[PDF] GB/T 22917-2008 - 英文版
| 标准号码 | 美元 | 购买PDF | 工期 | 标准名称(英文版) |
| GB/T 22917-2008 | 279 | GB/T 22917-2008 | <=3 | 猪水泡病病毒荧光RT-PCR检测方法 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | GB/T 22917-2008 (GB/T22917-2008) |
| 中文名称 | 猪水泡病病毒荧光RT-PCR检测方法 |
| 英文名称 | Protocol of fluorogenic RT-PCR for swine vesicular disease virus |
| 行业 | 国家标准 (推荐) |
| 中标分类 | B41 |
| 国际标准分类 | 11.220 |
| 字数估计 | 12,114 |
| 发布日期 | 2008-12-31 |
| 实施日期 | 2009-05-01 |
| 标准依据 | 国家标准批准发布公告2008年第25号(总第138号) |
| 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 |
| 范围 | 本标准规定了猪水泡病病毒荧光RT-PCR检测的操作方法。本标准适用于动物及其产品中猪水泡病病毒的检测。 |
GB/T 22917-2008
Protocol of fluorogenic RT-PCR for swine vesicular disease virus
ICS １１．２２０
B４１
中华人民共和国国家标准
GB/T ２２９１７-２００８
猪水泡病病毒荧光RT-PCR检测方法
２００８-１２-３１发布
２００９-０５-０１实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准参考了世界动物卫生组织（ＯＩＥ）《陆生动物诊断试验和疫苗手册 （哺乳动物、禽鸟与蜜蜂）》
（第５版）。
本标准的附录Ａ为规范性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检
疫局。
本标准主要起草人：花群义、卢体康、吕建强、阮周曦、杨云庆、周晓黎、杨素、董俊、陈书琨。
GB/T ２２９１７-２００８
猪水泡病病毒荧光RT-PCR检测方法
１ 范围
本标准规定了猪水泡病病毒荧光ＲＴ-ＰＣＲ检测的操作方法。
本标准适用于动物及其产品中猪水泡病病毒的检测。
２ 缩略语
下列缩略语适用于本标准。
２．１ 荧光RT-PCR
荧光反转录-聚合酶链反应。
每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。
２．３ RNA
核糖核酸。
２．４ DEPC
焦碳酸磷酯。
２．５ PBS
磷酸盐缓冲盐水，配方见附录Ａ。
２．６ T犪狇酶
T犪狇ＤＮＡ聚合酶。
２．７ S犞D犞
猪水泡病病毒。
３ 原理
根据猪水泡病病毒的基因特定序列，合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针。引物
和探针通过严格的设计和筛选，涵盖已报道的所有猪水泡病病毒的毒株。荧光探针的５′端标记ＦＡＭ
荧光素，３′端标记ＴＡＭＲＡ荧光素，它在近距离内能吸收５′端报告荧光基团发出的荧光信号。扩增时，
由于T犪狇酶的５′→３′的外切活性，在延伸到荧光探针时，将其切断，两基团分离，淬灭作用消失，荧光信
号产生。因此，可以通过检测荧光信号对核酸模板进行检测。
４ 材料与试剂
４．１ 仪器与器材
４．１．１ 荧光ＲＴ-ＰＣＲ检测仪。
４．１．２ 高速台式冷冻离心机（离心速度１２０００ｒ／ｍｉｎ以上）。
４．１．３ 台式离心机或手掌式离心机（离心速度３０００ｒ／ｍｉｎ）。
４．１．４ 混匀器。
４．１．５ 冰箱（２℃～８℃和-２０℃两种）。
４．１．６ 微量可调移液器（５μＬ，１０μＬ，１００μＬ，１０００μＬ）及配套带滤芯吸头。
４．１．７ １．５ｍＬ、０．５ｍＬ硅化Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管：将Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管和......