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| 标准编号 | GB/T 31270.10-2025 (GB/T31270.10-2025) | | 中文名称 | 化学农药环境安全评价试验准则 第10部分：蜜蜂急性毒性试验 | | 英文名称 | Test guidelines on environmental safety assessment for chemical pesticides - Part 10: Honeybee acute toxicity test | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B13 | | 国际标准分类 | 65.100 | | 字数估计 | 22,277 | | 发布日期 | 2025-10-05 | | 实施日期 | 2026-05-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 31270.10-2014 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 | GB/T 31270.10-2025: 化学农药环境安全评价试验准则 第10部分：蜜蜂急性毒性试验
ICS 65.100
CCSB15
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 31270.10-2014
化学农药环境安全评价试验准则
第10部分:蜜蜂急性毒性试验
2025-10-05发布
2026-05-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
目次
前言 Ⅲ
引言 Ⅴ
1 范围 1
2 规范性引用文件 1
3 术语和定义 1
4 原理 2
5 试验条件 2
6 试剂和材料 2
7 仪器设备 4
8 被试物和参比物 4
9 试验步骤 4
10 试验数据处理 7
11 质量控制 7
12 试验报告 8
附录A(资料性) 蜂王产卵控制器示意图 10
附录B(资料性) 蜜蜂幼虫饲养单元孔示意图 11
附录C(规范性) 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验流程图 12
参考文献 13
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件是GB/T 31270《化学农药环境安全评价试验准则》的第10部分。GB/T 31270已经发布了
以下部分:
---第1部分:土壤代谢试验;
---第2部分:水解试验;
---第3部分:光解试验;
---第4部分:土壤吸附/解吸试验;
---第5部分:土壤淋溶试验;
---第6部分:挥发性试验;
---第7部分:生物富集试验;
---第8部分:水-沉积物系统代谢试验;
---第9部分:鸟类短期饲喂毒性试验;
---第10部分:蜜蜂急性毒性试验;
---第11部分:家蚕急性毒性试验;
---第12部分:鱼类急性毒性试验;
---第13部分:溞类急性活动抑制试验;
---第14部分:藻类生长抑制试验;
---第15部分:蚯蚓急性毒性试验;
---第16部分:土壤微生物毒性试验;
---第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验;
---第18部分:天敌两栖类急性毒性试验;
---第19部分:非靶标植物影响试验;
---第20部分:家畜短期饲喂毒性试验;
---第21部分:大型甲壳类生物毒性试验;
---第22部分:土壤表面光解试验;
---第23部分:鸟类急性经口毒性试验。
本文件代替GB/T 31270.10-2014《化学农药环境安全评价试验准则 第10部分:蜜蜂急性毒性
试验》,与GB/T 31270.10-2014相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下:
a) 增加了蜜蜂幼虫、成年工蜂、子脾的定义(见3.2、3.3、3.4);
b) 删除了被试物、化学农药、原药、制剂、有效成分、参比物质的定义(见2014年版的2.2、2.3、
2.4、2.5、2.6、2.7);
c) 增加了蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验的基本流程和目的(见4.3);
d) 增加了蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验的试验条件(见5.2);
e) 增加了试验所需的试剂和材料(见6.1、6.2);
f) 增加了蜜蜂幼虫的获取、饲养、人工饲料组成、配置及储存等要求(见6.3.2、6.4);
g) 增加了试验所需的仪器设备(见7.1、7.2、7.6);
h) 更改了被试物和参比物的要求(见8.1、8.2,2014年版的4.1.2);
i) 增加了蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验的试验过程(见9.3);
j) 更改了数据处理的相关描述,删除了寇氏法、直线内插法、概率单位图解法的规定(见10.1,
2014年版的4.3);
k) 增加了蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验的数据处理方法(见10.2);
l) 更改了质量控制要求(见11.1,2014年版的4.4);
m)增加了蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验的质量控制要求(见11.2);
n) 更改了试验报告要求(见12.1,2014年版的第5章);
o) 增加了蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验的试验报告要求(见12.2);
p) 删除了农药对蜜蜂急性毒性等级划分(见2014年版的附录A)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国农业农村部提出。
本文件由全国农药标准化技术委员会(SAC/TC133)归口。
本文件起草单位:农业农村部农药检定所、中国农业科学院植物保护研究所。
本文件主要起草人:袁善奎、朱丽珍、吴迟、陈朗、周艳明、苍涛、卜元卿、刘琼、赵常升、张海情、朱昱璇、
廖建华。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
---2014年首次发布为GB/T 31270.10-2014;
---本次为第一次修订。
引 言
为减少农药使用对生态环境的影响,提供符合农药环境风险评估要求的数据,需开展环境安全评价
试验,以明确农药在环境中的代谢、降解、吸附、淋溶、生物富集等特性及对非靶标生物的毒性。
GB/T 31270《化学农药环境安全评价试验准则》是指导我国农药环境安全评价试验的试验方法标
准,旨在规范农药环境安全评价试验工作,提高农药环境安全评价试验的科学性和可比性,由23个部分
构成。
---第1部分:土壤代谢试验。目的在于明确农药在土壤中的代谢途径和代谢速率。
---第2部分:水解试验。目的在于明确农药水解途径和水解速率。
---第3部分:光解试验。目的在于明确农药光解途径和光解速率。
---第4部分:土壤吸附/解吸试验。目的在于明确农药的土壤吸附特性。
---第5部分:土壤淋溶试验。目的在于明确农药的淋溶性。
---第6部分:挥发性试验。目的在于明确农药的挥发性。
---第7部分:生物富集试验。目的在于明确农药在鱼体内的生物富集性。
---第8部分:水-沉积物系统代谢试验。目的在于明确农药在水-沉积物系统中的代谢途径和代
谢速率。
---第9部分:鸟类短期饲喂毒性试验。目的在于明确农药对鸟类的短期饲喂毒性。
---第10部分:蜜蜂急性毒性试验。目的在于明确农药对蜜蜂的急性毒性。
---第11部分:家蚕急性毒性试验。目的在于明确农药对家蚕的急性毒性。
---第12部分:鱼类急性毒性试验。目的在于明确农药对鱼类的急性毒性。
---第13部分:溞类急性活动抑制试验。目的在于明确农药对溞类的急性毒性。
---第14部分:藻类生长抑制试验。目的在于明确农药对藻类的毒性。
---第15部分:蚯蚓急性毒性试验。目的在于明确农药对蚯蚓的急性毒性。
---第16部分:土壤微生物毒性试验。目的在于明确农药对土壤微生物的毒性。
---第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验。目的在于明确农药对赤眼蜂的毒性。
---第18部分:天敌两栖类急性毒性试验。目的在于明确农药对两栖类的急性毒性。
---第19部分:非靶标植物影响试验。目的在于明确农药对非靶标植物的毒性。
---第20部分:家畜短期饲喂毒性试验。目的在于明确农药对家畜的饲喂毒性。
---第21部分:大型甲壳类生物毒性试验。目的在于明确农药对大型甲壳类生物的毒性。
---第22部分:土壤表面光解试验。目的在于明确农药在土壤表面的光解途径和光解速率。
---第23部分:鸟类急性经口毒性试验。目的在于明确农药对鸟类的急性经口毒性。
化学农药环境安全评价试验准则
第10部分:蜜蜂急性毒性试验
警示---使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问
题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围
本文件描述了化学农药环境安全评价的蜜蜂急性毒性试验方法。
本文件适用于为化学农药登记而进行的蜜蜂成年工蜂急性经口毒性试验、急性接触毒性试验和蜜
蜂幼虫单次暴露毒性试验。本文件不适用于易挥发化学农药的毒性试验。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
NY/T 4195.1 农药登记环境影响试验生物试材培养 第1部分:蜜蜂
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
半致死剂量 medianlethaldose
在蜜蜂成年工蜂急性经口毒性试验、急性接触毒性试验和蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验中,引起
50%的供试生物死亡时被试物的剂量。
注:用LD50表示,单位为μga.i./蜂或μga.i./幼虫。
3.2
蜜蜂幼虫 larvaofhoneybee
蜜蜂卵孵化后至变态化蛹前的虫态。
3.3
成年工蜂 adultworkerhoneybee
蜂群中具备外勤采集能力和行为的蜜蜂。
3.4
子脾 broodcomb
蜂群中包含大量蜂卵、不同日龄幼虫以及蛹的巢脾。
4 原理
4.1 蜜蜂急性经口毒性
将不同剂量的被试物分散在蔗糖溶液中饲喂成年工蜂,药液消耗完后测定药液的消耗量,并换喂不
含被试物的蔗糖溶液。观察、记录48h内蜜蜂的中毒症状及死亡数,处理组24h和48h的死亡率差异
大于10%时,观察时间还应延长至最多96h。求出24h、48h和试验延长后72h、96h的LD50值及其
95%置信区间。
4.2 蜜蜂急性接触毒性
在成年工蜂被麻醉后,将不同浓度试验药液点滴在受试蜜蜂的中胸背板处,待溶剂挥发后,将蜜蜂
转入试验笼中,用不含被试物的蔗糖溶液饲喂。观察、记录48h内蜜蜂的中毒症状及死亡数,处理组
24h和48h的死亡率差异大于10%时,观察时间还应延长至最多96h。求出24h、48h和试验延长后
72h、96h的LD50值及其95%置信区间。
4.3 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验
在试验第1天(D1),分别从3个繁殖蜂群中移取1日龄蜜蜂幼虫至育王台基,然后一并放入48孔
细胞培养板,在板孔中人工标准化饲养。在试验第4天(D4),将被试物按不同浓度梯度与人工饲料混
合,按单次剂量一次性投喂蜜蜂幼虫。记录试验第5天(D5)、第6天(D6)和第7天(D7)蜜蜂幼虫的中
毒症状、异常行为以及死亡数。求出染毒72h的LD50及其95%置信区间。
5 试验条件
5.1 蜜蜂急性经口和急性接触试验在25℃±2℃,相对湿度为50%~70%,黑暗条件下进行。
5.2 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验在温度34℃~35℃,相对湿度为(95±5)%,黑暗条件下进行。观察
和饲喂时温度可出现一定的偏差,但不应低于23℃或高于40℃,且每24h内出现的偏差不应超过一
次,持续时间不应超过15min。
6 试剂和材料
6.1 试剂
6.1.1 硫酸钾(K2SO4,CAS号:7778-80-5),分析纯及以上。
6.1.2 丙酮(C3H6O,CAS号:67-64-1),分析纯及以上。
6.1.3 二甲基甲酰胺(C3H7NO,CAS号:68-12-2),分析纯及以上。
6.1.4 二甲基亚砜(C2H6OS,CAS号:67-68-5),分析纯及以上。
6.1.5 葡萄糖-D(C6H12O6,CAS号:50-99-7),分析纯及以上。
6.1.6 果糖-D(C6H12O6,CAS号:57-48-7),分析纯及以上。
6.1.7 酵母提取物(CAS号:8013-01-2),分析纯及以上。
6.1.8 蔗糖(C12H22O11,CAS号:57-50-1)。
6.1.9 蜂王浆。
6.1.10 75%酒精消毒液。
6.1.11 水为GB/T 6682规定的三级水。
6.2 材料
6.2.1 试验蜂笼(易清洁、通风好,材质可为不锈钢、金属丝网、塑料、一次性木笼等,每笼10只蜜蜂,试
验笼的大小应与蜜蜂的数量相称,提供足够的空间)。
6.2.2 蜂王产卵控制器,示意图见附录A。
6.2.3 移虫针。
6.2.4 48孔板。
6.2.5 聚苯乙烯或聚丙烯材质的育王台基,示意图见附录B。
6.2.6 饲喂器等。
6.3 供试生物
6.3.1 蜜蜂成年工蜂的获取
6.3.1.1 应采用同一蜂群的蜜蜂成年工蜂进行试验,宜选用西方蜜蜂(Apismellifera),按照
NY/T 4195.1的要求饲养,受试蜜蜂应为健康、大小一致的个体。用于急性经口毒性试验的蜜蜂应在
试验前饿2h。
6.3.1.2 不宜在早春和晚秋进行蜜蜂试验,如在早春和晚秋进行试验,应在试验环境下以蜂巢花粉饲喂
1周;蜜蜂接受抗生素、抗蜂螨药物后4周内不应用于试验。
6.3.1.3 供试蜜蜂应在清晨或前1日傍晚收集,不宜直接在蜜蜂子脾上采集。
6.3.2 蜜蜂幼虫的获取
6.3.2.1 试验用蜜蜂幼虫从3个不同的蜂群收集,蜂群健康,生活史和生理状况已知。如果在试验前对
蜂群进行了卫生处理(如蜂螨或疾病治疗),需要记录处理日期和所用药物的信息。在试验开始前4周
内,不准许对蜂群进行任何处理。
6.3.2.2 试验前将蜂王隔离在蜂箱中放置有空巢脾的蜂王产卵控制器(见附录A)内,避免将控制器放
置在蜂箱边缘。第2天检查新卵产出情况,并从产卵控制器中移出蜂王,避免在试验蜂脾上再次产卵。
蜂王的隔离时间最多不超过30h。
6.3.2.3 移虫前将移虫针、人工育王台基浸没在75%酒精(体积分数)或其他消毒液中进行至少30min
消毒后,晾干待用。蜂王产卵3天后用移虫针将1日龄的幼虫随机转移至育王台基中(移虫环境温度不
低于20℃)。为了避免由幼虫之间个体差异所产生的偏差,宜收集新孵化的幼虫,即还没有变为“C”字
形的幼虫。每个台基放入1头幼虫,在试验条件下,用人工饲料饲养。
6.4 人工饲料
6.4.1 人工饲料组成
不同日龄蜜蜂幼虫使用的3种饲料配方如下(均为质量比):
a) 饲料A∶酵母提取物∶葡萄糖∶果糖∶无菌水∶鲜蜂王浆=1∶6∶6∶37∶50;
b) 饲料B∶酵母提取物∶葡萄糖∶果糖∶无菌水∶鲜蜂王浆=1.5∶7.5∶7.5∶33.5∶50;
c) 饲料C∶酵母提取物∶葡萄糖∶果糖∶无菌水∶鲜蜂王浆=2∶9∶9∶30∶50。
6.4.2 人工饲料配制与储存
6.4.2.1 应待酵母提取物、葡萄糖、果糖完全溶解于无菌水后,再与蜂王浆混合。
6.4.2.2 整个试验期间,在每次试验开始前配制好新鲜饲料并放置在小于或等于5℃的冰箱中冷藏
储存。
7 仪器设备
7.1 恒温恒湿培养箱。
7.2 温湿度记录仪。
7.3 分析天平(感量0.0001g及以上)。
7.4 人工气候室。
7.5 微量点滴仪。
7.6 紫外杀菌灯。
8 被试物和参比物
8.1 被试物
农药原(母)药或制剂。试验开始前,宜了解被试物在水中和有机溶剂中的溶解度、饱和蒸气压数
据,以及代表性制剂的田间推荐施药量、施用方法、施用次数及施药间隔等。
8.2 参比物
选用乐果原药为参比物。
9 试验步骤
9.1 蜜蜂急性经口毒性
9.1.1 预试验
按正式试验的条件,以较大间距设置处理组,以确定正式试验的剂量范围。
9.1.2 正式试验
9.1.2.1 试验设计
根据预试验结果或已知毒性数据,按一定比例间距(几何级差小于或等于2.2)设置5个~7个处理
组,并设空白对照组,使用有机溶剂、乳化剂、分散剂等助溶的还需增设溶剂对照组。每组3个重复,每
个重复至少10只蜜蜂。
9.1.2.2 试验药液配制
如被试物可溶于水,直接用500g/L蔗糖溶液配制。对于水溶性较低的被试物,可使用有机溶剂、
乳化剂或对蜜蜂毒性较低的分散剂(如丙酮等)助溶。有机溶剂添加量不超过体系总体积的1% (体积
分数),且各处理组用量一致。
注:出于对人体健康和安全的考虑,避免使用二甲基甲酰胺和二甲基亚砜。
9.1.2.3 染毒
将蜜蜂引入试验笼中,然后在饲喂器(如离心管、注射器等)中加入100μL~200μL试验药液。待
药液消耗完(通常需要3h~4h,最多延长至6h),将饲喂器取出,换喂不含被试物的蔗糖水(不限量)。
9.1.2.4 药液消耗量测定
通过测定染毒前后食物重量计算药液消耗量。
9.1.2.5 观察
以换喂不含被试物的蔗糖水开始计时,观察并记录24h、48h后各个处理组和对照组的中毒症状
和死亡数。在对照组的死亡率小于10%的情况下,处理组24h和48h后的死亡率差异大于10%时,还
应将观察时间延长,最多至96h。
9.1.3 限度试验
设置上限剂量100μga.i./蜂,即在被试物达100μga.i./蜂时仍未见蜜蜂死亡,则无须继续试验。
如被试物溶解度小于100μga.i./蜂,则采用最大溶解度作为上限浓度。每组3个重复,每个重复至少
10只蜜蜂。
9.1.4 参比物试验
定期(至少6个月一次)进行参比物急性经口毒性试验。
9.2 蜜蜂急性接触毒性
9.2.1 预试验
按正式试验的条件,以较大间距设置处理组,以确定正式试验的剂量范围。
9.2.2 正式试验
9.2.2.1 试验设计
根据预试验结果或已知毒性数据,按一定比例间距(几何级差小于或等于2.2)设置5个~7个处理
组,同时设空白和溶剂对照组,每组3个重复,每个重复至少10只蜜蜂。
9.2.2.2 试验药液配制
被试物用丙酮等溶剂溶解,配制成不同浓度的药液。
9.2.2.3 染毒
用微量点滴仪将1.0μL~2.0μL试验药液点滴至蜜蜂中胸背板处,晾干后转入试验笼中,用50%
蔗糖水饲喂。
9.2.2.4 观察
观察并记录24h、48h后各个处理组和对照组的中毒症状和死亡数。在对照组的死亡率小于10%
的情况下,处理组24h和48h后的死亡率差异大于10%时,还应将观察时间延长,最多至96h。
9.2.3 限度试验
设置上限剂量100μga.i./蜂,即在被试物达100μga.i./蜂时仍未见蜜蜂死亡,则无须继续试验。
如被试物溶解度小于100μga.i./蜂,则采用最大溶解度作为上限浓度。每组3个重复,每个重复至少
10只蜜蜂。
9.2.4 参比物试验
定期(至少6个月一次)进行参比物急性接触毒性试验。
9.3 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验方法
9.3.1 预试验
按正式试验的条件,以5倍~10倍几何级差设置处理组,以确定正式试验的剂量范围。
9.3.2 正式试验
根据预试验结果或已知毒性数据,按一定比例间距设置至少5个处理组(几何级差小于或等于3)。
同时设置空白对照组、参比物对照组,使用溶剂助溶时还应增设溶剂对照组。每组均设3个重复,3个
重复受试幼虫应分别采自3个不同的蜂群。每个重复至少12只蜜蜂幼虫,且各个重复所使用的幼虫数
应一致,并置于同一细胞培养板中,每孔一个育王台基一只幼虫。每个处理组用一个细胞培养板,培养
板应随机摆放。
9.3.3 限度试验
设置上限剂量100μga.i./幼虫。处理组、对照组和参比物对照组均设3个重复,3个重复受试幼虫
应分别采自3个不同的蜂群。每个重复至少12只蜜蜂幼虫,且各个重复所使用的幼虫数应一致,并置
于同一细胞培养板中。如果与空白对照组相比,死亡率具有统计学上的显著性差异,应重新开展正式
试验。
9.3.4 参比物试验
每次试验均应设置参比物对照组,乐果暴露剂量为(8.8±0.5)μg/幼虫。
9.3.5 试验准备
9.3.5.1 染毒饲料的配制
染毒饲料的配制方法如下。
a) 用无菌水或有机溶剂将被试物溶解并稀释至不同浓度,需采样保存,以满足被试物储备液化学
浓度分析的要求。将不同浓度被试物溶液分别与人工饲料混合制成含被试物饲料。
b) 用无菌水溶解被试物的,饲料中被试物溶液的量不应超过最终投喂饲料量的10%(例如,第4
天投喂量为30μL最多只能加入3μL被试物溶液)。
c) 用有机溶剂溶解被试物的,饲料中被试物溶液的量不应超过最终饲料投喂量的5%(例如,第4
天投喂量为30μL,最多只能加入1.5μL被试物溶液)。如使用有机溶剂,应增设溶剂对照组。
9.3.5.2 蜜蜂幼虫的室内饲养
在试验开始时将带有1日龄幼虫的蜂脾从蜂群中取出,置于隔离容器中转移到实验室,在超净台或
其他洁净条件下,从蜂巢中用移虫针或毛笔将幼虫移入已投加饲料A的育王台基,将装有幼虫的育王
台分别放入48孔细胞培养板中。每孔中可添加一段医用牙科棉或脱脂棉用于垫高育王台基(见附
录B)。所有幼虫每天定时(±0.5h)投喂一次(除第2天),投喂前将饲料预热至20℃以上,但不应高于
35℃。第1天每头幼虫投喂20μL饲料A。第2天不需要投喂,第3天每头幼虫投喂20μL饲料B。
在整个试验过程中,尽可能密闭。
9.3.6 染毒
单次暴露毒性试验按附录C的规定进行。蜜蜂幼虫达到4日龄当天,每头幼虫投喂30μL含被试
物的饲料C。每个培养板装来自3个蜂群中各12只幼虫作为一个处理,并标注为3个重复,放在培养
箱中密封容器内的单独一层。在放进培养板之前,该容器已在培养箱中调节到34℃~35℃。
9.3.7 培养与观察
9.3.7.1 染毒后24h(第5天)、48h(第6天)每头幼虫分别投喂40μL、50μL不含被试物溶液的饲料
C,饲喂的同时检查并记录死亡数、中毒症状,取出死亡幼虫。染毒后72h(第7天)观察和记录死亡数、
中毒症状。
9.3.7.2 判断蜜蜂幼虫死亡的标准为:僵硬不动,或用移虫针、毛笔触碰无反应。
9.3.7.3 试验结束时,定性记录剩余饲料的情况。
9.3.8 试验结束
第7天,在小于或等于-10℃冷冻培养板,结束试验。
10 试验数据处理
10.1 蜜蜂急性经口和急性接触毒性试验
以表格形式总结数据,给出每个观察时间,处理组和对照组中每个重复的受试蜜蜂数量、死亡率和
中毒症状。以剂量对数为横坐标,以累积死亡百分率对应的概率单位为纵坐标,绘制每个暴露周期内的
剂量-效应曲线,并选择适宜的统计方法和程序估算LD50及其95%置信区间。
10.2 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验
10.2.1 通过Abbott公式,按公式(1)计算校正死亡率:
M =
(P-T)
100-T ×
100 (1)
式中:
M ---校正死亡率,%;
P ---被试物处理组的死亡百分比,%;
T ---空白对照组死亡百分比,%。
10.2.2 列表汇总出每个被试物处理组、空白对照组和参比物程序对照组的数据,记录受试幼虫的数
量,D5、D6和D7的死亡数(即分别为被试物处理后的24h、48h和72h)。用适当的统计学方法(如概
率单位法、移动平均、二项式概率等)分析死亡数据。在每个观察时间点绘制剂量反应曲线(即被试物处
理后的24h、48h和72h)在95%置信限计算曲线斜率和半数致死量(LD50)。用被试物质量与幼虫数
量之比表示LD50,单位为μga.i./幼虫。
11 质量控制
11.1 蜜蜂急性经口毒性和急性接触毒性试验质量控制条件包括:
a) 试验结束时,对照组死亡率不超过10%;
b) 参比物乐果对蜜蜂急性经口试验结果LD50(24h)应在0.10μga.i./蜂~0.35μga.i./蜂范围之
内,乐果对蜜蜂急性接触试验结果LD50(24h)应在0.10μga.i./蜂~0.30μga.i./蜂范围之内。
11.2 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验质量控制条件包括:
a) 从第4天到第7天,对照组的幼虫累积死亡率应小于或等于15%;
b) 到第7天,参比物处理组中幼虫累积校正死亡率应大于50%。
12 试验报告
12.1 蜜蜂急性经口毒性试验和蜜蜂急性接触毒性试验
应至少包括下列内容。
a) 被试物:
1) 供试农药的通用名称、化学名称、结构式、化学文摘登记号(CAS号)、化学鉴定数据、纯
度、来源等;
2) 被试物基本理化性质(水中溶解性、溶剂中溶解性、蒸气压)等。
b) 供试生物:
1) 供试蜜蜂的引种来源、种属、学名等基本情况;
2) 收集试验用蜂的采集方法、采集日期、大概日龄(以周计算)、健康状况、饲养情况、预处
理等。
c) 试验条件:
1) 试验温度以及相对湿度;
2) 试验容器条件,包括蜂笼类型、尺寸大小和材质;
3) 试验给药方法,包括使用的载体溶剂、使用的试验溶液的体积、使用的麻醉方式等;
4) 试验设计,例如,所使用试验浓度和数量,对照组数量,各处理重复数以及每笼中蜜蜂
数量;
5)试验开展的地点和日期。
d) 试验结果:
1) 预试验浓度范围;
2) 每个观察时间点死亡率的原始数据;
3) LD50统计分析方法;
4) 试验药液的浓度,LD50(24h)、LD50(48h)值和95%置信区间,在对照组的死亡率低于
10%的情况下,若处理24h和48h后的死亡率差异达到10%以上时,还需将观察时间最
多延长至96h,并给出所采用的计算方法;
5) 对照组蜜蜂死亡数量及异常反应;
6) 观察到的其他生物效应,如受试蜜蜂的任何不正常的行为(包括被试物达到一定剂量
时,蜜蜂拒食情况)、处理组和对照组食物的消耗量、中毒症状等;
7) 任何偏离试验准则的情形与结果评价。
12.2 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验
应至少包括下列内容。
a) 被试物:
1) 供试农药的通用名称、化学名称、结构式、化学文摘登记号(CAS号)、化学鉴定数据、纯
度、来源等;
2) 被试物基本理化性质(水中溶解性、溶剂中溶解性、蒸气压)等。
b) 供试生物:
1) 蜜蜂的来源、种类及亚种、来源供应商及所使用的培养条件;
2) 试验所用蜂群的健康状况。
c) 试验条件:
1) 试验地点及日期;
2) 幼虫试验系统的描述:所用培养板的类型,每个处理组和对照组所用幼虫的数量所用溶剂
及其浓度(如有),被试物的试验浓度;
3) 幼虫试验培养条件:温度(平均值、标准偏差、最大值和最小值)、相......
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