[PDF] SN/T 1474-2004 - 英文版
| 标准号码 | 美元 | 购买PDF | 工期 | 标准名称(英文版) |
| SN/T 1474-2004 | 319 | SN/T 1474-2004 | <=3 | 传染性造血器官坏死病毒逆转录聚合酶链式反应操作规程 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | SN/T 1474-2004 (SN/T1474-2004) |
| 中文名称 | 传染性造血器官坏死病毒逆转录聚合酶链式反应操作规程 |
| 英文名称 | Infectious hematopoietic necrosis virus reverse transcriptase polymerase chain reaction operating procedures |
| 行业 | 商检行业标准 (推荐) |
| 中标分类 | B50 |
| 国际标准分类 | 67.120.30 |
| 字数估计 | 8,853 |
| 发布日期 | 2004-11-17 |
| 实施日期 | 2005-04-01 |
| 标准依据 | 2005 Bulletin No. 3 industry standard |
| 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 |
SN/T 1474-2004
Infectious hematopoietic necrosis virus reverse transcriptase polymerase chain reaction operating procedures
书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T１４７４-２００４
传染性造血器官坏死病毒逆转录聚合酶链
式反应操作规程
２００４-１１-１７发布
２００５-０４-０１实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准的附录Ａ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：高隆英、刘荭、史秀杰、江育林。
本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
SN／T１４７４-２００４
传染性造血器官坏死病毒逆转录聚合酶链式反应操作规程
１ 范围
本标准规定了用逆转录聚合酶链式反应技术检测传染性造血器官坏死病毒的方法。
本标准适用于鱼类传染性造血器官坏死病的检测。
２ 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T １８０８８ 出入境动物检疫采样
３ 试剂和材料
３．１ ＩＨＮＶ标准毒株：由ＯＩＥ参考实验室或国家质量监督检验检疫局、农业部等有关部门指定提供。
３．２ 水：试剂配制（见附录 Ａ）用水应符合 GB ６６８２中一级水的规格，并要用 ＤＥＰＣ处理，除去
ＲＮＡ酶。
３．３ T犪狇酶：-２０℃保存，避免温度剧烈变化。
３．４ ＡＭＶ逆转录酶：-２０℃保存，避免温度剧烈变化。
３．５ ＲＮＡ酶抑制剂：-２０℃保存，避免温度剧烈变化。
３．６ ｄＮＴＰ（含ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ各１０ｍｍｏＬ／Ｌ）。
３．７ 引物：所选取的基因为ＩＨＮＶ的Ｎ基因（参见附录Ｂ）中的片段，两对引物，浓度为４０μｍｏｌ／Ｌ，Ｆ１
和Ｒ１扩增该基因中的７８６ｂｐ片断，而Ｆ２和Ｒ２则从７８６ｂｐ片断中再扩增３２３ｂｐ片断。
上游引物Ｒ１：５’-ＴＣＡ-ＡＧＧ-ＧＧＧ-ＧＡＧ-ＴＣＣ-ＴＣＧ-Ａ-３’，
下游引物Ｆ１：５’-ＣＡＣ-ＣＧＴ-ＡＣＴ-ＴＴＧ-ＣＴＧ-ＣＴＡ-Ｃ-３’，
上游引物Ｒ２５’-ＴＴＣ-ＧＣＡ-ＧＡＴ-ＣＣＣ-ＡＡＣ-ＡＡＣ-ＡＡ-３’，
下游引物Ｆ２５’-ＧＣＧ-ＣＡＣ-ＡＧＴ-ＧＣＣ-ＴＴＧ-ＧＣＴ-３’。
３．８ 无水乙醇：分析纯，使用前预冷到-２０℃。
４ 仪器和设备
ＰＣＲ扩增仪、电泳仪、紫外透射仪、普通冰箱、低温冰箱、台式离心机、电子天平、高速冷冻离心机、
微量移液器及吸头、恒温培养箱、电动匀浆器、剪刀、镊子、离心管和ＰＣＲ管。
５ 操作方法
５．１ 采样
对鱼的解剖取样，如果是体长小于４ｃｍ的鱼苗取整条鱼，４ｃｍ～６ｃｍ的鱼苗取内脏（包括肾）；体
长大于６ｃｍ的鱼则取脑、肝、肾、脾。成熟雌鱼还需取卵巢液。而鱼的采样数量见GB/T １８０８８。
５．２ RNA抽提
将取得的组织放入１．５ｍＬ的离心管中，用眼科剪......