路径: 主页 > NY/T > 第28页 > NY/T 679-2003 | 标准编号 | NY/T 679-2003 (NY/T679-2003) | | 中文名称 | 猪繁殖与呼吸综合症免疫酶试验方法 | | 英文名称 | Enzyme immunoassay for porcine reproductive and respiratory syndrome | | 行业 | 农业行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 6,687 | | 发布日期 | 2003-07-30 | | 实施日期 | 2003-10-01 | | 范围 | 本标准规定了猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)免疫酶试验和免疫酶组织化学方法。 本标准适用于检测猪血清中的猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)抗体和组织中的PRRSV抗原。 | NY/T 679-2003
Enzyme immunoassay for porcine reproductive and respiratory syndrome
ICS １１．２２０
B４１
中华人民共和国农业行业标准
NY／T６７９-２００３
猪繁殖与呼吸综合症免疫酶试验方法
２００３-０７-３０发布
２００３-１０-０１实施
中华人民共和国农业部 发 布
前言
本标准的附录Ａ为规范性附录。
本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。
本标准起草单位：农业部兽医诊断中心。
本标准主要起草人：王宏伟、王传彬、陈西钊、田克恭。
NY／T６７９-２００３
猪繁殖与呼吸综合症免疫酶试验方法
１ 范围
本标准规定了猪繁殖与呼吸综合症（ＰＲＲＳ）免疫酶试验和免疫酶组织化学方法。
本标准适用于检测猪血清中的猪繁殖与呼吸综合症病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体和组织中的ＰＲＲＳＶ抗原。
２ 免疫酶试验
２．１ 材料准备
２．１．１ 试剂
２．１．１．１ 磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）：配制见第Ａ．１章。
２．１．１．２ 抗原涂片的制备：ＰＲＲＳＶ接种于生长至７０％～８０％单层的 Ｍａｒｃ-１４５细胞。接种后３ｄ～
４ｄ，病变达５０％～７５％时，用胰蛋白酶消化分散感染的细胞单层，ＰＢＳ洗涤三次后，稀释至１×１０６ 个细
胞／ｍＬ。取印有１０个～４０个小孔的室玻片，每孔滴加１０μＬ。室温自然干燥后，冷丙酮（４℃）固定
１０ｍｉｎ。密封包装，置-２０℃备用。
２．１．１．３ 标准阳性血清：ＰＲＲＳＶ试验感染猪制备的血清。
２．１．１．４ 标准阴性血清：无ＰＲＲＳＶ感染、未经免疫的猪血清。
２．１．１．５ 酶结合物：辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）。
２．１．１．６ 底物溶液：配制见第Ａ．２章。
２．１．２ 器材
ａ） 普通光学显微镜；
ｂ） 印有１０个～４０个小孔的室玻片；
ｃ） 微量加样器，容量５μＬ～５０μＬ；
ｄ） ３７℃恒温培养箱或水浴箱。
２．１．３ 样品
采集被检猪血液，分离血清。血清应新鲜、透明、不溶血、无污染，密装于灭菌小瓶内，４℃或-３０℃
保存或立即送检。试验前将被检血清统一编号，并用ＰＢＳ作１０倍稀释。
２．２ 操作方法
２．２．１ 取出抗原涂片，室温干燥后，滴加１０倍稀释的待检血清和标准阴性血清、标准阳性血清，每份血
清加两个病毒细胞孔和一个正常细胞孔，置湿盒内，３７℃３０ｍｉｎ。
２．２．２ ＰＢＳ漂洗三次，每次５ｍｉｎ，室温干燥。
２．２．３ 滴加适当稀释的酶结合物，置湿盒内，３７℃３０ｍｉｎ。
２．２．４ ＰＢＳ漂洗三次，每次５ｍｉｎ。
２．２．５ 将室玻片放入底物溶液中，室温下显色５ｍｉｎ～１０ｍｉｎ。ＰＢＳ漂洗两次，再用蒸馏水漂洗-次。
２．２．６ 吹干后，在普通光学显微镜下观察，判定结果。
２．３ 结果判定
２．３．１ 在阴性血清对照、阳性血清对照成立的情况下：即阴性血清与正常细胞和病毒感染细胞反应均
无色；阳性血清与正常细胞反应无色，与病毒感染细胞反应呈棕黄色至棕褐色，即可判定结果；否则应
重试。
２．３．２ 待检血清与正......
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