩＵＢ３．４．２１．１４，不含丙三醇稳定剂，用 ＭＥＳ-ＴＲＩＳ缓冲液配成浓度为
５０ｍｇ／ｍＬ的蛋白酶溶液，现用现配，０℃～５℃储存。
１．５．３．１ 酶活力表示１：酪蛋白测试，３００单位／ｍＬ～４００单位／ｍＬ，或７单位／ｍｇ～１５单位／ｍｇ。
注：１个酶活力单位定义为：４０℃，ｐＨ８．０时，每分钟从可溶性酪蛋白中水解出（并溶于三氯乙酸）１μｍｏｌ酪氨酸所需要的酶量；
或定义为：３７℃，ｐＨ７．５时，每分钟从酪蛋白中水解得到一定量的酪氨酸（相当于１．０μｍｏｌ酪氨酸在显色反应
中所引起的颜色变化，显色用Ｆｏｌｉｎ-Ｃｉｏｃａｌｔｅａｕ试剂）时所需要的酶量。
１．５．３．２ 酶活力表示方法２：偶氮-酪蛋白测试，３００单位／ｍＬ～４００单位／ｍＬ。
注：１个内肽酶活力单位定义为：４０℃，ｐＨ８．０时，每分钟从可溶性酪蛋白中水解出（并溶于三氯乙酸）１μｍｏｌ酪氨酸所需要的酶量。
１．５．４ 淀粉葡萄糖苷酶溶液：不能含丙三醇做稳定剂，ＣＡＳ９０３２-０８-０，ＩＵＢ３．２．１．３，０℃～５℃储存。
１．５．４．１ 酶活力表示方法１：淀粉／葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法，２０００单位／ｍＬ～３３００单位／ｍＬ。
注：１个酶活力单位定义为：４０℃，ｐＨ４．５时，每分钟释放１μｍｏｌ葡萄糖所需要的酶量。
１．５．４．２ 酶活力表示方法２：对-硝基苯基-β-麦芽糖苷（ＰＮＰＢＭ）法，１３０单位／ｍＬ～２００单位／ｍＬ。
注：１酶活力单位定义（１ＰＮＰ单位）为：４０℃时，有过量的β-葡萄糖苷酶存在下，每分钟从对-硝基苯基-β-麦芽糖苷
释放１μｍｏｌ对-硝基苯基所需要的酶量。
１．５．５ 酸洗硅藻土：ＣＡＳ６８８５５-５４-９，取２００ｇ硅藻土于６００ｍＬ的盐酸中（ＨＣｌ∶Ｈ２Ｏ＝１∶４，体积
比），浸泡过夜，过滤，用蒸馏水洗至滤液为中性，置于５２５℃±５℃马福炉中灼烧灰分后备用。
１．５．６ ２-（N-吗啉代）-磺酸基乙烷（ＭＥＳ）：ＣＡＳ４４３２-３１-９，纯度＞９９．５％。
１．５．７ 三羟甲基氨基甲烷（ＴＲＩＳ）：ＣＡＳ７７-８６-１，纯度＞９９％。
１．５．８ ＭＥＳ-ＴＲＩＳ缓冲液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ）：称取１９．５２ｇＭＥＳ和１２．２ｇＴＲＩＳ，用１．７Ｌ蒸馏水溶解，用
６ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠调ｐＨ至８．２±０．１，加水稀释至２Ｌ（注意：２４℃时ｐＨ为８．２；２０℃时ｐＨ为８．３；２８℃
时ｐＨ为８．１。一定要根据温度调ｐＨ，２０℃和２８℃之间的偏差，用内插法校正）。
１．５．９ 盐酸溶液（０．５６１ｍｏｌ／Ｌ）：取９３．５ｍＬ６ｍｏｌ／Ｌ盐酸，加入７００ｍＬ水，混匀后用水定容到１Ｌ。
１．５．１０ 石油醚：沸程３０℃～６０℃。
１．５．１１ 丙酮。
１．５．１２ 氢氧化钠。
１．６ 仪器和设备
１．６．１ 高型无导流口烧杯：４００ｍＬ或６００ｍＬ。
１．６．２ 坩埚：具粗面烧结玻璃板，孔径４０μｍ～６０μｍ。清洗后的坩埚在马福炉中５２５℃灰化６ｈ，炉温
降至１３０℃以下取出，于重铬酸钾洗液中浸泡２ｈ，分别用水和蒸馏水冲洗干净，最后用１５ｍＬ丙酮冲洗后风干。
１．６．３ 真空溶剂过滤装置：真空泵或有调节装置的抽吸器。１Ｌ的抽滤瓶，侧壁有抽滤口，以及与抽滤
瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。
１．６．４ 恒温振荡水浴：９５℃～１００℃。
１．６．５ 分析天平：感量０．１ｍｇ。
１．６．６ 天平（台秤）：４０００ｇ量程，感量０．１ｇ。
１．６．７ 马福炉：５２５℃±５℃。
１．６．８ 烘箱：１０５℃，１３０℃±３℃。
１．６．９ 真空干燥箱。
１．６．１０ 干燥器：二氧化硅或同等的干燥剂。
１．６．１１ ｐＨ计：具有温度补偿功能，精度±０．１。
１．６．１２ 微量凯氏定氮仪。
１．６．１３ 移液器：１００μＬ，５ｍＬ；一次性移液器吸头。
１．７ 试样制备
１．７．１ 脂肪含量小于１０％的食品
取混匀后的样品于７０℃真空干燥过夜，置干燥器中冷却，干样粉碎后过０．３ｍｍ～０．５ｍｍ筛。若
试样不能加热，则冷冻干燥后再粉碎过筛。粉碎过筛后的干燥试样存放于干燥器中待用。
１．７．２ 脂肪含量大于１０％的食品
取适量高温干燥或冷冻干燥的样品经石油醚分别２５ｍＬ脱脂３次，混匀后于７０℃真空干燥过夜，
置干燥器中冷却，干燥后要记录由石油醚造成的试样损失，最后计算膳食纤维含量时进行校正。粉碎过
筛后的干燥试样存放于干燥器中待用。
１．７．３ 含糖量高的食品
取适量样品每克试样加１０ｍＬ８５％乙醇处理样品２次～３次进行脱糖处理，４０℃下干燥过夜，粉碎
过筛后的干样存放于干燥器中待用。
１．８ 分析步骤
１．８．１ 水分含量测定
按GB/T ５００９．３-２００３测定试样中水分含量，用于结果计算。
１．８．２ 酶解
６００ｍＬ高型烧杯（１．６．１）中，同时制备双份空白样，在每个烧杯中加入４０ｍＬｐＨ８．２的 ＭＥＳ-ＴＲＩＳ缓
冲液，磁力搅拌，直至试样完全分散在缓冲液中。
１．８．２．２ 热稳定α-淀粉酶酶解：加５０μＬ热稳定α-淀粉酶溶液（１．５．２），加盖铝箔，置于９５℃恒温振荡
水浴中持续振摇，当烧杯内温度升至９５℃开始计时，反应３０ｍｉｎ。
１．８．２．３ 冷却：将烧杯取出，冷却至６０℃。用刮勺将烧杯内壁的环状物以及烧杯底部的胶状物刮下，
用１０ｍＬ蒸馏水冲洗烧杯壁和刮勺。
１．８．２．４ 蛋白酶酶解：在每个烧杯中各加入１００μＬ（５０ｍｇ／ｍＬ）蛋白酶溶液（１．５．３），加盖铝箔，置于
６０℃恒温振荡水浴中，当烧杯内温度达６０℃时开始计时，持续振摇反应３０ｍｉｎ。
１．８．２．５ ｐＨ 值调节：反应３０ｍｉｎ后，边搅拌边加入５ｍＬ０．５６１ｍｏｌ／Ｌ盐酸。严格控制６０℃，用
１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液或１ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液调ｐＨ至４．５±０．２。
１．８．２．６ 淀粉葡萄糖苷酶酶解：在上述溶液中边搅拌边加入１００μＬ淀粉葡萄糖苷酶溶液，加盖铝箔，
持续振摇，当烧杯内温度达到６０℃时开始计时，反应３０ｍｉｎ。
１．８．３ 测定
１．８．３．１ 总膳食纤维测定
１．８．３．１．１ 沉淀：在每份试样中，加入预热至６０℃的９５％乙醇２２５ｍＬ（预热以后的体积），乙醇与样液
的体积比为４∶１，取出烧杯，盖上铝箔，室温下沉淀１ｈ。建议改为：称量酶解液的质量，用天平（１．６．６）
加入４倍质量的预热至６０℃的９５％乙醇，４℃冰箱中沉淀过夜。
１．８．３．１．２ 过滤：在干燥的坩埚（１．６．２）中加１ｇ硅藻土，７０℃真空干燥至恒重。记录坩埚加硅藻土的
质量（精确至０．１ｍｇ）。用１５ｍＬ７８％乙醇将硅藻土润湿并用真空溶剂过滤装置（１．６．３）在抽真空条件
下使硅藻土平铺于坩埚中。将样品酶解液缓慢转移至对应的坩埚中，抽滤。用刮勺和７８％乙醇将所有残渣转至坩埚中。
１．８．３．１．３ 洗涤：分别用１５ｍＬ７８％乙醇、１５ｍＬ９５％乙醇和１５ｍＬ丙酮洗涤残渣各两次，抽滤去除
洗涤液后，将坩埚连同残渣在１０５℃烘干过夜。将坩埚置干燥器中冷却１ｈ，称重（包括坩埚、膳食纤维
残渣和硅藻土），精确至０．１ｍｇ。减去坩埚和硅藻土的干重（１．８．３．１．２），计算残渣质量。
１．８．３．１．４ 蛋白质和灰分的测定：称完质量的残渣和硅藻土的混合物，一份用GB/T ５００９．５-２００３测
定氮（Ｎ）含量，以N×６．２５为换算系数，计算蛋白质质量；另一份试样按GB/T ５００９．４-２００３测定灰
分，即在５２５℃灰化５ｈ，于干燥器中冷却，精确称量坩埚总重（精确至０．１ｍｇ），减去坩埚和硅藻土的干
重（１．８．３．１．２），计算灰分质量。
１．８．３．２ 不溶性膳食纤维测定
１．８．３．２．１ 称试样的质量按１．８．２．１进行，酶解按１．８．２．２～１．８．２．６进行。
１．８．３．２．２ 过滤洗涤：试样酶解液全部转移至坩埚中过滤，残渣用１０ｍＬ７０℃热蒸馏水洗涤两次，合
并滤液，转移至另一６００ｍＬ高脚烧杯中，备测可溶性膳食纤维（按１．８．３．３）。残渣分别用１５ｍＬ７８％
乙醇、１５ｍＬ９５％乙醇和１５ｍＬ丙酮各洗涤两次，抽滤去除洗涤液，并按１．８．３．１．３洗涤、干燥、称重，记录残渣质量。
１．８．３．２．３ 按１．８．３．１．４测定蛋白质和灰分。
１．８．３．３ 可溶性膳食纤维测定
１．８．３．３．１ 计算滤液体积：将不溶性膳食纤维过滤后的滤液收集到６００ｍＬ高型烧杯中。通过称“烧
杯＋滤液”总重，扣除烧杯质量的方法估算滤液的体积。
１．８．３．３．２ 沉淀：滤液加入４倍体积预热至６０℃的９５％乙醇，室温下沉淀１ｈ。以下测定按总膳食纤
维步骤１．８．３．１．２～１．８．３．１．４进行。
１．９ 结果计算
样品中膳食纤维含量（ＤＦ）以质量分数计，以％表示，ＴＤＦ、ＩＤＦ、ＳＤＦ均按式（１）、式（２）计算：
１．１０ 允许差在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１０％。
２ 第二法 酶重量法-液相色谱法
２．１ 范围
本标准的第二法规定了酶重量法-液相色谱法测定食品中含低分子质量抗性麦芽糊精的总膳食纤
维的条件和详细分析步骤。
本标准的第二法适用于含有抗性麦芽糊精的糖果蜜饯（含巧克力及制品）、粮食及制品、糕点、饮料、
乳制品、肉制品和保健食品等食品中总膳食纤维的测定。
２．２ 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T ５００９．３-２００３ 食品中水分的测定
GB/T ５００９．４-２００３ 食品中灰分的测定
GB/T ５００９．５-２００３ 食品中蛋白质的测定
２．３ 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准的第二法。
２．３．１包括不溶性膳食纤维（ｉｎｓｏｌｕｂｌｅｄｉｅｔａｒｙｆｉｂｅｒ，ＩＤＦ）、高分子质
量在乙醇中沉淀的可溶性膳食纤维（ｓｏｌｕｂｌｅｄｉｅｔａｒｙｆｉｂｅｒ，ＳＤＦ）和低分子质量可
溶于乙醇的可溶性抗性麦芽糊精（ｒｅｓｉｓｔａｎｔｍａｌｔｏｄｅｘｔｒｉｎ，ＲＭＤ）。
２．３．２葡萄糖聚合物的聚集体，分子质量分布为５０４（ＤＰ-３）到大于１００００（ＤＰ-６２），
平均分子质量为２０００。
２．４ 方法提要
取试样两份，在热稳定α-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶的依次作用下将试样中的淀粉、蛋白质
等酶解为溶解态的小分子。酶解液经乙醇沉淀、抽滤，用乙醇和丙酮洗涤残渣，干燥后称重，减去由两份
残渣分别测定得到的蛋白质和灰分的质量，计算出不溶性膳食纤维和在乙醇中沉淀的高分子质量可溶
性膳食纤维的总量（ＩＤＦ＋ＳＤＦ）。抽滤液经脱盐，高效液相色谱内标法定量洗脱液中的低分子质量可
溶于乙醇的抗性麦芽糊精（ＲＭＤ）。将两部分的值相加，即得到样品中的总膳食纤维（ＴＤＦ）。
２．５ 试剂和溶液除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
２．５．１～２．５．１２ 同第一法１．５．１～１．５．１２。
２．５．１３ 右旋葡萄糖：ＣＡＳ５０-９９-７，纯度＞９９．５％。
２．５．１４ 丙三醇：ＣＡＳ５６-８１-５，纯度＞９９．５％。
２．５．１５ 麦芽糊精：纯度＞９５％。
２．５．１６ 多胺基弱碱性离子交换树脂（ＯＨ-型）：在去离子水中溶胀１周后备用。
２．５．１７ 大孔强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂（Ｎａ-型）：采用以下方法转化为Ｈ-型进行活化。取５００ｇ
树脂在水中溶胀１周，水漂洗后加１２００ｍＬ水和４００ｍＬ３７％的盐酸，不时搅拌４ｈ。水漂洗后加２Ｌ
水浸泡２ｈ，重复一次，漂洗后备用。
２．５．１８ １％丙三醇标准溶液：称取丙三醇（２．５．１４）１ｇ，精确到０．１ｍｇ，加去离子水定容到１００ｍＬ。
２．５．１９ 右旋葡萄糖和丙三醇标准溶液：分别称量１０．０ｍｇ、２０．０ｍｇ、５０．０ｍｇ右旋葡萄糖标准
（２．５．１３），精确到０．１ｍｇ，各加入４ｍＬ１％的丙三醇标准溶液，用去离子水定容到２５ｍＬ。
２．５．２０ １％麦芽糊精溶液：称取麦芽糊精（２．５．１５）１ｇ，精确到０．１ｍｇ，加去离子水定容到１００ｍＬ。
２．６ 仪器和设备实验室常规仪器和以下各项。
２．６．１～２．６．１３ 同第一法的１．６．１～１．６．１３。
２．６．１４ 玻璃柱：７５ｃｍ长，１５ｍｍ内径，下端带１号砂芯，具聚四氟旋塞。
２．６．１５ 旋转蒸发仪。
２．６．１６ 高效液相色谱仪：具有示差检测器（ＲＩＤ）。
２．６．１７ 凝胶保护柱：６．０ｍｍ×４０ｍｍ，６μｍ。
２．６．１８ 凝胶色谱柱：７．８......
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