路径: 主页 > NY/T > 第28页 > NY/T 543-2002 | 标准编号 | NY/T 543-2002 (NY/T543-2002) | | 中文名称 | 牛流行热微量中和试验方法 | | 英文名称 | Micro-neutralization test for bovine ephemeral fever | | 行业 | 农业行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 10,148 | | 发布日期 | 2002-08-27 | | 实施日期 | 2002-12-01 | | 范围 | 本标准规定了牛流行热微量血清中和试验技术。本标准适用于牛流行热的诊断、免疫监测和流行病学调查。 | NY/T 543-2002
Micro-neutralization test for bovine ephemeral fever
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中华人民共和国农业行业标准
牛流行热微量中和试验方法
中华人民共和国农业部 发 布
前言
牛流行热（简称 ＢＥＦ）又称牛暂时热、三日热、一日热、僵硬病等，本病在亚、非和大洋洲许多国家均
有发生。该病是由弹状病毒科暂时热病毒属牛流行热病毒引起的一种急性、热性传染病，呈周期性流行。
在发病期间，对牛的产奶量、使役能力、增重、精液品质都有严重影响，还可导致少数病牛瘫痪，流产甚至
死亡。严重危害养牛业的发展。
本标准是根据我国科研成果，与澳大利亚合作研究成果和我国的实践经验制定的。
本标准的附录 Ａ、附录 Ｂ、附录 Ｃ为规范性附录，附录 Ｄ为资料性附录。
本标准由农业部畜牧兽医局提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。
本标准主要起草人：白文彬 、严隽端。
牛流行热微量中和试验方法
范围
本标准规定了牛流行热微量血清中和试验技术。
本标准适用于牛流行热的诊断、免疫监测和流行病学调查。
微量血清中和试验
. 器材
.. 营养液和 ０.０５％胰酶 ＥＤＴＡ（简称 ＡＴＶ）液，配制方法见附录 Ａ。
.. 细胞及其制备、传代、计数方法，见附录 Ｂ。
.. 抗原（指示毒）、标准阳性血清、阴性血清由法定单位提供，按说明书使用。抗原毒价以及工作抗
原（１００ＴＣＩＤ５０）测定方法见附录 Ｃ。
.. 微量滴定板：无菌带盖 ９６孔微量滴定板（简称微量板）。
.. 微量加样器：２５μＬ、５０μＬ及 １００μＬ单道和多道加样器，加样塑料滴头（装量为 ２５μＬ～
１００μＬ，与加样器配套使用）。
.. 二氧化碳培养箱。
. 操作方法
.. 灭活
被检血清以及阴、阳性血清用前均于 ５６℃水浴锅中灭活 ３０ｍｉｎ。
.. 准备
制备工作抗原（指示毒）方法（见第 Ｃ.１章），将已知毒价的合格种毒用生长液（见第 Ａ.１章）稀释成
.. 定性试验
... 向微量板的每孔各加 ２５μＬ生长液。
... 在第一排加被检血清，每份占 ２孔，每孔 ２５μＬ，混合均匀，即成 ２倍稀释。
... 用多道加样器从第 １孔取 ２５μＬ液体对应移入第 ２排孔内，混匀即成 ４倍稀释。再从孔内吸
出 ２５μＬ丢弃。
... 每孔加工作抗原 ２５μＬ，混匀置 ３７℃孵育 ６０ｍｉｎ。
... 每孔加细胞悬液 １００μＬ（３００００个细胞）。细胞计数方法见第 Ｂ.３章。
... 试验对照系统的设置。每批试验的对照系统的设置：标准阳性血清，从第 １列至第 ６列，每列
４孔，逐列稀释（即２倍～６４倍），标准阴性血清、细胞对照和病毒对照各 １列４孔。同时对本试验使用的
工作抗原，随同试验再次进行测定。
... 用灭菌的盖子盖上微量板，置 ３７℃二氧化碳（ＣＯ２）培养箱内，培养 ５ｄ。从第 ３ｄ起逐日记录
细胞病变效应（ＣＰＥ）。
... 结果判定：标准阳性血清中和抗体价≥６４，标准阴性血清、病毒对照排各孔均出现 ＣＰＥ，工作
抗原含量滴定在规定的范围之内（ＣＰＥ出现的孔数与毒价查阅方法见第 Ｄ.......
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