路径: 主页 > SN/T > 第56页 > SN/T 5140-2019 | 标准编号 | SN/T 5140-2019 (SN/T5140-2019) | | 中文名称 | 出口动物源食品中磺胺类药物残留量的测定 | | 英文名称 | (Determination of sulfa drugs in foods of animal origin for export) | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | | | 字数估计 | 42,446 | | 发布日期 | 2019-10-25 | | 实施日期 | 2020-05-01 | | 旧标准 (被替代) | SN 0498-1995; SN/T 2580-2010; SN/T 1965-2007 | | 标准依据 | 海关总署公告2019年第166号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 5140-2019: 出口动物源食品中磺胺类药物残留量的测定
SN/T 5140-2019 英文名称: (Determination of sulfa drugs in foods of animal origin for export)
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T５１４０-２０１９代替ＳＮ０４９８-１９９５、ＳＮ/T １９６５-２００７、ＳＮ/T ２５８０-２０１０
出口动物源食品中磺胺类药物
残留量的测定
中华人民共和国海关总署 发 布
１ 范围
本标准规定了出口动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、
磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺
甲基异唑、磺胺二甲异唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯
吡啶１９种磺胺类药物残留的液相色谱和液相色谱-质谱／质谱测定方法。
本标准第一法适用于畜禽肌肉、水产品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲
嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧
啶、磺胺甲基异唑、磺胺二甲异唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹啉和磺胺苯吡啶１７种磺胺
类药物残留量的液相色谱法检测；第二法适用于畜禽肌肉、肝脏、水产品、鸡蛋、牛奶、脂肪、蜂蜜和蜂王
浆中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺
胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异唑、磺胺二甲异唑、苯酰
磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡啶１９种磺胺类药物残留量的液
相色谱-质谱／质谱法检测和确证。
２ 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 第一法 高效液相色谱法（HPLC法）
３．１ 方法提要
试样中的磺胺类药物经乙酸乙酯提取，提取液经正己烷脱脂后用固相萃取柱净化，高效液相色谱仪
测定，外标法定量。
３．２ 试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T ６６８２规定的一级水。
３．２．１ 甲醇，ＨＰＬＣ级。
３．２．２ 乙酸乙酯，ＨＰＬＣ级。
３．２．３ 正己烷。
３．２．４ 乙酸，ＨＰＬＣ级。
３．２．５ 氨水，优级纯。
３．２．６ 乙酸铵，ＨＰＬＣ级。
３．２．７ 氯化钠。
３．２．８ ２ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液：准确称取０．１５４克乙酸铵（３．２．６）于烧杯中，用５００ｍＬ水溶解并转移至
１Ｌ容量瓶中，用水定容至刻度。
SN／T５１４０-２０１９
３．２．９ 流动相Ｂ（０．３％乙酸-２ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液）：吸取３ｍＬ乙酸（３．２．４）至１Ｌ的２ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液（３．２．８）中，摇匀备用。
３．２．１０ 饱和氯化钠溶液：称取５０ｇ氯化钠（３．２．７）于具塞三角瓶中，加入１００ｍＬ水，摇匀备用。
３．２．１１ 洗脱液（５％氨甲醇）：量取５ｍＬ氨水（３．２．５）和９５ｍＬ甲醇（３．２．１）置于聚丙烯试剂瓶中，摇匀备用。
３．２．１２ 定容液１：量取５０ｍＬ甲醇和５０ｍＬ流动相Ｂ（３．２．９）置于具塞三角瓶中，摇匀备用。
３．２．１３ 定容液２：量取２０ｍＬ甲醇和８０ｍＬ流动相Ｂ（３．２．９）置于具塞三角瓶中，摇匀备用。
３．２．１４ １７种磺胺类药物标准品：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异
唑、磺胺二甲异唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹啉和磺胺苯吡啶１７种磺胺类化合物的中
英文名、ＣＡＳ号、分子式和分子量见表Ａ．１，纯度均大于９５％。
３．２．１５ 磺胺标准储备液：准确称取适量１７种磺胺类化合物标准品（３．２．１４），用甲醇配制成浓度为
５００μｇ／ｍＬ的标准储备液。３．２．１６ 磺胺混合标准中间液（１０ｍｇ／Ｌ）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（３．２．１５）至５０ｍＬ容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为１０ｍｇ／Ｌ标准中间液。
３．２．１７ 磺胺混合标准中间液（１．０ｍｇ／Ｌ）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（３．２．１６）至５０ｍＬ容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为１．０ｍｇ／Ｌ标准中间液。
３．２．１８ 标准曲线：按准确吸取一定量的磺胺标准混合中间液（３．２．１７）、定容液１（３．２．１２）于液相色谱进样瓶中，摇匀备用。该标准曲线溶液即配即用。
３．２．１９ 混合型阳离子交换固相萃取柱（１５０ｍｇ，６ｍＬ）或性能相当者，使用前依次用５ｍＬ甲醇、５ｍＬ流动相Ｂ（３．２．９）活化。
３．３ 仪器和设备
３．３．１ 高效液相色谱仪配紫外或二极管阵列检测器。
３．３．２ 均质器，配备直径１９ｍｍ均质刀。
３．３．３ 超声波振荡器。
３．３．４ 高速离心机，４０００ｒ／ｍｉｎ，８５００ｒ／ｍｉｎ。
３．３．５ 肉类组织粉碎机。
３．３．６ 减压旋转蒸发仪。
３．３．７ 吹氮浓缩仪。
３．３．８ 漩涡振荡器。
３．３．９ 离心管：具塞，５０ｍＬ。
３．３．１０ 滤膜：０．２μｍ，聚四氟乙烯滤膜。
３．４ 试样的制备与保存
３．４．１ 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留量含量的变化
３．４．２ 畜禽肌肉、水产品：取有代表性样约５００ｇ，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于-１８℃下保存。
３．５ 测定步骤
３．５．１ 提取
称取经制备的试样５ｇ（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入１５ｍＬ乙酸乙酯（３．２．２）超声
１０ｍｉｎ，用均质器以１４０００ｒ／ｍｉｎ均质３０ｓ，提取液以４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。上清液转移至１００ｍＬ
茄形瓶中。另取一５０ｍＬ离心管，加入１５ｍＬ乙酸乙酯以洗涤均质刀头１０ｓ。洗涤液转入前一离心管
SN／T５１４０-２０１９
中，用玻棒捣碎下层残渣，超声１０ｍｉｎ，在涡旋振荡器上振荡２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液合
并至茄形瓶中。４０℃减压旋转蒸发至干。
残渣用２．０ｍＬ定容液１（３．２．１２）溶解，涡旋振荡１ｍｉｎ，超声５ｍｉｎ。加入１．０ｍＬ饱和氯化钠
（３．２．１０），振荡０．５ｍｉｎ。加入５ｍＬ 正己烷（３．２．３），涡旋振荡０．５ｍｉｎ，转移至１５ｍＬ离心管中，
３５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ分层。弃去上层正己烷，再按上法加入５ｍＬ正己烷脱脂一次，下层清液备用待
净化。
３．５．２ 净化
脱脂后吸取１．５ｍＬ下层澄清液加入５．０ｍＬ流动相Ｂ（３．２．９），移至已活化的混合型阳离子交换固
相萃取柱（３．２．１９）中，流速维持在１ｍＬ／ｍｉｎ。然后用５ｍＬ流动相Ｂ，２ｍＬ甲醇淋洗，流速１ｍＬ／ｍｉｎ，
真空抽干。用８ｍＬ洗脱液（３．２．１１）洗脱，流速１ｍＬ／ｍｉｎ，真空抽干，收集洗脱液。４０℃减压旋转蒸发
至干。残渣用１．０ｍＬ定容液２（３．２．１３）溶解，超声５ｍｉｎ，涡旋振荡２ｍｉｎ，经０．２μｍ滤膜过滤后，供液相色谱仪测定。
３．６ 测定
３．６．１ 高效液相色谱条件
高效液相色谱条件如下：
ａ） 色谱柱：Ｃ１８柱，４．６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ，５μｍ，或相当者；ｂ） 流动相：流动相Ａ：甲醇＋流动相Ｂ：０．３％乙酸２ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液，梯度洗脱程序见表１；
ｃ） 流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；
ｄ） 柱温：３０℃；
ｅ） 进样量：４０μＬ；ｆ） 检测波长：２６８ｎｍ；
３．６．２ 液相色谱测定
按照３．６．１液相色谱测定条件对标准工作溶液及样液等体积参插进样测定，样品中待测物含量应
在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应进行适当稀释后测定。在该条件下，１７种磺胺类
化合物的标准物质色谱图参见附录Ｂ中图Ｂ．１，保留时间参见附录Ｂ表Ｂ．１。
３．７ 空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。
３．８ 结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（１）计算试样中磺胺类药物的含量，计算结果应扣除空白值：
３．９ 测定低限
本方法的测定低限为１０μｇ／ｋｇ。
３．１０ 回收率
畜禽肌肉、水产品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧
啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异唑、
磺胺二甲异唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹啉和磺胺苯吡啶１７种磺胺药物的添加浓度及回
收率数据见附录Ｃ中表Ｃ．１～表Ｃ．３。
４ 第二法 液相色谱-质谱／质谱法（LC-MS／MS法）
４．１ 方法提要
试样中的磺胺类药物经乙酸乙酯和５０％三氯乙酸溶液提取，乙腈饱和正己烷脱脂，固相萃取柱净
化，液相色谱-质谱／质谱仪测定，内标法定量。
４．２ 试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T ６６８２规定的一级水。无特别说明，其他试剂和材
料的要求与３．２一致。
４．２．１ 甲酸，ＨＰＬＣ级。
４．２．２ 三氯乙酸，ＨＰＬＣ级。
４．２．３ ５０％三氯乙酸：准确称取５０ｇ三氯乙酸（４．２．２）于烧杯中，用５０ｍＬ水溶解并转移至１００ｍＬ容
量瓶中，用水定容至刻度。
４．２．４ ５％甲醇：量取５ｍＬ甲醇（３．２．１）和９５ｍＬ水置于具塞三角瓶中，摇匀备用。
４．２．５ ５ｍｍｏｌ／Ｌ甲酸溶液：吸取９６μＬ甲酸（４．２．１）至５００ｍＬ水中，摇匀备用。４．２．６ 定容液：量取２０ｍＬ甲醇和８０ｍＬ５ｍｍｏｌ／Ｌ甲酸溶液（４．２．５），摇匀备用。
４．２．７ １９种磺胺类药物标准品：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对
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甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异
唑、磺胺二甲异唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡啶，
１９种磺胺类化合物的中英文名、ＣＡＳ号、分子式和分子量见表Ａ．１，纯度大于等于９５％。
４．２．８ 磺胺标准储备液：准确称取适量１９种磺胺类化合物标准品（４．２．７），用甲醇配制成浓度为
５００μｇ／ｍＬ的标准储备液。４．２．９ 磺胺混合标准中间液（１０ｍｇ／Ｌ）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（４．２．８）至５０ｍＬ容量瓶中，
用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为１０ｍｇ／Ｌ标准中间液。
４．２．１０ 磺胺混合标准中间液（１．０ｍｇ／Ｌ）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（４．２．９）至５０ｍＬ容量瓶
中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为１．０ｍｇ／Ｌ标准中间液。
４．２．１１ 磺胺混合标准工作液（１００ｎｇ／ｍＬ）：准确吸取５００μＬ磺胺标准混合标准中间液（４．２．１０）至具塞玻璃试管中，准确加入４．５０ｍＬ甲醇，混匀，现配现用。
４．２．１２ 磺胺同位素内标储备液（１０μｇ／ｍＬ）：磺胺同位素内标溶液（１＃，２＃，３＃）：１０μｇ／ｍＬ，１．０ｍＬ，北京振翔公司。１５种磺胺同位素内标分别为：磺胺喹恶啉-１３Ｃ６、磺胺嘧啶-１３Ｃ６、磺胺甲基异唑-１３Ｃ６、磺胺甲基嘧啶-１３Ｃ６、磺胺二甲基嘧啶-１３Ｃ６、磺胺甲氧哒嗪-Ｄ３、磺胺邻二甲氧嘧啶-Ｄ３、磺胺氯哒嗪-１３Ｃ６、磺胺间二甲氧嘧啶-Ｄ６、磺胺吡啶-１３Ｃ６、磺胺噻唑-１３Ｃ６、磺胺吡啶-１３Ｃ６、磺胺甲噻二唑-１３Ｃ６、磺胺二甲异
唑-１３Ｃ６、磺胺苯吡唑-１３Ｃ６，１５种磺胺同位素内标化合物的中英文名、分子式和分子量见表Ａ．１。
４．２．１３ 磺胺同位素内标混合中间液（１．０ｍｇ／Ｌ）：分别吸取适量的磺胺同位素内标溶液（１＃，２＃，３＃）
（４．２．１２）至１０ｍＬ容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为１．０ｍｇ／Ｌ标准中间液。
４．２．１４ 磺胺同位素内标混合工作液（１００ｎｇ／ｍＬ）：准确吸取５００μＬ磺胺内标混合中间液（４．２．１３）至具塞玻璃试管中，准确加入４．５０ｍＬ甲醇，混匀，现配现用。
４．２．１５ 空白基质溶液：将不同基质的阴性空白样品分别按照４．５和４．６处理后得到的溶液。
４．２．１６ 标准曲线：按准确吸取一定量的磺胺标准混合工作液（４．２．１）、磺胺内标混合工作液（４．２．１４）、空
白基质溶液于液相色谱进样瓶中，摇匀备用。该标准曲线溶液即配即用。
４．２．１７ 混合型阳离子交换固相萃取柱（１５０ｍｇ，６ｍＬ）或性能相当者，使用前依次用５ｍＬ甲醇、５ｍＬ
水活化。
４．２．１８ Ｃ１８固相萃取柱（２００ｍｇ，３ｍＬ）或性能相当者，使用前用５ｍＬ甲醇活化。
４．３ 仪器和设备
４．３．１ 液相色谱-质谱／质谱仪：三重四级杆串联质谱仪，配电喷雾离子源（ＥＳＩ）。
４．３．２ 其他仪器和设备的要求与３．３一致。
４．４ 试样的制备与保存
４．４．１ 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留量含量的变化
４．４．２ 畜禽肌肉、肝脏、脂肪、水产品、鸡蛋：取有代表性样约５００ｇ，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于-１８℃下保存。
４．４．３ 牛奶和蜂蜜：取有代表性样约５００ｇ，混合均匀，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于４℃
下保存。
４．４．４ 蜂王浆：取有代表性样约５００ｇ，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分
别装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于-１８℃下保存。
４．５ 提取与净化
４．５．１ 畜禽肌肉、肝脏、脂肪和水产品
称取经制备的试样５ｇ（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入５０μＬ１．０ｍｇ／Ｌ内标混合中间液
（４．２．１３），加入１５ｍＬ乙酸乙酯（３．２．２）超声１０ｍｉｎ，用均质器以１４０００ｒ／ｍｉｎ均质３０ｓ，提取液以
４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。上清液转移至２５ｍＬ比色管中。取另一５０ｍＬ离心管，加入１０ｍＬ乙酸乙酯
以洗涤均质刀头１０ｓ。洗涤液转入前一离心管中，用玻棒捣碎下层残渣，超声１０ｍｉｎ，在涡旋振荡器上
振荡２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液合并至比色管中，用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。分取５ｍＬ
于１５ｍＬ试管中，４０℃吹氮浓缩至干。
残渣用２．０ｍＬ定容液（４．２．６）溶解，涡旋振荡１ｍｉｎ，超声５ｍｉｎ。加入５ｍＬ正己烷（３．２．３），涡旋
振荡３０ｓ，转移至１５ｍＬ离心管中，３５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。弃去上层正己烷，再加入５ｍＬ正己烷脱
脂一次，下层溶液转移至１．５ｍＬ离心管中，以１００００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，经０．２μｍ滤膜过滤后，供液相色谱-质谱／质谱仪测定。
４．５．２ 鸡蛋、牛奶和蜂蜜
称取５ｇ（精确至０．０１ｇ）试样于５０ｍＬ离心管中，加入５０μＬ１．０ｍｇ／Ｌ内标混合中间液（４．２．１３），加入１０ｍＬ水和２ｍＬ５０％三氯乙酸溶液（４．２．３），涡旋混匀２ｍｉｎ，加水定容至２５ｍＬ，涡旋混匀３０ｓ，
８５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。取５．０ｍＬ上清液移至已活化的混合型阳离子固相萃取柱（４．２．１７）中，流速维
持在１ｍＬ／ｍｉｎ。１５ｍＬ水淋洗，３ｍＬ５％甲醇溶液（４．２．４）淋洗，抽干后加入８ｍＬ洗脱液（３．２．１１）洗
脱，收集洗脱液，４０℃吹氮浓缩至干，２ｍＬ定容液（４．２．６）溶解残渣，超声５ｍｉｎ，涡旋振荡２ｍｉｎ，经
０．２μｍ滤膜过滤后，供液相色谱-质谱／质谱仪测定。
４．５．３ 蜂王浆
称取２ｇ（精确至０．０１ｇ）试样于５０ｍＬ离心管中，加入５０μＬ１．０ｍｇ／Ｌ内标混合中间液（４．２．１３），加入１０ｍＬ水和２ｍＬ５０％三氯乙酸溶液（４．２．３），涡旋混匀２ｍｉｎ，加水定容至２０ｍＬ，涡旋混匀３０ｓ，
８５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。取５．０ｍＬ上清液移至已活化的混合型阳离子固相萃取柱（４．２．１７）中，流速维
持在１ｍＬ／ｍｉｎ。１５ｍＬ水淋洗，３ｍＬ５％甲醇溶液（４．２．４）淋洗，抽干后加入８ｍＬ洗脱液（３．２．１１）洗
脱，收集洗脱液，４０℃吹氮浓缩至干，用１０ｍＬ甲醇分３次洗涤浓缩瓶，甲醇溶液移至已活化的Ｃ１８固相
萃取柱（４．２．１８）中，流速维持在１ｍＬ／ｍｉｎ，直接收集流出液，４０℃吹氮浓缩至干，１ｍＬ定容液（４．２．６）
溶解残渣，超声５ｍｉｎ，涡旋振荡２ｍｉｎ，经０．２μｍ滤膜过滤......
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