路径: 主页 > MISC > 第347页 > WS/T 349-2011 | 标准编号 | WS/T 349-2011 (WS/T349-2011) | | 中文名称 | α-淀粉酶催化活性浓度测定参考方法 | | 英文名称 | Reference procedure for the measurement of catalytic activity concentration of α-amylase | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C50 | | 国际标准分类 | 11.020 | | 字数估计 | 35,316 | | 发布日期 | 2011-09-30 | | 实施日期 | 2012-04-01 | | 引用标准 | ISO 15193-2009 | | 采用标准 | JCTLM《IFCC 37℃酶催化活性浓度测定原级参考方法 第8部分:α-淀粉酶催化浓度测定参考方法》, MOD | | 标准依据 | 卫通(2011)16号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了在临床医学应用中, 测定α-淀粉酶(AMY)催化活性浓度的参考方法。本标准主要适用于参考实验室, 作为α-淀粉酶催化活性浓度测定的溯源, 也可作为与酶催化活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源, 可供有关认可单位及质量管理部门应用。 | WS/T 349-2011: α-淀粉酶催化活性浓度测定参考方法
WS/T 349-2011 英文名称: Reference procedure for the measurement of catalytic activity concentration of α-amylase
ICs 11,020
C50
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
Ws/T 349ˉˉ 2ˉ011
OI-淀粉酶催化活性浓度测定参考方法
1 范 围
本标准规定 了在临床医学应用 中 ,测 定 贮淀粉酶 (AMY)催化活性浓度的参考方法 。
本标准主要适用于参考实验室 ,作 为 旷淀粉酶催化 活性浓度测定 的溯源 ,也 可作 为与酶催化 活性
浓度检验有关 的仪器和试剂生产企业 的溯源 ,可 供有关认可单位及质量管理部 门应用 。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件 的应用是必不可少的。凡是注 日期 的引用文件 ,仅 所注 日期 的版本适用 于本
文件 。凡是不注 日期 的引用文件 ,其最新版本 (包括所有 的修改单 )适用于本文件 。
3 术语和缩略语
3.1 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件 。
3.1.1原始样本
最初从一个 系统 中取 出的一个或几个部分的集合物 ,旨在提供该 系统 的信息或作 为对该系统出决定的基础 。
注:在某些情况下,所提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统 ,此 时取样系统是这些系统的组成部分。
3.1.2实验室样本
准备送到实验室或实验室接收的用于测定 的原始样本或原始样本的分样本 。
3.1,3分析样本
自实验室样本制备 的、可从 中取 出分析部分 的样本 。
注:在取出分析部分之前 ,分析样本可经过各种处理。
3.1.4多
从分析样本 中取出的用于实际测定和观察 的物质部分 。
注:如果不需预处理 ,分析部分直接从原始样本或实验室样本中取出。某些情况下 ,
需将分析部分溶解成分析溶液再上机测定。
3.1.8测定系统的灵敏度
简称灵敏度
测定系统的示值变化除以相应的被测定值变化所得的商。
注 1:测 定系统的灵敏度可能与被测定的量值有关 。
注 2:所考虑的被测定值的变化必须大于测定系统的分辨力 。
4 参考方法描述
4.1 测定原理和方法
4.2 检查列表
4.2.1 试剂列表
将所用试剂按表 1列出。
4.2.2 分光光度计和辅助仪器列表
参考实验室应在表 2登记主要测定仪器 (分光光度计)和 主要辅助仪器 (点式温度计、天平、pH计、
恒温水浴箱、稀释配液仪、移液器等 )。
4.3 试剂
4.3.1 试剂原料信息
按表 3填写试剂原料详细信息。
4.3.2 试剂溶液
4.3,2.1 一般要求
制备溶液时各成分给出的质量是指 100%含量。如果化学物质的含量低于 100%E例如 γ(%)],则
应用因子 :凡。n弪nt=100/γ,计算出与给出质量相当的某化学物质的质量。
溶液的制备应使用质量 与双蒸水类 似 的高纯度水 (电 导率 <2uS·cm1,pH6~7,硅酸盐(0.1mg·Lˉ l)。
每次称重的扩展 (乃 =2)不确定度 (包括物质纯度的不确定度×正态分布 ),应≤1.5%。 称量时显示
的值与靶值的差异不应超过±0.5%。
4.3.2,2 溶液 1
称量 6.14g氯化钙 (二水合物),将上述物质按以下步骤处理 :
--溶在约 80mL水中 ;
--转移至 100mL容量瓶中 ;
--将容量瓶和水平衡至 zO℃;
--加水 (20℃ )至容量瓶的刻度线。
最终配制的溶液中氯化钙浓度为 狃7.5mmol·L】 。该溶液 ⒛ ℃稳定性为 3个月。
4.3.2.3 溶液 2
称量 3,10gN-2-羟基乙基哌嗪-N’ 乙基磺酸、1.26g氯化钠 ,将上述物质按以下步骤处理 :
--溶在约 200mL水中 ;
--加入 0.75mL溶液 1;
--用 0.2mol·Ll的NaOH溶液调节 pH至7。 00(37℃ );
--转移至 250mL容量瓶 ;
--将容量瓶和水平衡至 20℃ ;
--加水 (20℃ )至容量瓶刻度线。
最终配制 的溶液中 N-2-羟基 乙基哌嗪-N’ -乙 基磺酸浓度为 52,10mmol·L1、 氯化钠浓度为
86.13mmol·Ll。该溶液 2℃ ~8℃稳定性为 5周 。
4.3.2.4 酶试剂稀释液
称量 1,⒛ g牛血清白蛋白、0.90g Naα,将上述物质按以下步骤处理 :
--溶于约 80mL水中 ;
--转移至 100mL容量瓶 ;
--将容量瓶和水平衡至 20℃ ;
--加水 (20℃ )至容量瓶刻度线。
最终配制的溶液中 Nac1浓度为 154mmol·Ll。该溶液 2℃~8℃稳定性至少 1个月。
4.3.2.5 溶液 3
按以下步骤配制 :
--用 4.3.2.4中 的酶试剂稀释液稀释 Ⅱ葡萄糖苷酶储存液 ,使 旷葡萄糖苷酶催化活性浓度在
37℃ 时为 16.9mkat·LI(101⒋ kU·L1),按公式 (1)计算稀释 cx葡萄糖苷酶储存液所需酶试剂稀释液体积
4.3.2.6 反应溶液
分别移取 25mL溶液 2、 0.25mL溶液 3,充分混匀。该溶液 2℃ ~8℃稳定性为 2周 。
4.3.2.7 起始试剂溶液
称量 1。 01g4,6-亚乙基 (G1)△-硝基苯 (G7)-α -(⒈)4)-冫麦芽七糖、0.310gN-2-羟基乙基哌嗪-
N’-乙 基磺酸 ,将 上述物质按以下步骤处理
--溶在约 ⒛ mL水中 ;
--用 0.2mol·L1的 NaOH溶液调节 pH至7。 00(37℃ );
--转移至 25mL容量瓶 ;
--将容量瓶和水平衡至 ⒛ ℃ ;
--加水 (20℃ )至刻度线。
最终配制的溶液中 4,⒍亚乙基(G1)叫-硝基苯(G㈥ -盱(1->4)-D麦 芽七糖浓度为31。 00mmol·Lˉ l、
N-2-羟基乙基哌嗪-N’ -乙 基磺酸浓度为 52.10mmol·L1。 该溶液 2℃~8℃稳定性为 2周 。
4.3.3 温度对缓冲溶液 pH的影晌
4.3.3.1 pH计的校准
指示剂摩尔消光系数明显依赖于 pH值。因此 ,应 准确地校准 pH计和调整溶液 2和起始试剂的
pH值。使用至少两种标准缓冲液进行校准 ,标准缓冲液的定值应包括 pH6至pH8的范围和试剂溶液
需调整的 pH值。pH标准缓冲液的不确定度应≤ 0。 01pH。
注 1:推 荐使用磷酸二氢钾(无水)和磷酸氢二钠(无水〉制备pH标准缓冲液。商品化的可溯源至国家或国际标准
物质的有证标准缓冲液已有出售。
注2:指示剂摩尔消光系数明显依赖于(4-硝基苯)pH值,pH值降低 0.01会 引起约 1%动 力学的改变,因 此,pH值必需调得很准确。
4.3.3.2 pH值的调节
当温度偏离 37℃ 时 ,调 节 pH值的方法 :将 温度计与 pH电极同时浸入混合液中。然后将溶液边
搅拌边滴定至表中列举在当前测定温度下的 pH值。在校准、控制和调节 pH的过程中 ,搅拌速度要一
致。pH电极应位于被搅拌溶液的中心。
应考虑到在调节 pH的滴定过程中 ,温度是可能改变的因素。为此 ,接 近靶值时应重新控制温度 ,
如果需要 ,根据附录 A调整 pH靶值 。同样的方法也适用于 pH计的温度补偿调节 。
配制溶液 2、 起始试剂溶液时 ,需根据不同温度......
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