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| 标准编号 | GB/T 5750.12-2006 (GB/T5750.12-2006) | | 中文名称 | 生活饮用水标准检验方法 微生物指标 | | 英文名称 | Standard examination methods for drinking water -- Microbiological parameters | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | C51 | | 国际标准分类 | 13.060 | | 字数估计 | 34,317 | | 发布日期 | 2006-12-29 | | 实施日期 | 2007-07-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 5750-1985部分 | | 标准依据 | 中国国家标准批准发布公告 2006年第12号(总第99号) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 5750.12-2006: 生活饮用水标准检验方法 微生物指标
GB/T 5750.12-2006 英文名称: Standard examination methods for drinking water -- Microbiological parameters
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
GB/T 5750.12—2006
部分代替 GB/T 5750—1985
生活饮用水标准检验方法
微生物指标
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部
中国国家标准化管理委员会
发 布
1 菌落总数
1.1 平皿计数法
1.1.1 范围
本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。
本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。
1.1.2 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
1.1.2.1
菌落总数 standard plate-count bacteria
水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48 h 后，所得1 mL 水样所含菌落的总数。
1.1.3 培养基与试剂
1.1.3.1 营养琼脂
1.1.3.1.1 成分：
A 蛋白胨 10g
B 牛肉膏 3g
C 氯化钠 5g
D 琼脂 10g～20g
E 蒸馏水 1000mL
1.1.3.1.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整 pH 为7.4～7.6,分装于玻璃容器中(如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤),经103.43 kPa(121℃,151b) 灭菌20 min,储存于冷暗处备用。
1.1.4 仪器
1.1.4.1 高压蒸汽灭菌器。
1.1.4.2 干热灭菌箱。
1.1.4.3 培养箱36℃±1℃。
1.1.4.4 电 炉
1.1.4.5 天平。
1.1.4.6 冰箱。
1.1.4.7 放大镜或菌落计数器。
1.1.4.8 pH 计或精密 pH 试纸。
1.1.4.9 灭菌试管、平皿(直径9 cm)、刻度吸管、采样瓶等。
1.1.5 检验步骤
1.1.5.1 生活饮用水
1.1.5.1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL 充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15 mL 已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验 时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
1.1.5.1.2 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养48 h, 进行菌落计数，
即为水样1 mL 中的菌落总数。
1.1.5.2 水源水
1.1.5.2.1 以无菌操作方法吸取1 mL 充分混匀的水样，注入盛有9 mL 灭菌生理盐水的试管中，混匀 成1:10稀释液。
1.1.5.2.2 吸取1:10的稀释液1 mL 注入盛有9 mL 灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释 液。按同法依次稀释成1:1000,1:10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1 mL灭菌吸管。
1.1.5.2.3用灭菌吸管取未稀释的水样和2个～3个适宜稀释度的水样1 mL,分别注入灭菌平皿内以下操作同生活饮用水的检验步骤。
1.1.6 菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数 后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿 有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片 状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落 数。然后再求该稀释度的平均菌落数。
1.1.7 不同稀释度的选择及报告方法
1.1.7.1 首先选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范 围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中实例1)。
1.1.7.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数(如表1中实例2)。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数(如表1中实例3)。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数(见表1中实例4)。
1.1.7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告 之(见表1中实例5)。
1.1.7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中实例6)。
1.1.7.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘 以稀释倍数报告之(见表1中实例7)。
1.1.7.6 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。
1.1.7.7如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其 中2个平板1 cm² 中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.6 cm², 再乘其稀 释倍数作报告。
1.1.7.8菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两 位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示(见表 1“报告方式”栏)。
2 总大肠菌群
2.1 多管发酵法
2.1.1 范围
本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。
本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。
2.1.2 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
2.1.2.1
总大肠菌群 total coliforms
总大肠菌群指一群在37℃培养24 h 能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢 杆菌。
2.1.3 培养基与试剂
2.1.3.1 乳糖蛋白胨培养液
A 蛋白胨 10 g
B 牛肉膏 3 g
C 乳糖 5 g
D 氯化钠 5 g
E 溴甲酚紫乙醇溶液(16 g/L) 1 mL
F 蒸馏水 1000 mL
2.1.3.1.2 制法
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH 为7.2～7.4,再加入1mL16 酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68.95 kPa(115℃,101b) 高压灭菌20 冷暗处备用。
2.1.3.2 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
按上述乳糖蛋白胨培养液(2.1.3.1),除蒸馏水外，其他成分量加倍。
2.1.3.3 伊红美蓝培养基
2.1.3.3.1 成分
A 蛋白胨 10 g
B 乳糖 10 g
C 磷酸氢二钾 2 g
D 琼脂 20 g～30g
E 蒸馏水 1000 mL
F 伊红水溶液(20 g/L) 20 mL
G 美蓝水溶液(5 g/L) 13 mL
2.1.3.3.2 制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH 为7.2,加入乳糖，混匀后分装，以68.95 kPa (115℃,101b) 高压灭菌20 min。 临用时加热融化琼脂，冷至50℃~55℃,加入伊红和美蓝溶液，混匀， 倾注平皿。
2.1.3.4 革兰氏染色液
2.1.3.4.1 结晶紫染色液
2.1.5 检验步骤
2.1.5.1 乳糖发酵试验
2.1.5.1.1 取 1 0mL 水样接种到10 mL 双料乳糖蛋白胨培养液中，取1 mL 水样接种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1mL 水样注入到9 mL 灭菌生理盐水中，混匀后吸取1mL(即0.1 mL水样)注入到10 mL 单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种5管。
对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接种5份10 mL 水样双料培养基， 每份接种10 mL 水样。
2.1.5.1.2 检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1,0.1,0.01 mL......
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