路径: 主页 > SN/T > 第65页 > SN/T 1446.1-2004 | 标准编号 | SN/T 1446.1-2004 (SN/T1446.1-2004) | | 中文名称 | 猪传染性胃肠炎阻断酶联免疫吸附试验 | | 英文名称 | Blocking ELISA for transmissible gastroenteritis of swine | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 7,778 | | 发布日期 | 2004-06-01 | | 实施日期 | 2004-12-01 | | 标准依据 | 国质检认(2010)290号;行业标准备案公告2010年第10号(总第130号) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 | | 范围 | 本标准规定了猪传染性胃肠炎阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)试验方法;本标准适用于猪传染性胃肠炎的检疫、流行病学调查、抗体水平检测以及与猪呼吸道冠状病毒(PRCV)感染的区别诊断; | SN/T 1446.1-2004
Blocking ELISA for transmissible gastroenteritis of swine
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T１４４６．１-２００４
猪传染性胃肠炎
阻断酶联免疫吸附试验
２００４-０６-０１发布
２００４-１２-０１实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准的附录Ａ为规范性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：李健、胡永强、王巧全、李树清。
本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
SN／T１４４６．１-２００４
猪传染性胃肠炎
阻断酶联免疫吸附试验
１ 范围
本标准规定了猪传染性胃肠炎阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试验方法。
本标准适用于猪传染性胃肠炎的检疫、流行病学调查、抗体水平检测以及与猪呼吸道冠状病毒
（ＰＲＣＶ）感染的区别诊断。
２ 仪器设备、试剂和材料
２．１ 仪器设备
普通天平、分析天平、２００μＬ可调移液器、精密滴头、恒温箱、酶标仪、洗板机等。
２．２ 试剂
配制见附录Ａ。所有化学试剂均为分析纯。
２．３ 材料
２．３．１ 猪传染性胃肠炎标准抗原微量板。
２．３．２ 标准ＴＧＥＶ阳性对照血清、ＴＧＥＶ／ＰＲＣＶ阴性对照血清、ＰＲＣＶ阳性对照血清。
２．３．３ 标准抗ＴＧＥＶ单克隆抗体、抗ＴＧＥＶ／ＰＲＣＶ单克隆抗体。
２．３．４ 辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的抗鼠ＩｇＧ：商业采购，使用前对同一批号的产品进行工作浓度
测定。
３ 操作程序
３．１ 样品
血清或血浆。
３．２ 操作步骤
３．２．１ 使用前取出所有试剂，平衡到室温（２０℃～２５℃）。将反应板／条做好标记。
３．２．２ 用洗液洗板三次，每次５ｍｉｎ，最后一次拍干去除所有残留液体。
３．２．３ 立即分别加入ＴＧＥＶ、ＰＲＣＶ阳性对照血清和ＴＧＥＶ／ＰＲＣＶ阴性对照血清到相应血清对照
孔，１００μＬ／孔。具体添加见图１。
３．２．４ 用多通道移液器添加ＰＢＳＴ到所有样品孔，５０μＬ／孔。然后加入未稀释的待检血清，５０μＬ／孔，
每份样品两孔。见图１。
３．２．５ 密封微量板，３７℃温育２ｈ。
３．２．６ 按３．２．２操作洗板。
３．２．７ 立即加入工作浓度的标准抗ＴＧＥＶ单克隆抗体和抗ＴＧＥＶ／ＰＲＣＶ单克隆抗体，到对应血清
孔，１００μＬ／孔（见图１）。
３．２．８ 密封微量板，室温（２０℃～２５℃）温育３０ｍｉｎ。
３．２．９ 按３．２．２操作洗板。
３．２．１０ 加入工作浓度的ＨＲＰ标记抗鼠ＩｇＧ，１００μＬ／孔，密封微量板，室温（２０℃～２５℃）温育３０ｍｉｎ。......
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