路径: 主页 > GB > 第22页 > GB 1903.80-2025 | 标准编号 | GB 1903.80-2025 (GB1903.80-2025) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品营养强化剂 酵母β-葡聚糖 | | 英文名称 | National food safety standard - Nutrition fortifier - Yeast beta-glucan | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X40 | | 字数估计 | 12,188 | | 发布日期 | 2025-09-02 | | 发布机构 | National Health Commission; State Administration for Market Regulation | GB 1903.80-2025: 食品安全国家标准 食品营养强化剂 酵母β-葡聚糖
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
食品营养强化剂 酵母β-葡聚糖
2025-09-02发布
2026-03-02实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
食品安全国家标准
食品营养强化剂 酵母β-葡聚糖
1 范围
纯化,干燥等工序加工后得到的β-1,3/β-1,6-葡聚糖为主要成分的食品营养强化剂酵母β-葡聚糖。
cerevisiae)为原料”所定义的“面包酵母”为该酵母的英译俗名。
2 分子式、结构式和相对分子质量
2.1 分子式
(C6H10O5)n
n:聚合度,125≤n≤25000。
2.2 结构式
2.3 相对分子质量
20000~4000000(按2022年国际相对原子质量)
3 技术要求
3.1 感官要求
感官要求应符合表1的规定。
表1 感官要求
项目 要求 检验方法
色泽 浅黄色至黄褐色
状态 粉末
气味 具本品特有的气味
取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中,在自然光线下观
察其色泽和状态,并嗅其气味
3.2 理化指标
理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标
项目 指标 检验方法
酵母β-葡聚糖含量,w/% ≥ 75 附录A中A.3
蛋白质,w/% ≤ 3.5 GB 5009.5凯氏定氮法
脂肪,w/% ≤ 10.0 GB 5009.6酸水解法
水分,w/% ≤ 8.0 GB 5009.3直接干燥法
灰分,w/% ≤ 3.0 GB 5009.4食品中总灰分的测定
铅(Pb)/(mg/kg) ≤ 0.5 GB 5009.12或GB 5009.75
总砷(以As计)/(mg/kg) ≤ 0.5 GB 5009.11或GB 5009.76
总汞(以 Hg计)/(mg/kg) ≤ 0.05 GB 5009.17
镉(Cd)/(mg/kg) ≤ 0.5 GB 5009.15
3.3 微生物限量
微生物限量应符合表3的规定。
表3 微生物限量
项目
采样方案a及限量(若非指定,均以CFU/g表示)
n c m M
检验方法
菌落总数 5 2 10000 50000 GB 4789.2
大肠菌群 5 2 10 100 GB 4789.3平板计数法
金黄色葡萄球菌 5 0 0/25g - GB 4789.10
沙门氏菌 5 0 0/25g - GB 4789.4
a 试样的采集及处理按GB 4789.1执行。
附 录 A
检验方法
A.1 一般规定
本标准所用试剂和水在未注明其他要求时,均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中
所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品,在未注明其他要求时,均按GB/T 601、GB/T 602和
GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。
A.2 鉴别试验
酵母β-葡聚糖红外特征光谱鉴别采用溴化钾压片法,按照GB/T 6040进行试验。酵母β-葡聚糖的
红外光谱图应符合酵母β-葡聚糖标准品红外光谱图特征(附录B),在3419cm-1附近有较宽、较强的吸
收峰(糖类的O-H伸缩振动吸收),在2923cm-1附近(糖类的C-H伸缩振动吸收)和889cm-1附近(糖
类β-构型特征吸收)有较弱的吸收峰。
A.3 酵母β-葡聚糖含量的测定
A.3.1 酸水解法(第一法)
用水溶解试样,将不溶物滤出,用水洗涤滤渣,使之与试样主体完全分离,烘干后用天平称出水不溶
性杂质的质量。
A.3.1.1 酸水解法原理
酵母β-葡聚糖试样经酸水解后,试样中的葡萄糖和其他成分经高效液相色谱柱分离,通过示差折
光检测器检测,采用外标法定量测定。
注:在酵母β-葡聚糖水解过程中,可能存在其水解不彻底,以及水解产物葡萄糖因高温部分发生其他副反应的现
象,导致检测结果中酵母β-葡聚糖含量偏低。
A.3.1.2 仪器和设备
A.3.1.2.1 电子天平:感量为0.001g。
A.3.1.2.2 恒温干燥箱:100℃±2℃。
A.3.1.2.3 恒温水浴锅:30℃±1℃。
A.3.1.2.4 高压灭菌锅。
A.3.1.2.5 涡旋混合器。
A.3.1.2.6 高效液相色谱仪:带示差检测器。
A.3.1.3 试剂和材料
A.3.1.3.1 水:GB/T 6682,一级水。
A.3.1.3.2 盐酸:37%。
A.3.1.3.3 无水葡萄糖(CAS号:50-99-7)纯度:AR,≥99.5%。
A.3.1.3.4 葡萄糖标准溶液(2.0g/L):称取0.2g(精确至0.001g)经过98℃~100℃干燥2h的葡萄
糖(A.3.1.3.3),加水(A.3.1.3.1)溶解并定容至100mL,摇匀。
A.3.1.3.5 酵母β-葡聚糖对照品:已知纯度,且纯度≥75%。
A.3.1.3.6 氢氧化钠溶液(300g/L):称取氢氧化钠300g(精确至0.01g),用水(A.3.1.3.1)定容至
1000mL,摇匀。
A.3.1.3.7 醋酸纤维素膜:孔径0.22μm。
A.3.1.4 试样处理
称取0.4g(精确至0.001g)试样或酵母β-葡聚糖对照品(A.3.1.3.5)至20mL带螺帽的试管中,加
入6.0mL盐酸(A.3.1.3.2),盖紧振荡,得到均一的悬浮液。将试管放入30℃水浴中保持45min(每
15min用涡旋混合器振荡混合一次)。将水浴后的悬浮液转移至200mL 螺旋盖耐热瓶中,用
100mL~120mL的水(A.3.1.3.1)分几次洗涤试管,洗涤液并入带螺旋盖耐热瓶中。将带螺旋盖耐热
瓶放入高压灭菌锅,经121℃,60min灭菌处理。取出后冷却至室温,用氢氧化钠溶液(A.3.1.3.6)调至
pH为6~7后转移至200mL容量瓶中,用水(A.3.1.3.1)定容,混匀。使用0.22μm孔径的醋酸纤维素
膜过滤备用。
A.3.1.5 参考色谱条件
A.3.1.5.1 色谱柱:糖柱(6.5mm×300mm)或具有同等分析效果的分离柱。
A.3.1.5.2 流动相:纯水。
A.3.1.5.3 柱温:80℃。
A.3.1.5.4 流速:0.5mL/min。
A.3.1.5.5 进样量:20μL。
A.3.1.6 标准曲线的绘制
分别量取葡萄糖标准溶液(A.3.1.3.4)2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL于10mL容量瓶
中,用水(A.3.1.3.1)定容并摇匀,得到葡萄糖质量浓度分别为400mg/L、800mg/L、1200mg/L、
1600mg/L、2000mg/L的系列标准溶液。在 A.3.1.5色谱条件下进样20μL,根据色谱峰面积和葡
萄糖浓度绘制标准曲线。
A.3.1.7 试样及对照品的测定
在同样的色谱条件下,将经A.3.1.4方法处理后的试样和酵母β-葡聚糖对照品溶液分别注入色谱
仪中,记录各色谱峰的保留时间和峰面积。用葡萄糖标准溶液的色谱峰保留时间定性,用葡萄糖标准溶
液色谱峰的峰面积定量。
A.3.1.8 结果计算
酵母β-葡聚糖的含量按公式(A.1)计算:
X1=
c1×0.2×100
m1×1000 ×
0.9×F1 (A.1)
式中:
X1 ---试样中酵母β-葡聚糖的含量,单位为克每百克(g/100g);
c1 ---根据试样溶液的峰面积,通过标准曲线计算得到的试样溶液的葡萄糖的含量,单位为毫
克每升(mg/L);
0.2 ---试样或标准品酵母β-葡聚糖处理后定容的体积,单位为升(L);
100 ---百分含量转换系数;
m1 ---称取试样的质量,单位为克(g);
1000---毫克与克的转换系数;
0.9 ---将葡萄糖换算成酵母β-葡聚糖的系数;
F1 ---试样酸水解中葡萄糖被破坏造成结果偏低的经验补偿系数。
F1 值按公式(A.2)计算:
F1=
P1×(100-W)×m2×1000
c2×0.2×100×0.9
(A.2)
式中:
P1 ---酵母β-葡聚糖对照品的纯度(依据对照品厂家提供的检测报告),单位为克每百克(g/100g);
100 ---百分含量转换系数;
W ---酵母β-葡聚糖对照品的水分(依据对照品厂家提供的检测报告),单位为克每百克(g/100g);
m2 ---称取酵母β-葡聚糖对照品的质量,单位为克(g);
1000---毫克与克的转换系数;
c2 ---根据酵母β-葡聚糖对照品溶液的峰面积,通过标准曲线计算得到的对照品溶液的葡萄糖
的含量,单位为毫克每升(mg/L);
0.2 ---试样或酵母β-葡聚糖对照品处理后定容的体积,单位为升(L);
0.9 ---葡萄糖与酵母β-葡聚糖的换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,保留至整数。
A.3.1.9 精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的5%。
A.3.2 酶水解法
A.3.2.1 酶水解法原理
酵母β-葡聚糖经氢氧化钾溶液凝胶化后,通过溶壁酶、β-(1,6)-葡聚糖酶、β-(1,3)-葡聚糖酶和β-
葡萄糖苷酶多次酶解,最终水解为葡萄糖。葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下催化葡萄糖氧化,生成
D-葡萄糖酸-δ-内脂和过氧化氢。过氧化氢经过氧化物酶(POD)催化,与4-氨基安替比林和对羟基苯甲
酸生成红色醌亚胺(GODPOD法)。利用分光光度计在510nm波长处测定醌亚胺吸光度,计算试样中
葡萄糖含量,进而计算得到酵母β-葡聚糖的含量。
A.3.2.2 仪器和设备
A.3.2.2.1 涡旋混合器。
A.3.2.2.2 恒温水浴锅。
A.3.2.2.3 分光光度计。
A.3.2.2.4 电子天平,感量为0.001g。
A.3.2.2.5 酸度计,精度0.1pH。
A.3.2.3 试剂和溶液
A.3.2.3.1 酵母β-葡聚糖对照品:已知纯度,且纯度≥75%。
A.3.2.3.2 溶壁酶:酶活力≥200U/mg。
A.3.2.3.3 β-(1,6)-葡聚糖酶:酶活力≥2U/mg。
A.3.2.3.4 β-(1,3)-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶混合酶:酶活力分别≥100U/mL和20U/mL。
A.3.2.3.5 葡萄糖系列标准溶液:分别量取0.6mL、1.0mL、2.5mL、4.0mL和5.0mL葡萄糖标准溶
液(A.3.1.3.4)至10mL容量瓶中,加水定容并混匀。其葡萄糖质量浓度分别为0.12g/L、0.20g/L、
0.50g/L、0.80g/L、1.00g/L。
A.3.2.3.6 氢氧化钾溶液(2mol/L):称取11.2g氢氧化钾(精确至0.01g),加水充分溶解,定容至
100mL,混匀后4℃冷藏保存。
A.3.2.3.7 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取4g氢氧化钠(精确至0.01g),加水充分溶解后,定容至
100mL,混匀。
A.3.2.3.8 盐酸溶液(1mol/L):量取8.33mL盐酸(精确至0.01mL),加水并定容至100mL,混匀。
A.3.2.3.9 乙酸钠缓冲溶液A(pH5):分别称取5.25g无水乙酸钠(精确至0.01g)和2.16g冰醋酸
(精确至0.01g)至400mL水中,用氢氧化钠溶液(A.3.2.3.7)或冰醋酸调节pH 至5,加水定容至
500mL,混匀。
A.3.2.3.10 乙酸钠缓冲溶液B(pH3.8):分别称取4.96g无水乙酸钠(精确至0.01g)和32.32g冰醋
酸(精确至0.01g)于400mL水中,用氢氧化钠溶液(A.3.2.3.7)或冰醋酸调节pH 至3.8,加水定容至
500mL,混匀。
A.3.2.3.11 缓冲溶液C(pH7.5):溶解1.212g三羟甲基氨基甲烷(Tris)(精确至0.001g)、1.169g氯
化钠(精确至0.001g)以及0.416gEDTA-四钠二水合物(精确至0.001g)于90mL水中。用盐酸溶液
(A.3.2.3.8)或氢氧化钠溶液(A.3.2.3.7)调节pH 至7.5,加水定容至100mL,混匀。
A.3.2.3.12 溶壁酶溶液(10U/μL):移取适量溶壁酶至含有10% 缓冲溶液C(A.3.2.3.11)中,使溶壁酶
最终浓度为10U/μL(-15℃条件下可保存1年,不应反复冻融)。
A.3.2.3.13 β-(1,6)-葡聚糖酶溶液:溶解适量β-(1,6)-葡聚糖酶(A.3.2.3.3)于乙酸钠缓冲溶液 A
(A.3.2.3.9)中,最终浓度为1U/300μL(悬浊液,-15℃条件下可保存60天,不应反复冻融)。
A.3.2.3.14 混合酶溶液:移取适量β-(1,3)-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶混合酶(A.3.2.3.4),加入适量乙
酸钠缓冲溶液A(A.3.2.3.9)稀释混匀,使最终浓度分别为20U/mL和4U/mL(使用期间冰浴保存,当
天使用;未使用的可以-15℃冰冻保存2年,不应反复冻融)。
A.3.2.3.15 GODPOD缓冲液:在200mL容量瓶中加入约160mL水,随后分别加入27.2g磷酸二氢
钾(精确至0.01g)、8.4g氢氧化钠(精确至0.01g)和6.0g对羟基苯甲酸(精确至0.01g),搅拌使其完
全溶解后,调节pH至7.4,最后加入0.8g叠氮化钠,溶解后加水定容至刻度。4℃保存,有效期4年。
稀释:量取GODPOD缓冲液48mL至1000mL容量瓶中,加水定容并混匀,现用现配。
A.3.2.3.16 GODPOD混合酶粉末:葡萄糖氧化酶(≥400U)、过氧化物酶(≥1000U)和4-氨基安替
比林。
A.3.2.3.17 GODPOD工作液:量取20mL稀释后的GODPOD缓冲液(A.3.2.3.15)至GODPOD混合
酶粉末(A.3.2.3.16)中并轻轻晃动至充分溶解。再加入剩余稀释后的980mLGODPOD缓冲溶液
(A.3.2.3.15),避光4℃保存,有效期3个月(-20℃保存,有效期12个月,不应反复冻融)。
注:A.3.2.3.11~A.3.2.3.17溶液也可使用商品化试剂或试剂盒。
A.3.2.3.18 醋酸纤维素膜:孔径0.22μm。
A.3.2.4 试样处理
称取试样或对照品(A.3.2.3.1)15mg~20mg(精确至0.001g)至离心管中,加入0.4mL冷的氢氧
化钾溶液(A.3.2.3.6),冰水浴涡旋20min,冰水浴期间多次短时涡旋至全部沉淀分散且无可见结块。
加入1.6mL乙酸钠缓冲溶液B(A.3.2.3.10)及600μL溶壁酶溶液(A.3.2.3.12),记录此时溶液总体积
为V1,将反应液50℃孵育12h~18h后,冷却至室温。吸取130μL(V2)冷却的该酶解液至2mL离心
管中,加入25μL氢氧化钾溶液(A.3.2.3.6)和300μLβ-(1,6)-葡聚糖酶溶液(A.3.2.3.13),80℃孵育
15min后,冷却至室温。再加入390μL混合酶溶液(A.3.2.3.14),记录此时溶液总体积为V3,40℃孵
育1h后,冷却至室温。移取适量溶液过膜后进行检测。
A.3.2.5 酶水解空白溶液
移取20μL冷的氢氧化钾溶液(A.3.2.3.6)至5mL 离心管中,加入80μL乙酸钠缓冲液 B
(A.3.2.3.10),混匀后再加入30μL溶壁酶溶液(A.3.2.3.12),混匀。50℃孵育12h~18h后,冷却至室
温。再加入25μL氢氧化钾溶液(A.3.2.3.6)和300μLβ-(1,6)-葡聚糖酶溶液(A.3.2.3.13),80℃孵育
15min后冷却至室温。最后加入390μL混合酶溶液(A.3.2.3.14),40℃孵育1h后冷却至室温。移取
适量溶液过膜后进行检测。
A.3.2.6 标准曲线的绘制
依次移取100μL葡萄糖系列标准溶液(A.3.2.3.5)至5mL离心管中,再加入3mLGODPOD工作
液(A.3.2.3.17),40℃水浴20min。移出水浴并冷却至室温,过膜后全部转移至1cm 比色皿中,以
GODPOD工作液(A.3.2.3.17)为空白,以分光光度计测量510nm 处吸光度。以吸光度为纵坐标,以系
列标准溶液的浓度为横坐标,绘制标准曲线。
A.3.2.7 试样溶液的测定
分别量取100μL经A.3.2.4步骤处理后的试样溶液、对照品溶液以及经A.3.2.5步骤处理后的酶
水解空白溶液于5mL离心管中,再分别加入3mLGODPOD工作液(A.3.2.3.17),40℃水浴20min。
移出水浴并冷却至室温后,过膜,全部转移至1cm 比色皿中,以GODPOD 工作液(A.3.2.3.17)为空
白,以分光光度计测量510nm 处吸光度,利用标准曲线计算试样溶液中葡萄糖的浓度。可根据具体试
样进行稀释。
A.3.2.8 结果计算
酵母β-葡聚糖试样的含量按公式(A.3)计算:
X2=
100×(c3-c0)×0.9×F2×V1×V3×f
m3×V2
(A.3)
式中:
X2 ---试样中葡聚糖的纯度,单位为克每百克(g/100g);
100 ---百分含量转换系数;
c3 ---试样酶解液最终的葡萄糖含量的测定值,单位为克每升(g/L);
c0 ---酶水解空白溶液的葡萄糖含量的测定值,单位为克每升(g/L);
0.9 ---葡萄糖和酵母β-葡聚糖换算系数;
F2 ---对照品补偿系数;
V1 ---溶壁酶酶解后酶解液的体积,单位为毫升(mL);
V3 ---完成所有酶解后的终体积,单位为毫升(mL);
f ---测定葡萄糖含量过程中的稀释倍数;
m3 ---试样质量,单位为毫克(mg);
V2 ---从溶壁酶酶解液中移取的酶解液体积,单位为毫升(mL)。
酵母β-葡聚糖对照品的含量按公式(A.4)计算:
P'=
100×(cs-c0)×0.9×V1×V3×f
ms×V2
(A.4)
式中:
P' ---根据对照品酶解液最终的葡萄糖含量(cs)计算的对照品纯度,单位为克每百克(g/100g);
100---百分含量转换系数;
cs ---对照品酶解液最终的葡萄糖含量的测定值,单位为克每升(g/L)
c0 ---酶水解空白溶液的葡萄糖含量的测定值,单位为克每升(g/L);
0.9 ---葡萄糖和酵母β-葡聚糖换算系数;
V1 ---溶壁酶酶解后酶解液的体积,单位为毫升(mL);
V3 ---完成所有酶解后的终体积,单位为毫升(mL);
f ---测定葡萄糖含量过程中的稀释倍数;
ms ---对照品质量,单位为毫克(mg);
V2 ---从溶壁酶酶解液中移取的酶解液体积,单位为毫升(mL)。
公式(A.3)中F2 按公式(A.5)计算:
F2=
P2
P'=
P2×ms×V2
100×(cs-c0)×0.9×V1×V3×f
(A.5)
式中:
F2 ---对照品补偿系数;
P2 ---对照品纯度(依据对照品厂家提供的纯度报告),单位为克每百克(g/100g);
P' ---根据对照品酶解液最终的葡萄糖含量(cs)计算的对照品纯度,单位为克每百克(g/100g);
ms ---对照品质量,单位为毫克(mg);
V2 ---从溶壁酶酶解液中移取的酶解液体积,单位为毫升(mL);
100---百分含量转换系数;
cs ---对照品酶解液最终的葡萄糖含量的测定值,单位为克每升(g/L);
c0 ---酶空白溶液的葡萄糖含量的测定值,单位为克每升(g/L);
0.9---葡萄糖和酵母β-葡聚糖换算系数;
V1 ---溶壁酶酶解后酶解液的体积,单位为毫升(mL);
V3 ---完成所有酶解后的终体积,单位为毫升(mL);
f ---测定葡萄糖含量过程中的稀释倍数。
当试样与对照品按照A.3.2.4操作过程中,二者的V1、V2、V3 和f 完全相同时,公式(A.3)可简
化为:
X2=
(c3-c0)×ms×P2
(cs-c0)×m3
(A.6)
式中:
X2---试样中葡聚糖的纯度,单位为克每百克(g/100g);
c3 ---试样酶解液最终的葡萄糖含量的测定值,单位为克每升(g/L);
c0 ---酶空白溶液的葡萄糖含量的测定值,单位为克每升(g/L);
ms---对照品质量,单位为毫克(mg);
P2---对照品......
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