路径: 主页 > SN/T > 第63页 > SN/T 0762-2011 | 标准编号 | SN/T 0762-2011 (SN/T0762-2011) | | 中文名称 | 猪瘟病毒荧光RT-PCR检测方法 | | 英文名称 | Protocol of real-time RT-PCR for detection of classical swine fever virus | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 字数估计 | 11,139 | | 发布日期 | 2011-05-20 | | 实施日期 | 2011-12-01 | | 引用标准 | GB/T 6682 | | 标准依据 | 国质检认(2011)291号;认办科函[2015]247号 | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了猪瘟病毒荧光RT-PCR检测的操作方法。本标准适用于猪及其产品中猪瘟病毒的检测。 | SN/T 0762-2011
Protocol of real-time RT-PCR for detection of classical swine fever virus
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
猪瘟病毒荧光RT-PCR检测方法
2011-05-20发布
2011-12-01实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国上海出入境检验检疫局、上海市复星医学科技发展有限公司。
本标准主要起草人:李春阳、刘俊平、熊炜、单松华、黄忠荣、夏懿、胡永强、李树清、王巧全。
猪瘟病毒荧光RT-PCR检测方法
1 范围
本标准规定了猪瘟病毒荧光RT-PCR检测的操作方法。
本标准适用于猪及其产品中猪瘟病毒的检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
荧光RT-PCR:荧光反转录-聚合酶链式反应
Ct值:每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数
RNA:核糖核酸
DEPC:焦碳酸乙二酯
Taq酶:TaqDNA聚合酶
4 原理
猪瘟病毒是有囊膜的正链RNA病毒。根据猪瘟病毒不同分离株基因的保守序列,设计一对特异
性引物和一条特异性的荧光双标记探针。探针与病毒基因的保守序列结合,其结合部位位于引物扩增
区域内。探针的5’端标记FAM 荧光素,它发出的荧光能够被检测仪器接收,称为报告荧光基团(用
R表示),3’端标记TAMRA荧光素,它在近距离内能吸收5’端报告荧光基团发出的荧光信号,称为淬
灭荧光基团(用Q表示)。PCR反应进入退火阶段时,引物和探针同时与目的基因片段结合,此时探针
上R基团发出的荧光信号被Q基团所吸收,仪器检测不到荧光信号;PCR反应进行到延伸阶段时,Taq
酶发挥其5’→3’外切核酸酶的功能将探针酶切水解,与此同时标记在探针上的R基团游离出来,R所
发出的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反应的进行,PCR产物与荧光信号的增长
呈对应关系。
5 设备、材......
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