路径: 主页 > GB/T > 第627页 > GB/T 27532-2011 | 标准编号 | GB/T 27532-2011 (GB/T27532-2011) | | 中文名称 | 犬瘟热诊断技术 | | 英文名称 | Diagnostic techniques for canine distemper | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 10,112 | | 发布日期 | 2011-11-21 | | 实施日期 | 2012-03-01 | | 标准依据 | 国家标准批准发布公告2011年第18号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | | 范围 | 本标准规定了犬瘟热的临床诊断、犬瘟热病毒的病原分离、免疫酶检测、免疫组织化学检测、RT-PCR检测的操作方法。本标准适用于犬瘟热的鉴定及其流行病学调查、诊断和监测。其中病毒分离、免疫酶检测、免疫组织化学检测、RT-PCR检测适用于犬瘟热的病原诊断。 | GB/T 27532-2011
Diagnostic techniques for canine distemper
ICS 11.220
B41
中华人民共和国国家标准
犬 瘟 热 诊 断 技 术
2011-11-21发布
2012-03-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准的附录A和附录B为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。
本标准起草单位:青岛农业大学动物科技学院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民
共和国山东出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:单虎、黄娟、熊炜、温建新、秦晓冰、朱来华、宫文妮、袁小远、孙园园、马晶。
犬 瘟 热 诊 断 技 术
1 范围
本标准规定了犬瘟热的临床诊断、犬瘟热病毒的病原分离、免疫酶检测、免疫组织化学检测、RT-
PCR检测的操作方法。
本标准适用于犬瘟热的鉴定及其流行病学调查、诊断和监测。其中病毒分离、免疫酶检测、免疫组
织化学检测、RT-PCR检测适用于犬瘟热的病原诊断。
2 试剂和材料
2.1 改良最低要素营养液(DMEM)培养基:配方参见附录A。
2.2 非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)。
2.3 磷酸盐缓冲液(PBS):配制参见附录A。
2.4 青霉素、链霉素:配方参见附录A。
2.5 CDV阳性血清:中和抗体效价1∶1024。
2.6 CDV阴性血清:无CDV感染的犬血清。
2.7 酶结合物:HRP标记的葡萄球菌A蛋白(SPA)。
2.8 底物溶液:配制参见附录A。
2.9 过氧化氢甲醇溶液:配制参见附录A。
2.10 盐酸酒精溶液:配制参见附录A。
2.11 胰蛋白酶溶液:配制参见附录A。
2.12 Taq酶及10倍Taq酶反应缓冲液:Taq酶浓度为5U/μL,-20℃保存。
2.13 逆转录酶及10倍逆转录酶反应缓冲液:逆转录酶浓度为50U/μL,-20℃保存。
2.14 RNA酶抑制剂(40U/μL):-20℃保存。
2.15 dNTP:含dATP、dGTP、dCTP、dTTP各10mmol/L,-20℃保存。
2.16 引物:浓度为20μmol/L,其序列如下:
2.17 随机引物:含有9个碱基的随机序列引物,浓度为50μmol/L,-20℃保存。
2.18 DEPC水:自配(参见附录A),或购买商品化DEPC水。
2.19 Trizol试剂:4℃保存。
2.20 异丙醇:使用前预冷至-20℃。
2.21 75%乙醇:用新开启的无水乙醇和DEPC水配制,使用前预冷至-20℃。
2.22 1.5mL无RNA酶的Eppendorf管。
2.23 0.......
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