路径: 主页 > SN/T > 第65页 > SN/T 1699.1-2006 | 标准编号 | SN/T 1699.1-2006 (SN/T1699.1-2006) | | 中文名称 | 猪流行性腹泻微量血清中和试验操作规程 | | 英文名称 | Protocol of micro-serum neutralization test for porcine epidemic diarrhea | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 6,651 | | 发布日期 | 2006-01-26 | | 实施日期 | 2006-08-16 | | 引用标准 | GB/T 6682 | | 标准依据 | Industry Standard Notice 2006 No. 4 (total of 76) | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | SN/T 1699的本部分规定了猪流行性腹泻微量血清中和实验操作技术要求。本部分适合于猪流行性腹泻微量血清中和抗体检测。 | SN/T 1699.1-2006
Protocol of micro-serum neutralization test for porcine epidemic diarrhea
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T１６９９．１-２００６
猪流行性腹泻微量血清中和
试验操作规程
２００６-０１-２６发布
２００６-０８-１６实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
ＳＮ/T １６９９分为三部分：
---猪流行性腹泻微量血清中和试验操作规程；
---猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程；
---猪流行性腹泻间接斑点酶联免疫吸附试验操作规程。
本部分为ＳＮ/T １６９９的第１部分。
本部分参照国际动物卫生组织（ＯＩＥ）的标准《诊断方法和疫苗标准手册》，２００４年第五版，并参考
中华人民共和国进出境动物检疫规程手册制定。
本部分的附录Ａ为规范性附录。
本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本部分起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局。
本部分起草人：罗长保、林志雄、朱道中、颜思通。
本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
SN／T１６９９．１-２００６
猪流行性腹泻微量血清中和
试验操作规程
１ 范围
ＳＮ/T １６９９的本部分规定了猪流行性腹泻微量血清中和试验操作技术要求。
本部分适用于猪流行性腹泻微量血清中和抗体检测。
２ 规范性引用文件
下列文件中的条款通过ＳＮ/T １６９９的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文
件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成
协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本
部分。
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和实验方法
３ 设备和材料
３．１ 猪流行性腹泻病毒株：已适应于传代细胞生长的猪流行性腹泻病毒ＰＥＤＶ-Ｇ１毒株。
３．２ 猪流行性腹泻阳性对照血清。
３．３ 猪流行性腹泻阴性对照血清。
３．４ 细胞：ＰＫ-１５传代细胞。
３．５ ９６孔微量细胞培养板。
３．６ 微量移液器。
３．７ 被检血清。
３．８ 细胞培养液（Ｅａｒｇｌｅ’ｓＭＥＭ）。
３．９ 本标准所用水应符合GB/T ６６８２中二级水的规格。
４ 操作方法
４．１ 病毒增殖
在ＰＫ-１５细胞形成单层后倒掉培养液，将病毒液接种到单层细胞上，摇匀后置３７℃５％二氧化碳培
养箱吸附１ｈ，吸附期间摇匀一次，然后加入含５％犊牛血清细胞培养液（Ｅａｒｇｌｅ’ｓＭＥＭ）。每天观察细
胞病（ＣＰＥ），ＣＰＥ达到７５％～９５％时收获。反复冻融三次后分装，置-７０℃保存，待测定毒价后使用。
４．２ 毒价测定
在９６孔微量板每孔加入５０μＬ培养液，将上述病毒液用培养液按１０倍递减法在另外的容器内稀
释成１０-１～１０-８个稀释度。用移液器将每一稀释度的病毒液分别移入８个孔内，每孔５０μＬ。将培养
好的ＰＫ-１５细胞制备成２０×１０４／ｍＬ～３０×１０４／ｍＬ的悬液，在每个试验孔内加１００μＬ，每孔总量为
２００μＬ。另设不加病毒液的８个细胞孔作为对照，用５０μＬ培养液代替病毒液。置３７℃５％二氧化碳
培养箱中培养７２ｈ，每天观察ＣＰＥ，７２ｈ判......
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