路径: 主页 > SN/T > 第84页 > SN/T 3449-2012 | 标准编号 | SN/T 3449-2012 (SN/T3449-2012) | | 中文名称 | 昆虫介体中植原体检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Detection and identification of candidatus phytoplasma in insect vector | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 字数估计 | 14,112 | | 标准依据 | 国质检认(2012)777号;行业标准备案公告2013年第4号(总第160号) | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了昆虫介体中植原体的检疫和鉴定方法。本标准适用于进出境及国内监测中同翅目和半翅目(具刺吸式口器)昆虫体内植原体的检疫和鉴定。 | SN/T 3449-2012
Detection and identification of candidatus phytoplasma in insect vector
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
昆虫介体中植原体检疫鉴定方法
2012-12-12发布
2013-07-01实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国宁夏出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:赵文军、陈岩、杨毅、杨旭光、牟海青、朱水芳。
昆虫介体中植原体检疫鉴定方法
1 范围
本标准规定了昆虫介体中植原体的检疫和鉴定方法。
本标准适用于进出境及国内监测中同翅目和半翅目(具刺吸式口器)昆虫体内植原体的检疫和
鉴定。
2 原理
根据传播植原体的昆虫介体种类(参见附录A)及植原体的分子生物学特性进行鉴定。
3 仪器和试剂
3.1 仪器设备
PCR仪、超净工作台、高压灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式小型离心机、超
低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器、移液器、电泳仪、凝胶成像系统。
3.2 主要试剂
甘油、75%乙醇、无水乙醇、冰醋酸、三氯甲烷、卡诺固定液(无水乙醇∶冰醋酸∶三氯甲烷=6∶1∶3)、
昆虫保存液(75%乙醇,1%甘油)、PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、TAE电泳缓冲
液、DNA相对分子质量标准、SYBRGreenⅠ等。
4 检测鉴定方法
4.1 昆虫的前处理
昆虫饥饿处理12h,以防止昆虫肠道内食物DNA的污染。
4.2 昆虫体内植原体基因组DNA提取
昆虫体内植原体基因组DNA的提取方法(见附录B)。
4.3 巢式PCR扩增及凝胶电泳检测
用两对植原体扩增通用引物进行巢式PCR扩增并进行凝胶电泳检测(见附录C)。
4.4 虚拟RFLP指纹图谱检测
见附录D。
5 结果判定
5.1 在4.3检测中,若用通用引物R16F2n/R16R2进行第二轮PCR后,PCR扩增产物经凝胶电泳检
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