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GB 31604.11-2016 English:
GB 31604.11-2016 GB 31604.11-2016: 食品安全国家标准 食品接触材料及制品 1，3-苯二甲胺迁移量的测定
GB 31604.11-2016 英文名称: Food contact materials -- Polymer -- Determination of 1 3-benzenedimethanamine in food simulants -- High performance liquid chromatography
本标准规定了食品接触材料及制品中1,3-苯二甲胺迁移量的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于食品接触材料及制品中1,3-苯二甲胺迁移量的测定。
2 原理
食品接触材料进行迁移试验后,对水基、酸性、酒精类食品模拟物中1,3-苯二甲胺进行荧光胺衍
生,然后通过高效液相色谱进行分离,采用荧光检测器检测,外标法定量;油性模拟物中1,3-苯二甲胺
经4%乙酸溶液萃取后采用同样方法检测。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水且用氮气饱和。
3.1 试剂
3.1.1 水基、酸性、酒精类、油基食品模拟物:所用试剂依据GB 31604.1的规定。
3.1.2 甲醇(CH4O,CAS号:67-56-1):色谱纯。
3.1.3 四氢呋喃(C4H8O,CAS号:109-99-9):色谱纯。
3.1.4 丙酮(C3H6O,CAS号:67-64-1)。
3.1.5 庚烷(C7H16,CAS号:142-82-5)。
3.1.6 乙酸(C2H4O2,CAS号:64-19-7)。
3.1.7 荧光胺(C17H10O4,CAS号:38183-12-9):纯度≥98%。
3.1.8 十水合四硼酸钠(Na2B4O7·10H2O,CAS号:1330-43-4)。
3.1.9 氢氧化钠(NaOH,CAS号:1310-73-2)。
3.1.10 氮气:99.999%。
3.2 试剂配制
3.2.1 水基、酸性、酒精类、油基食品模拟物:按GB 5009.156操作。
3.2.2 四氢呋喃溶液(体积分数为90%):量取90mL四氢呋喃于100mL容量瓶中,用水定容至刻度。
3.2.3 荧光胺溶液(2mg/mL):称取50mg(精确至0.0001g)荧光胺,用丙酮溶解后,定容至25mL。
该溶液在5℃下避光储存,有效期一周。
3.2.4 氢氧化钠溶液(5mol/L):称取20g氢氧化钠,用水溶解后,定容至100mL。
3.2.5 硼酸缓冲溶液(0.15mol/L,pH=9.2):称取14.3g十水四硼酸钠,用水溶解后,定容至250mL。
在使用溶液前,如果由于温度下降而导致沉淀则需要重新溶解。
3.2.6 乙酸溶液(质量浓度为4%):称取乙酸20g,用水溶解后,定容至500mL。
3.2.7 硼酸缓冲溶液(0.02mol/L,pH=9.2):吸取133mL的0.15mol/L硼酸缓冲溶液(3.2.5),用水
稀释定容至1L。
3.2.8 高效液相色谱流动相[硼酸缓冲液∶水∶甲醇(18∶37∶45)]:吸取180mL的0.02mol硼酸缓
冲溶液(3.2.7)、370mL水、450mL甲醇混合。
3.3 标准品
1,3-苯二甲胺标准品(C8H12N2,CAS号:1477-55-0):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质
证书的标准物质。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 1,3-苯二甲胺标准储备液
称取50mg(精确至0.0001g)1,3-苯二甲胺,用水溶解后,定容至50mL,浓度为1000mg/L。该
溶液在5℃下避光储存,有效期3个月。
3.4.2 用于水基(酸性、酒精类)食品模拟物的1,3-苯二甲胺标准工作溶液
用刻度吸量管吸取0.20mL的1,3-苯二甲胺标准储备液(3.4.1)于100mL容量瓶中,用水基(酸
性、酒精类)食品模拟物稀释至刻度,获得浓度为2.0mg/L的用于水基(酸性、酒精类)食品模拟物的1,
3-苯二甲胺标准工作溶液。该溶液在5℃下避光储存,有效期为1个月。
3.4.3 用于油基模拟物的1,3-苯二甲胺标准工作溶液
用刻度吸量管吸取2.0mL的1,3-苯二甲胺标准储备液(3.4.1)于100mL容量瓶中,用水稀释至刻
度,得浓度为20.0mg/L的溶液。吸取10mL该溶液于100mL容量瓶中,用四氢呋喃溶液(3.2.2)稀
释至刻度,得浓度为2.0mg/L的用于油基模拟物的1,3-苯二甲胺标准工作溶液。该溶液在5℃下避
光储存,有效期为1个月。
3.4.4 水基(酒精类)食品模拟物的1,3-苯二甲胺标准工作溶液
分别用刻度吸量管吸取0.5mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL的1,3-苯二甲胺标准工作溶液
(3.4.2)于5个100mL容量瓶中,用相应的食品模拟物(水基、酒精食品模拟物)定容至刻度,得到浓度
分别为0.010mg/L、0.040mg/L、0.060mg/L、0.080mg/L、0.10mg/L标准工作溶液。用刻度吸量管
分别吸取上述溶液2.0mL于5个5mL试管中,分别加入0.4mL硼酸缓冲溶液(3.2.5),充分混匀。分
别加入300μL荧光胺溶液(3.2.3)衍生试剂,振荡1min,静置10min。衍生溶液过0.45μm滤膜后供
高效液相色谱进样。
3.4.5 酸性食品模拟物的1,3-苯二甲胺标准工作溶液
分别用刻度吸量管吸取0.5mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL酸性食品模拟物中的1,3-苯二甲
胺标准工作溶液(3.4.2)于5个100mL容量瓶中,用酸性食品模拟物定容至刻度,得到浓度分别为
0.010mg/L、0.040mg/L、0.060mg/L、0.080mg/L、0.10mg/L标准工作溶液。准确吸取上述溶液中
各10.0mL于5个25mL烧杯中,在第一个烧杯中滴加5mol/L氢氧化钠溶液(3.2.4),调节pH至9.2,
计算所需氢氧化钠溶液的体积,准确至0.01mL。在另外4个烧杯中,准确加入上述滴加体积的氢氧化
钠溶液(3.2.4),充分混匀(各溶液pH应在8.0~9.9范围内)。以下按3.4.4中“用刻度吸量管分别吸取
上述溶液2.0mL供高效液相色谱进样”操作。
3.4.6 油基食品模拟物标准工作溶液
称取20.0g(精确至0.01g)油基模拟物,置于5个125mL分液漏斗中,分别用刻度吸量管吸取加
入0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL的1,3-苯二甲胺标准工作溶液(3.4.3)于该5个125mL分
液漏斗中。分别准确加入0.8mL、0.6mL、0.4mL、0.2mL和0mL的四氢呋喃溶液(3.2.2)和5.0mL
庚烷,充分混匀,再加入20.0mL乙酸溶液(3.2.6),振荡5min,静置15min,待两相完全分离后,收集水
相萃取物,得到浓度分别为0.02mg/kg、0.04mg/kg、0.06mg/kg、0.08mg/kg、0.10mg/kg油基食品模
拟物标准工作溶液。准确移取上述工作溶液中各10mL于5个25mL烧杯中,在第一个烧杯中滴加
5mol/L氢氧化钠溶液(3.2.4),调节pH至9.2,计算所需氢氧化钠溶液的体积,准确至0.01mL。在另
外4个烧杯中,准确加入上述滴加体积的氢氧化钠溶液(3.2.4),充分混匀(各溶液pH应在8.0~9.9范
围内)。以下按3.4.4中“用刻度吸量管分别吸取上述溶液2.0mL供高效液相色谱进样”操作。
4 仪器和设备
4.1 高效液相色谱仪:配荧光检测器(FLD)。
4.2 分析天平:感量为0.0001g。
4.3 涡旋混匀器。
4.4 机械振荡器。
4.5 0.45μm微孔滤膜。
4.6 恒温水浴。
5 分析步骤
5.1 试样迁移试验
按照GB 5009.156及GB 31604.1的要求,对样品进行迁移试验,得到食品模拟物试液。如果得到
的食品模拟物试液不能马上进行下一步试验,应将食品模拟物试液于4℃冰箱中避光保存。
所得食品模拟物试液应冷却或恢复至室温后进行下一步试验。
5.2 试液制备
5.2.1 水基和酒精类食品模拟物的制备
用刻度吸量管吸取从迁移试验中得到的水基(酒精类)食品模拟物2.0mL于5mL试管中,加入
0.4mL硼酸缓冲液,充分混匀。再加入300μL荧光胺溶液衍生试剂,振荡1min,静置10min。衍生溶
液过0.45μm滤膜后供高效液相色谱进样。
5.2.2 酸性食品模拟物的制备
用刻度吸量管吸取从迁移试验中获得的10.0mL酸性食品模拟物于25mL烧杯中,滴加入
5mol/L氢氧化钠溶液(3.2.4),体积同3.4.5中氢氧化钠溶液体积,充分混匀(溶液pH应在8.0~9.9范
围内)。用刻度吸量管吸取上述溶液2.0mL于5mL试管中,以下按5.2.1中“加入0.4mL硼酸缓冲液
供高效液相色谱进样”操作。
5.2.3 油基食品模拟物的制备
称取20.0g(精确至0.01g)橄榄油模拟物置于125mL分液漏斗中,分别加入1mL的四氢呋喃溶
液和5.0mL庚烷。充分混匀后,加入20mL乙酸溶液,振荡5min,静置15min,待两相完全分离后,收
集水相液体。用刻度吸量管吸取上述溶液中10.0mL于25mL烧杯中,滴加入5mol/L氢氧化钠溶液
(3.2.4),体积同3.4.6中氢氧化钠溶液体积,充分混匀(溶液pH应在8.0~9.9范围内)。用刻度吸量管
吸取上述溶液2.0mL于5mL试管中,以下按5.2.1中“加入0.4mL硼酸缓冲液供高效液相色谱
进样”操作。
5.3 空白溶液的制备
除不加试样外,采用与5.2完全相同的分析步骤、试剂和用量。
5.4 仪器参考条件
5.4.1 色谱柱:C18,柱长150mm,内径4.6mm,粒径5μm。
5.4.2 流动相:高效液相色谱流动相[硼酸缓冲液∶水∶甲醇(18∶37∶45)]。
5.4.3 流速:1.0mL/min。
5.4.4 柱温:30℃。
5.4.5 荧光检测器:激发波长394nm,发射波长480nm。
5.4.6 进样量:20μL。
5.5 绘制标准工作曲线
按5.4所列测定条件,分别将水基、酸性、酒精类、油基食品模拟物标准工作溶液(3.4.4、3.4.5、
3.4.6)进高效液相色谱仪器测定。以食品模拟物中1,3-苯二甲胺浓度为横坐标,单位为“mg/L(水基、
酸性、酒精类食品模拟物)或mg/kg(油基食品模拟物)”,以1.3-苯二甲胺峰面积为纵坐标,绘制标准工
作曲线。标准溶液色谱图见......