路径: 主页 > GB > 第142页 > GB 29698-2013 | 标准编号 | GB 29698-2013 (GB29698-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇多残留的测定 气相色谱-质谱法 | | 英文名称 | Determination of 17β-Estradiol, Estriol and Ethinylestradiol Residues in Milk and Milk Products by Gas Chromatography-Mass Spectrometric method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 11,113 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了奶及奶制品中雌激素类药物残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于鲜奶和奶粉样品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇单个或多个药物残留量的检测。 | GB 29698-2013
Determination of 17β-Estradiol, Estriol and Ethinylestradiol Residues in Milk and Milk Products by Gas Chromatography-Mass Spectrometric method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、
炔雌醇多残留的测定 气相色谱-质谱法
2013-09-16发布
2014-01-01实施
中 华 人 民 共 和 国 农 业 部
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布
食品安全国家标准
奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、
炔雌醇多残留的测定 气相色谱-质谱法
1 范围
本标准规定了奶及奶制品中雌激素类药物残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法。
本标准适用于鲜奶和奶粉样品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇单个或多个药物残留量的检测。
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试料中残留的雌激素,用乙酸乙酯和乙腈混合溶剂提取,固相萃取柱净化,硅烷化试剂衍生,离子模
式气相色谱-质谱测定,外标法定量。
4 试剂和材料
以下所用试剂,除特殊注明外均为分析纯试剂,水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇:含量≥98.0%。
4.2 二硫赤藓糖醇。
4.3 N-甲基三甲基硅基三氟乙酰氨 。
4.4 三甲基硅烷。
4.5 乙腈。
4.6 乙酸乙酯。
4.7 甲醇。
4.8 甲苯。
4.9 正己烷。
4.10 盐酸。
4.11 氢氧化钠。
4.12 C18固相萃取柱:LC-C18,500mg/3mL,或相当者。
4.13 硅胶固相萃取柱:LC-Si,500mg/3mL,或相当者。
4.14 95%正己烷乙酸乙酯溶液:取正己烷95mL,用乙酸乙酯溶解并稀释至100mL。
4.15 70%正己烷乙酸乙酯溶液:取正己烷70mL,用乙酸乙酯溶解并稀释至100mL。
4.16 1mol/L氢氧化钠溶液:取氢氧化钠40g,用水溶解并稀释至1000mL。
4.17 5mol/L盐酸溶液:取浓盐酸48mL,用水溶解并稀释至100mL。
4.18 衍生化试剂:取二硫赤藓糖醇0.01g,用N-甲基三甲基硅基三氟乙酰氨(MSTFA)5mL溶解,于
液面下加三甲基硅烷10μL,混匀,2℃~8℃放置过夜,避光防潮密封保存。衍生化试剂应无色,如果
发生棕红色等颜色变化,表明试剂失效。
4.19 1mg/mL17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇标准贮备液:精确称取17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇标准品
各10mg,分别于10mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配成浓度为1mg/mL 的标准贮备液。
-20℃ 以下保存,有效期6个月。
4.20 10mg/L17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇混合标准工作液:精密量取1mg/mL17β-雌二醇、雌三醇
和炔雌醇标准贮备液各1.0mL,于100mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为10mg/L的混合
标准工作液,2℃~8℃保存,有效期1个月。
5 仪器和设备
5.1 气相色谱-质谱联用仪:EI源。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 氮吹仪。
5.5 固相萃取装置。
5.6 均质器。
5.7 旋涡混合器。
5.8 离心机。
5.9 烘箱。
5.10 pH计。
5.11 旋转浓缩仪。
5.12 滤膜:0.22μm。
6 试样制备与保存
6.1 试料的制备
取适量新鲜或冷藏的空白或供试样品,混合,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
2℃~8℃保存。
7 测定步骤
7.1 标准工作曲线制备
精密量取10mg/L混合标准工作液适量,用甲醇稀释,配制成浓度为10、50、100、200、500和
1000μg/L系列标准工作液,于40℃水浴氮气吹干,按衍生化步骤处理,供气相色谱法-质谱测定。以
测得峰面积为纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.2 提取
7.2.1 液态试料
称取试料10g±0.05g,于50mL离心管中,加乙腈5mL、乙酸乙酯15mL,旋涡振荡3min,
8000r/min离心5min,收集上清液于另一50mL离心管中,残渣重复提取一次,合并两次上清液,于
40℃水浴旋转蒸发至近干,用1mol/L氢氧化钠溶液6mL分三次溶解,转至另一50mL离心管中,加
正己烷20mL旋涡振荡1min,8000r/min离心3min,收集下层提取液,用5mol/L盐酸溶液调pH
至5.0~5.2,备用。
7.2.2 固态试料
称取试料10g±0.05g,于50mL离心管中,加乙酸乙酯15mL,旋涡振荡3min,8000r/min离心
5min,收集上清液于另一50mL离心管中,残渣重复提取一次,合并两次上清液,40℃水浴旋转蒸发至
近干,用1mol/L氢氧化钠溶液6mL分三次溶解,转至另一50mL离心管中,加正己烷20mL旋涡振
荡1min,8000r/min离心3min,收集下层提取液,用5mol/L盐酸溶液调pH至5.0~5.2,备用。
7.3 净化
C18柱依次用甲醇5mL和水5mL活化,取备用液过柱,用水5mL淋洗,抽干,用甲醇5mL洗脱,
收集洗脱液,于40℃水浴氮气吹干。用95%正己烷乙酸乙酯溶液5mL溶解残余物,过经正己烷5mL
活化后的硅胶柱,加正己烷5mL淋洗,抽干,再用70%正己烷乙酸乙酯溶液5mL洗脱,收集洗脱液,
于40℃水浴氮气吹干。
7.4 衍生化
残余物加甲苯和衍生化试剂各100μL溶解,混匀,封口,在80℃烘箱中衍生60min,冷却,供气相
色谱-质谱测定。
7.5 测定
7.5.1 色谱条件
7.5.1.1 色谱柱HP-5MS石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm,膜厚0.25μm),或相当者。
7.5.1.2 载气为高纯氦气,恒流1.0mL/min。
7.5.1.3 进样口温度220℃。
7.5.1.4 进样体积:1μL,不分流。
7.5.1.5 色谱柱起始温度100℃(保持1min),以20℃/min的升温速率升至200℃(保持3min),再以
20℃/min的升温速率升至260℃(保持5min),再以20℃/min的升温速率升至280℃(保持5min)。
7.5.2 质谱条件
7.5.2.1 离子源(EI)温度:200℃。
7.5.2.2 EM电压:高于调谐电压200V。
7.5.2.3 电子能量:70eV。
7.5.2.4 GC/MS传输线温度:280℃。
7.5.2.5 四极杆温度:160℃。
7.5.2.6 选择离子监测(SIM):(m/z)232,285,326,416(17β-雌二醇);311,345,414,504(雌三醇);285,
300,425,440(炔雌醇)。
7.5.3 测定法
7.5.3.1 定性测定
通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液
各色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差不大于5%;试样特征离子的相
对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致,相对丰度偏差不超过表1的规定,则可判断试样中存
在相应的被测物。
表1 定性确诊时相对离子丰度的最大允许误差 %
相对丰度 >50 20~50 10~20 ≤10
允许偏差 ±10 ±15 ±20 ±50
7.5.3.2 定量测定
取适量试样溶液和相应的标准溶液,做单点或多点校准,按外标法,以峰面积定量,标准溶液及试样
液中17β-雌二醇、雌三醇和炔雌醇的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下,标准
溶液、空白试样和空白添加试样的色谱图及质谱图见附录A。
7.6 空白试验
除不加试样外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
8 结果计算和表述
试料中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇的残留量按式(1)计算。
X=
A×cS×V
AS×m
(1)
式中:
X ---供试试料中相应的17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇残留量,单位为微克每千克(μg/kg);
A ---试样中相应的17β-雌二醇、雌三醇和炔雌醇的峰面积;
cS---标准溶液中相应的17β-雌二醇、雌三醇和炔雌醇浓度,单位为微克每升(μg/L);
V ---溶解残余物体积,单位为毫升(mL);
AS---标准溶液中相应的17β-雌二醇、雌三醇和炔雌醇的峰面积;
m ---供试试料质量,单位为克(g)。
注:计算结果需扣除空白值,测......
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