标准搜索结果: 'GB/T 23527.4-2025'
| 标准编号 | GB/T 23527.4-2025 (GB/T23527.4-2025) | | 中文名称 | 酶制剂质量要求 第4部分：固定化葡萄糖异构酶制剂 | | 英文名称 | Quality requirements for enzyme preparations - Part 4: Immobilized glucose isomerase preparations | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | X60 | | 国际标准分类 | 07.100.30 | | 字数估计 | 18,133 | | 发布日期 | 2025-02-28 | | 实施日期 | 2026-03-01 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 23527.4-2025: 酶制剂质量要求 第4部分：固定化葡萄糖异构酶制剂
ICS 07.100.30
CCSX60
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 23533-2009
酶制剂质量要求
第4部分:固定化葡萄糖异构酶制剂
2025-02-28发布
2026-03-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规
定起草。
本文件规定了食品质量相关技术要求,食品安全相关要求见有关法律法规、政策和食品安全标准等
文件。
本文件是GB/T 23527《酶制剂质量要求》的第4部分。GB/T 23527已经发布了以下部分:
---第1部分:蛋白酶制剂;
---第2部分:脂肪酶制剂;
---第3部分:淀粉酶制剂;
---第4部分:固定化葡萄糖异构酶制剂。
本文件代替GB/T 23533-2009《固定化葡萄糖异构酶制剂》,与GB/T 23533-2009相比,除结构
调整和编辑性改动外,主要技术变化如下:
---更改了“范围”(见第1章,2009年版的第1章);
---更改了“葡萄糖异构酶”“固定化葡萄糖异构酶制剂”的术语和定义(见3.1、3.2,2009年版的
3.1、3.2);
---删除了“卫生要求”(见2009年版的4.4);
---更改了出厂检验项目(见6.3.1.2,2009年版的6.3.1.2);
---更改了判定规则(见6.4.2,2009年版的6.4.2);
---删除了“保质期”(见2009年版的第8章)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国食品工业标准化技术委员会(SAC/TC64)提出并归口。
本文件起草单位:中国食品发酵工业研究院有限公司、诺维信(中国)投资有限公司、广州焙乐道食
品有限公司、英联酶制剂贸易(上海)有限公司、青岛蔚蓝生物集团有限公司、武汉新华扬生物股份有限
公司、天野酶制剂(江苏)有限公司上海分公司、保龄宝生物股份有限公司、中轻食品工业管理中心、青海
桦曼棠健康科技有限公司、深圳市市场监督管理局许可审查中心、四川大学、青海大学。
本文件主要起草人:李斌、张峻炎、高铁成、裴静、詹松坤、邵静、徐丽、王友谊、李培功、高鹏、铁成鹏、
田永强、刘明、夏强、王金凤、童远洋、袁琳、程娇梅、周樱、李洋、欧阳静、王红霞、孙巧媚、汪海静。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
---2009年首次发布为GB/T 23533-2009;
---本次为第一次修订。
引 言
随着酶制剂工业的迅速发展,酶制剂种类向多元化发展,产品质量得到提升,产品品种得以丰富,行
业技术有了长足的进步与发展。制定GB/T 23527《酶制剂质量要求》,是对酶制剂的产品质量和检测
方法的规范化和标准化,是规范酶制剂及相关产品行业秩序、促进产业发展的基础性工作。
GB/T 23527《酶制剂质量要求》拟由四个部分构成:
---第1部分:蛋白酶制剂。目的在于提升蛋白酶制剂行业的产品质量。
---第2部分:脂肪酶制剂。目的在于提升脂肪酶制剂行业的产品质量。
---第3部分:淀粉酶制剂。目的在于提升淀粉酶制剂行业的产品质量。
---第4部分:固定化葡萄糖异构酶制剂。目的在于提升固定化葡萄糖异构酶制剂行业的产品
质量。
酶制剂质量要求
第4部分:固定化葡萄糖异构酶制剂
1 范围
本文件规定了固定化葡萄糖异构酶制剂的要求、检验规则和标志、包装、运输及贮存要求,并描述了
相应的试验方法。
本文件适用于固定化葡萄糖异构酶制剂的生产、检验和销售。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 191 包装储运图示标志
GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备
GB/T 602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备
GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
葡萄糖异构酶 glucoseisomerase
能将D-葡萄糖转化为D-果糖的酶。
注:以淀粉质(或糖质)为原料,经微生物发酵、提纯等工艺制得。
3.2
经载体固定化而成的葡萄糖异构酶制剂。
3.3
在规定的反应条件下,1g葡萄糖异构酶,1h转化葡萄糖产生1mg果糖,即为1个酶活力单位。
注:以“U/g”表示。
3.4
生产能力 productivity
在适宜的工作条件下,酶活力降至原活力的10%的过程中,1kg固定化酶能转化绝干葡萄糖为绝
干果葡糖的量。
4 要求
4.1 感官要求
不结块,无异味。
4.2 固定化载体
所使用的固定化载体需符合相应标准要求。
4.3 理化要求
应符合表1的规定。
表1 理化要求
项目 要求
葡萄糖异构酶活力a/(U/g) ≥ 2000
生产能力/(t/kg) ≥ 5
强度 合格
干燥失重/(g/100g) ≤ 8.0
a 也可按供需双方约定酶活力要求执行。
5 试验方法
5.1 一般要求
本文件所用试剂和水,在未注明其他要求时,均指分析纯试剂和符合GB/T 6682规定的三级水。
试验中所用标准滴定溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603
的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。
5.2 感官要求
称取样品10g,观察、嗅闻作出判断,做好记录。
5.3 葡萄糖异构酶活力
5.3.1 适用于链霉菌(Streptomycessp.)生产的葡萄糖异构酶制剂
5.3.1.1 溶液和试剂
5.3.1.1.1 葡萄糖溶液(700g/L)
称取葡萄糖70g加入沸水中,使其完全溶解,冷却后用蒸镏水定容至100mL。
5.3.1.1.2 磷酸缓冲溶液(pH=7.5)
称取磷酸二氢钠1.96g和十二水合磷酸氢二钠39.62g,用水溶解并定容至500mL,调节溶液pH
至7.5±0.05。
5.3.1.1.3 硫酸镁溶液(60g/L)
称取七水合硫酸镁12.3g,加水溶解并定容至100mL。
5.3.1.1.4 高氯酸溶液(210mL/L)
量取市售的高氯酸试剂21mL,用水定容至100mL。
5.3.1.2 分析步骤
称取适量固定化酶完整颗粒,用1mL磷酸缓冲溶液(5.3.1.1.2)于3℃~7℃浸泡16h后,加
1.5mL磷酸缓冲溶液(5.3.1.1.2),0.5mL硫酸镁溶液(5.3.1.1.3)和1.5mL葡萄糖溶液(5.3.1.1.1),再
加水调整至总体积5mL,在70℃水浴中反应1h,加入5mL高氯酸溶液(5.3.1.1.4)终止反应。
5.3.2 适用于游动放线菌(Actinoplanessp.)生产的葡萄糖异构酶制剂
5.3.2.1 溶液和试剂
5.3.2.1.1 葡萄糖溶液(540g/L)
称取无水葡萄糖54.0g加入沸水中,使其完全溶解,冷却后用蒸馏水定容至100mL。
5.3.2.1.2 磷酸缓冲溶液(pH=7.0)
称取磷酸氢二钠12.36g和十二水合磷酸二氢钠41.0g,加水溶解并定容至1000mL,调节溶液
pH至7.0±0.05。
5.3.2.1.3 硫酸镁溶液(3.66g/L)
称取七水合硫酸镁0.739g,加水溶解并定容至100mL。
5.3.2.1.4 硫酸钴溶液(0.46g/L)
称取七水合硫酸钴0.0843g,加水溶解并定容至100mL。
5.3.2.2 分析步骤
称取适量固定化酶完整颗粒,用1mL磷酸缓冲溶液(5.3.2.1.2)于3℃~7℃浸泡16h后,加
0.5mL磷酸缓冲溶液(5.3.2.1.2)、0.5mL硫酸镁溶液(5.3.2.1.3)、0.5mL硫酸钴溶液(5.3.2.1.4)和
2.5mL葡萄糖溶液(5.3.2.1.1),再加水调整至总体积5mL,在75℃水浴中反应1h,加入5mL髙氯酸
溶液(5.3.1.1.4)终止反应。
5.3.3 果糖的测定
5.3.3.1 溶液和试剂
5.3.3.1.1 半胱氨酸盐酸盐溶液(15g/L)
称取半胱氨酸盐酸盐0.375g,用水溶解定容至25mL。
5.3.3.1.2 咔唑酒精溶液(1.2g/L)
称取咔唑30.0mg,用无水酒精溶解定容至25mL,放置在棕色瓶中,24h后使用。
5.3.3.1.3 硫酸溶液
量取市售浓硫酸450mL,在不断搅拌下缓慢倒入190mL水中。
5.3.3.1.4 标准果糖溶液
称取55℃真空干燥至恒重的果糖125.0mg(精确至0.0001g),用水定容至25mL,存放于2℃~
8℃冰箱备用,使用时稀释100倍。
5.3.3.2 分析步骤
5.3.3.2.1 绘制标准曲线
取25mL比色管分别加入50μg/mL果糖标准溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL和0.8mL,分
别用蒸馏水补充至1mL后,于每管中加入0.2mL半胱氨酸盐酸盐溶液(5.3.3.1.1)、6mL硫酸溶液
(5.3.3.1.3),摇匀后,立即加入0.2mL咔唑酒精溶液(5.3.3.1.2),摇匀,于60℃水浴中保温10min,取
出,用水冷却,用10mm比色皿于560nm波长下比色,以吸光度对果糖作图,即得标准曲线。
5.3.3.2.2 样品测定
将5.3.1.2或5.3.2.2的反应终止液适当稀释后(使果糖含量在20μg/mL~30μg/mL范围内),准
确吸取1.0mL于25mL比色管,加入0.2mL半胱氨酸盐酸盐溶液(5.3.3.1.1)、6mL硫酸溶液
(5.3.3.1.3),摇匀后,立即加入0.2mL咔唑酒精溶液(5.3.3.1.2),摇匀,于60℃水浴中保温10min,取
出用水冷却,用10mm比色皿于560nm波长下比色,记录吸光度后,在标准曲线图上查得相应的果糖
含量。
5.3.4 计算
5.3.4.1 酶反应液产生果糖含量的计算
酶反应液产生果糖的含量按式(1)计算:
X1=m1×n×1000 (1)
式中:
X1 ---酶反应液产生果糖的质量,单位为毫克(mg);
m1 ---吸光度在标准曲线上查得的果糖质量,单位为微克(μg);
n ---稀释倍数;
1000 ---质量换算系数。
结果保留至整数位。
5.3.4.2 样品酶活力的计算
样品的酶活力按式(2)计算:
X2=
X1
t×m2
(2)
式中:
X2---样品的酶活力,单位为1个酶活力单位每克(U/g);
t ---样品测定过程酶反应液保温时间,单位为小时(h);
m2---样品质量,单位为克(g)。
5.3.5 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的2%。
5.3.6 固定化葡萄糖异构酶制剂
固定化葡萄糖异构酶活力的测定见附录A。
5.4 生产能力
生产能力按式(3)计算:
X3= ∑Sm3×1000 (3)
式中:
X3 ---生产能力,单位为吨每千克(t/kg);
∑S ---转化糖量的总和,单位为千克(kg);
m3 ---转化时所用固定化酶的量,单位为千克(kg)。
果葡糖中果糖含量按42%(质量分数)计。
5.5 强度
固定化酶用60℃蒸馏水浸没,缓慢搅动20h,用两个手指用力挤压,放开后不成浆(或极少量成
浆),仍硬,为合格。否则为不合格。
5.6 干燥失重
5.6.1 仪器
5.6.1.1 电热干燥箱。
5.6.1.2 分析天平:精度为0.0001g。
5.6.1.3 称量瓶:50mm×30mm。
5.6.2 分析步骤
用烘干至恒重的称量瓶称取酶样约2g,精确至0.0001g,置于103℃±2℃电热干燥箱中将盖取
下,侧放在称量瓶旁,烘干2h,取出,加盖,放入干燥器中冷却至室温,称量。
5.6.3 计算
干燥失重按照式(4)计算:
X4=
m5-m6
m5-m4×
100 (4)
式中:
X4---干燥失重,单位为克每百克(g/100g);
m4---称量瓶的质量,单位为克(g);
m5---干燥前称量瓶加样品的质量,单位为克(g);
m6---干燥后称量瓶加样品的质量,单位为克(g)。
所得结果保留至一位小数。
6 检验规则
6.1 批次
同原料、同配方、同工艺、同生产线连续生产的,质量均一的产品为一批。
6.2 抽样
6.2.1 成品抽样的样本量见表2。取样的样本量可按照估计的批量参照表2执行,或由生产企业和
(或)相关方确定。批取样量应不少于300g,不足者应按比例适当加取。
表2 抽样的样本量
批量范围/最小外包装单位 抽样的样本量/最小外包装单位 每个样本抽取单位包装数
≤50 2 1
51~500(含) 3 1
>500 4 1
注:批量范围是指批中所包含的最小外包装单位数量。抽样的样本量是指抽取样本的最小外包装单位数量。
6.2.2 取样应均匀分布在整个灌装过程中,或均匀分布于灌装后的成品中。
6.2.3 取样时应采用适宜的方法保证取样具有代表性,保证取样部位和取样瓶的清洁。
6.3 检验分类
6.3.1 出厂检验
6.3.1.1 产品出厂前,应由生产厂的质检部门按本文件规定逐批进行检验,检验合格,并附上质量合格
证明的,方可出厂。
6.3.1.2 检验项目:感官、酶活力、干燥失重。
6.3.2 型式检验
检验项目:本文件中全部要求项目。一般情况下,同一类产品的型式检验每年至少进行一次,有下
列情况之一,也应进行型式检验:
a) 原辅材料有较大变化时;
b) 更改关键工艺或设备时;
c) 新试制的产品或正常生产的产品停产3个月后,重新恢复生产时;
d) 出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时;
e) 国家监督机构按有关规定需要抽检时。
6.4 判定规则
6.4.1 出厂检验和(或)型式检验合格时,由质检部门出具产品合格证。
6.4.2 出厂检验和(或)型式检验不合格时,在原批次基础上加倍取样,对不合格项目进行复检,复检结
果只要有一项不合格,判该批产品为不合格。
7 标志、包装、运输及贮存
7.1 标志
7.1.1 产品的外包装宜使用符合GB/T 191要求的标志。
7.1.2 产品的包装上应贴有牢固的标签。标志内容应包括品名、产地、厂名、规格(葡萄糖异构酶活力
等)、生产日期、批号或代号、保质期等。
7.2 包装
包装容器应整洁、无破损。
7.3 运输
产品在运输过程中应轻拿轻放,不应雨淋和暴晒。运输工具应清洁、无毒、无污染。不应与有毒、有
害、有腐蚀性的物质混装混运。
7.4 贮存
产品应贮存在阴凉干燥的环境下。不应与有毒、有害、有腐蚀性的物品同存。
附 录 A
(资料性)
固定化葡萄糖异构酶活力的测定
A.1 原理和反应条件
A.1.1 原理
利用葡萄糖异构酶可以将葡萄糖转化为果糖的原理,把酶装填在柱子中并在标准条件下与葡萄糖
浆反应。用旋光仪检测由葡萄糖转化来的果糖,从转化速率计算酶的活力。在标准条件下每分钟转化
1μmol葡萄糖所需酶量,单位以IGIU表示。
A.1.2 反应条件
葡萄糖:450g/kg。
底物:pH=7.5。
温度:60℃。
Mg2+:99mg/L(1.0g/L七水合硫酸镁)。
Ca2+:< 2μg/g。
激活因子,SO2:100μg/g(0.18g/L焦亚硫酸钠)。
转化率:0.40~0.45。
碳酸钠缓冲液:2mmol/L。
A.2 专一性和灵敏度
本方法的定量限为160IGIU/g。
A.3 仪器和设备
A.3.1 恒温水浴:精度±0.2℃。
A.3.2 2.5cm×20cm 玻璃柱。
A.3.3 变速蠕动泵。
A.3.4 折光仪。
A.3.5 自动进样器。
A.4 试剂
本方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合GB/T 6682中水的规格,所用试剂,在未注明其
他规格时,均指分析纯。分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他
要求时,均按GB/T 601、GB/T 602和GB/T 603的规定制备。
A.4.1 硫酸镁储备液(226g/L)
称取七水合硫酸镁463.0g,用水溶解并定容至1000mL。
A.4.2 硫酸镁工作液(0.226g/L)
称取硫酸镁储备液(A.4.1)1.0mL,用水定容至1000mL,现配现用。
A.4.3 氢氧化钠溶液1(40g/L)
称取氢氧化钠40.0g,用水溶解并定容至1000mL。
A.4.4 氢氧化钠溶液2(160g/L)
称取氢氧化钠160.0g,用水溶解并定容至1000mL。
A.4.5 碳酸钠溶液(105.99g/L)
称取碳酸钠105.99g,用水溶解并定容至1000mL。
A.4.6 硫酸溶液
量取浓硫酸 27.2mL,在搅拌条件下缓慢倒入一定量的水中,待冷却至室温后用水定容至
1000mL。
A.4.7 葡萄糖底物(450g/kg,pH=7.5)
分别称取无水葡萄糖539.0g,七水合硫酸镁1.0g、碳酸钠0.21g和焦亚硫酸钠0.18g,在加热(最
高70℃)和搅拌下完全溶于700mL去离子水中。冷却至25℃,用0.5mol/L硫酸溶液(A.4.6)调节
pH至7.50±0.03,然后用去离子水定容至1000mL或定重至1199g。
分别取87.0mL硫酸镁储备液(A.4.1)、80.0mL碳酸钠溶液(A.4.5)、7.12g焦亚硫酸钠和约
28.5mL硫酸溶液(A.4.6)到上述定容的葡萄糖底物(A.4.7)中,搅拌均匀。检查溶液的pH,如需要,用
氢氧化钠溶液2(A.4.4)或硫酸溶液(A.4.6)调节pH至7.50±0.03。
A.5 标准对照品
如可能,在每次试验中应加一个标准对照品,以检查测定的稳定性。如标准对照品的检测值与标志
值超过精密度所规定的范围,需要重新进行试验。
A.6 试验步骤
A.6.1 操作过程
分析试验持续3天。其中第一天主要用来安装设备和酶样品的填柱处理,第二天用来进行预试
验,第三天用来正式测定样品的活力。
A.6.2 第一天
A.6.2.1 准备底物
按照 A.4.7的方法准备底物。
A.6.2.2 准备水浴
水浴锅中加水直到足够浸没玻璃柱(A.3.2)。设定温度60℃。达到温度后将空玻璃柱放入水
浴中。
A.6.2.3 流速选择和样品量
依据预期的样品酶活力选择样品量和配套的流速(见表 A.1)。使用前样品的预期活力先乘以0.7
作校正。
将管线接到变速蠕动泵和玻璃柱上。启动泵使管路环线中充满底物。
表A.1 样品与流速的选择
估计活力/IGIU 样品质量/g 流速/(mL/min)
550 6 1.20
500 6 1.20
440 6 1.20
420 7 1.20
380 7 1.20
350 7 1.00
320 8 1.00
280 8 1.00
250 8 0.80
220 9 0.80
190 9 0.60
160 9 0.60
A.6.2.4 样品溶胀
称取一定量的样品到100mL烧杯中,加入约40mL底物,放置60min,前15min每5min搅拌一
次,然后定时搅拌。
A.6.2.5 装填柱子
将溶胀的酶搅拌后注入玻璃柱中,烧杯中剩余的酶用硫酸镁工作液(A.4.2)清洗注入柱中。待溶胀
的酶沉降下来,将浸透1.88mmol/L的硫酸镁工作液的棉塞(0.69g~0.71g)推入柱中,距酶表面
1cm~2cm。尽量避免棉塞中有气泡。
待柱中充满液体后将柱子盖上,盖子要固定在架子上。将架子架在水浴中,架子的两翼要在水浴
外。然后将泵管连在盖子上,将出口连上出口管。检查一下,保证所有出口都能滴液。接着将架子两翼
折好,架子放下深入水浴中,盖上水浴盖。再检查一下,保证所有出口都能滴液及所有出口管都连在出
口上。
如果出口管不滴液则有可能被堵塞。这种情况下检查是否有少量固定化酶堵塞了通路。如需
要,可以采用反向通液的方法来尝试解决。
A.6.3 第二天
A.6.3.1 温度调节
在第二天和第三天收集转化产物时需保持反应环境温度的稳定。由于水浴将散发出大量的热,可
以考虑采用使用空调的方法来调节环境温度。第二天收集的第一个转化产物作为葡萄糖转化为果糖过
程的参考品。这个对照品可以用来调节流速以保证第三天活力测定时转化率在0.40~0.45之间。
A.6.3.2 pH调节
检查底物pH 为7.50±0.03。读取底物的折光值。
如果底物的pH 不是7.50±0.03,用硫酸溶液(A.4.6)或氢氧化钠溶液1(A.4.3)调节。调节
pH2h之内不能取样测定。
如果pH 在范围之内,收集转化产物约10mL用于下一步测试。
A.6.3.3 测试
向所有收集的转化产物中加入0.1mL氢氧化钠溶液1(A.4.3)以使变旋作用更快达到平衡。
从完成收集转化产物到完成测试应在45min之内,这是为了防止蒸发。收集的样品用旋光数值测
定转化率。
样品可按下列顺序测试:
用水设零→2次底物→2次水→转化产物。
重复操作直到完成所有分析。最后用2次水、2次乙醇和2......
|