路径: 主页 > MISC > 第353页 > WS/T 632-2018 | 标准编号 | WS/T 632-2018 (WS/T632-2018) | | 中文名称 | 巴贝虫检测 血涂片镜检法 | | 英文名称 | Detection of Babesia spp. - Blood smear microscopy examination method | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C61 | | 字数估计 | 13,168 | | 发布日期 | 2018-09-26 | | 实施日期 | 2019-04-01 | | 标准依据 | 国卫通(2018)21号 | | 发布机构 | 卫生健康委员会 | WS/T 632-2018: 巴贝虫检测 血涂片镜检法
WS/T 632-2018 英文名称: Detection of Babesia spp.- Blood smear microscopy examination method
ICS 11.020
C 61
WS
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
巴贝虫检测 血涂片镜检法
1 范围
本标准规定了检测巴贝虫的血涂片镜检法。
本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对巴贝虫的检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
WS/T 569 疟原虫检测 血涂片镜检法
WS/T 564 巴贝虫病诊断
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
巴贝虫 Babesia spp.
一类寄生于人和脊椎动物红细胞内的原虫，可引起巴贝虫病（Babesiosis）。感染人体的巴贝虫有
田鼠巴贝虫 (Babesia microti)、分歧巴贝虫(B.divergens)、邓肯巴贝虫(B.duncani)
和猎户巴贝虫 (B.venatorum)等。
3.2
血涂片 blood smears
将血液涂制于载玻片上制成的涂片, 分为厚血膜涂片和薄血膜涂片。
6 检测步骤
6.1 血涂片的制作
6.1.1 采血部位及取血方法
末梢（无名指指尖或耳垂）取血。用75％酒精棉球消毒取血部位，待酒精挥发后，用拇指和食指紧
捏耳垂上方或无名指指尖，另一只手手持一次性采血针迅速刺入皮肤，轻轻挤压出血。
婴儿可从拇趾或足跟扎刺取血。
6.1.2 厚血膜制作
取 1张已消毒的载玻片（或粘附玻片）作推片，用推片的一角，取 4µL～5 µL的血量，使血与另 1
张平置的载玻片（或粘附玻片）中央偏右的位置接触，由里向外旋转，画 2 圈～4 圈，涂成直径 0.8 cm～
1 cm大小圆形厚血膜（见附录A）。
6.1.3 薄血膜制作
干棉球抹净推片下角的血渍，用同一张推片中部取约 1 µL~ 1.5µL的血量。将血置于离厚血膜左边
缘约 0.3 cm 的位置，推片的边缘紧贴载玻片，上下轻轻移动，使血沿推片的边缘散开至 2cm宽，使两
张玻片保持 25°～35°角，从右向左迅速推动推片向前，推成舌状薄血膜（见附录A）。
6.1.4 编号
血涂片制好后水平放置，充分干燥后，在玻片一侧毛玻璃上或在靠近厚血膜一端边上标注编号和日期。
6.2 固定与溶血
6.2.1 薄血膜固定
将薄血膜一端朝下呈 45°角，用一次性吸管吸取甲醇溶液，均匀轻抹于薄血膜表面，避免碰触厚血膜。
6.2.2 厚血膜溶血
在干燥的厚血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟，待血膜呈浅灰色，倾去溶血血液。
6.3 吉氏染色
6.3.1 吉氏染液的配制
常用的吉氏染液工作液包括 2%、3%、10% 三种浓度，分别由吉氏染液原液和pH 7.2磷酸盐缓冲
液（PBS）按比例配制，也可购买商品化吉氏染液原液加实验用纯水按比例配制（见附录 B）。
6.3.2 吉氏染色
染色方法见附录B
6.4 显微镜检查
在染色后的血涂片上加 1滴香柏油或专用浸油，用 100×（倍）油镜、10×（倍）目镜的光学显微
镜检查。观察血片路线顺序为薄血膜从尾部舌尖部分开始，厚血膜从上端或下端开始（见附录A）。
6.5 结果判定
6.5.1 巴贝虫检测阳性
血膜中发现巴贝虫判定为阳性（参见附录C）。
6.5.2 巴贝虫染虫率计数
6.5.2.1 薄血膜的巴贝虫染虫率计数法
显微镜下检查薄血膜，计数每个视野中的染虫红细胞和红细胞总数 2 000 个以上
6.5.2.2 厚血膜的巴贝虫染虫率计数法
若染虫率低于 0.1％时，显微镜下检查整张厚血膜片，计数整张厚血膜片的巴贝虫虫体数和红细胞总数。
附录 A
（规范性附录）
附录 B
（规范性附录）
试剂配制与血涂片染色、保存方法
B.1吉氏染色原液配制
将 5.0 g吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至 250 mL甘油加完为止，
倒入 500 mL有塞深色玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗
后再倒入瓶中，至 250 mL甲醇洗净研钵中甘油为止。置室温内，避免阳光直射。塞紧瓶塞，避免蒸发
和高湿造成的氧化。每天用力摇动溶液 5 min，3 d后即可使用，储存时间越久染色效果越佳。根据日
常的需求，用干燥吸管吸取少量的染色原液到密闭的分装瓶中（大约 25 mL）。切勿向原液中加入水。
B.2 pH 7.2 磷酸盐缓冲液（PBS）的配制
称量 8.0 g NaCl，0.2 g KCl，0.24 g KH2PO4（或者 1.44g Na2HPO4）和 1.8 g K2HPO4，溶于
800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的 pH值至 7.2，最后加蒸馏水定容至 1 L。保存于 4℃冰箱中备用。
B.3吉氏染色工作液配制
B.3.1 2％ 吉氏染液工作液的配制
在 98 mL pH 7.2 磷酸盐缓冲液中加入 2 mL吉氏染色原液并混匀，或 98 mL实验用纯水中加入 2
mL商品吉氏染色原液并混匀。
B.3.2 3％吉氏染液工作液的配制
在 97 mL pH 7.2 磷酸盐缓冲液中加入 3 mL吉氏染色原液并混匀，或 97 mL实验用纯水中加入 3
mL商品吉氏染液原液并混匀。
B.3.3 10％吉氏染液工作液的配制
在 90 mL pH 7.2 磷酸盐缓冲液中加入 10 mL吉氏染色原液并混匀，或 90 mL实验用纯水中加入
10 mL商品吉氏染液原液并混匀。
B.3.4 注意事项
吸取吉氏染色原液时切勿摇晃盛染色原液瓶子。吉氏染色工作液应现用现配，切勿将未用完的吉氏
染色工作液倒回原液瓶中。
B.4 单张血涂片染色法
单张血涂片吉氏染色常用于临床巴贝虫病患者的巴贝虫显微镜检测。采用 3％吉氏染液染色 30
min或更长时间。该染色法染色的血涂片可长期保存。也可采用 10％吉氏染液染色 8 min～10 min，但
该染色法染色的血涂片不适合长期保存。
B.4.1 3％吉氏染液染色法
B.4.1.1.把经甲醇固定的薄血膜涂片充分干燥后，血膜面朝上水平放置在染色盘中。
B,4.1.2.用吸管吸取新配制的 3％吉氏染液 3 mL 左右，滴加于厚、薄血膜上，至染液均匀覆盖血膜，不溢出为止。
B.4.1.3.静置染色约 30 min。
B.4.1.4.将染色盘移至冲水池，用缓慢流水沿血涂片上缘冲洗 1 min。
B.4.1.5.将染色后的血涂片血膜面朝下插入血片干燥架，晾干。
B.4.2 10％吉氏染液快速染色法
B.4.2.1.把经甲醇固定的薄血膜涂片充分干燥后，血膜面朝上水平放置在染色盘上。
B.4.2.2.用吸管吸取新配制的 10％吉氏染液约 3 mL，滴加于厚、薄血膜上，至染液均匀覆盖血膜，不溢出为止。
B.4.2.3.静置染色 8 min ~10 min。
B.4.2.4.将染色盘移至冲水池，沿血涂片上缘用缓慢流水冲洗 1 min。
B.4.2.5.将染色后的血涂片血膜面朝下插入血片干燥架，晾干。
B.5 成批血涂片染色
成批血涂片染色常用于人群流行病学调查中的巴贝虫显微镜检测，一般采用 2％吉氏染液进行批量血涂片染色。
B.5.1.将每张血涂片的血膜朝一个方向插入染色缸中，或将每对血涂片的血膜朝外插入染色缸中。
B.5.2.倒入新配制的 2％吉氏染液浸没厚、薄血膜。
B.5.3.静置染色 30 min以上。
B.5.4.向染色缸中注入自来水至溢出，除去染液表面浮渣，将染色缸中残余的染液倾出，加入自来
水，缓慢冲洗 2次 ～3 次。
B.5.5.取出血涂片，血膜面朝下插入血片干燥架，晾干。
B.6 血涂片保存
用吸水纸吸去已检血涂片血膜表面的香柏油，在血膜上滴加 2 滴～ 3 滴二甲苯，然后用吸水纸吸
干。置血涂片于玻片盒内，避光、干燥和阴凉保存，以备复核。注意：专用浸......
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