路径: 主页 > GB > 第29页 > GB 31658.11-2021 | 标准编号 | GB 31658.11-2021 (GB31658.11-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of albendazole and its metabolites residues in animal derived food by high performance liquid chromatography method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 8,848 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.11-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中阿苯达唑及其代谢物残留量的测定 高效液相色谱法
食品安全国家标准
动物性食品中阿苯达唑及其代谢物
残留量的测定 高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中阿苯达唑及其代谢物残留量的测定
高效液相色谱法
１ 范围
本文件规定了动物性食品中阿苯达唑及其代谢物残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法.
本文件适用于猪、牛、羊、鸡的肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织和牛奶中阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑-２-氨基砜残留量的检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语与定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的阿苯达唑及其代谢物经碱化、乙酸乙酯提取(脂肪试料采用盐酸水-乙腈溶液提取,牛奶
试料采用乙腈和乙酸乙酯提取),酸性氧化铝固相萃取柱及混合型阳离子交换固相萃取柱净化,高效液相
色谱-荧光检测器检测,外标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５.１ 试剂
５.２ 溶液配制
５.２.１ ２％碳酸钠溶液:取碳酸钠２.０g,用水溶解并稀释至１００mL.
５.２.２ ０.２mol/L盐酸溶液:取盐酸１.８mL,用水稀释至１００mL.
５.２.３ ０.２mol/L盐酸-乙腈溶液:取０.２mol/L盐酸溶液１０mL,加乙腈９０mL,混匀.
５.２.４ １０mol/L氢氧化钠溶液:取氢氧化钠４.０g,用水溶解并稀释至１０mL,冷却至室温.
５.２.５ ０.００４g/mL焦亚硫酸钠溶液:取焦亚硫酸钠０.４g,用水溶解并稀释至１００mL.
５.２.６ ０.１mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液:取乙二胺四乙酸二钠３.３６g,用水溶解并稀释至１００mL.
５.２.７ １０％氨化乙腈溶液:取氨水１０mL,加乙腈９０mL,混匀.
５.２.８ ０.５mol/L乙酸铵溶液:取１.９３g乙酸铵,用水溶解并稀释至５００mL,用冰醋酸调节pH至５.０,混匀.
５.２.９ 复溶液:取乙腈１０mL、甲醇１０mL,加０.５mol/L乙酸铵溶液８０mL,混匀.
５.２.１０ 乙腈-二甲基亚砜(９∶１):取乙腈９０mL、二甲基亚砜１０mL,混匀.
５.３ 标准品
５.３.１ 阿苯达唑(Albendazole,C１２H１５N３O２S,CAS号:５４９６５-２１-８):含量≥９９.０％.
５.３.２ 阿苯达唑砜(AlbendazoleSulfone,C１２H１５N３O４S,CAS号:７５１８４-７１-３):含量≥９８.３％.
５.３.４ 阿苯达唑-２-氨基砜(Albendazole-２-aminosulfone,C１０H１３N３O２S,CAS号:８０９８３-３４-２):含量≥９０.０％.
５.４ 标准溶液的制备
５.４.２ 混合标准中间液:分别准确移取阿苯达唑标准储备液２mL、阿苯达唑砜标准储备液０.２mL、阿苯达唑亚砜标准储备液２mL和阿苯达唑-２-氨基砜标准储备液１mL,于１０mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成阿苯达唑浓度为２０μg/mL、阿苯达唑砜浓度为２μg/mL、阿苯达唑亚砜浓度为２０μg/mL和阿苯达唑-２-氨基砜浓度为１０μg/mL的混合标准中间液.现用现配.
５.５ 材料
５.５.１ 酸性氧化铝固相萃取柱:１g/３mL,填料为酸性氧化铝,或相当者.
５.５.２ 混合型阳离子交换固相萃取柱:１５０mg/６mL,或相当者.
５.５.３ 尼龙微孔滤膜:０.２２μm.
６ 仪器和设备
６.１ 高效液相色谱仪:配荧光检测器.
６.２ 分析天平:感量０.０１g和感量０.００００１g.
６.３ 组织匀浆器.
６.４ 涡旋混合器.
６.５ 涡旋振荡器.
６.６ 离心机:转速可达１００００r/min.
６.７ 固相萃取装置.
６.８ 氮吹仪.
７ 试料的制备与保存
７.１ 试料的制备
７.１.１ 组织
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料.
７.１.２ 牛奶
取适量新鲜或解冻的空白或供试牛奶样品,混合均匀.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料.
７.２ 试料的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８.１ 提取
８.１.１ 肌肉、肝脏、肾脏
取试料２g(准确至±０.０２g),置于５０mL离心管,加２％的碳酸钠溶液０.５mL、二甲基亚砜１mL、
０.００４g/mL焦亚硫酸钠溶液１mL,涡旋１min.加乙酸乙酯１０mL,涡旋１min,振荡５min,１００００r/min离
心５min,取上清液.残渣加入乙酸乙酯１０mL重复提取１次,合并上清液,４０℃氮吹至近干.残渣加入正
己烷５mL,涡旋１min,再加入０.２mol/L盐酸-乙腈溶液２mL,涡旋１min,静置分层,弃去上层正己烷,
取下层溶液备用.
８.１.２ 脂肪
取试料２g(准确至±０.０２g),置于５０mL离心管,７０℃水浴加热使其融化,加２％的碳酸钠溶液
０.５mL、０.２mol/L盐酸水-乙腈溶液５mL,涡旋１min,振荡５min,１００００r/min离心５min,取上清液.残渣在７０℃水浴加热使其融化,加０.２mol/L盐酸水-乙腈溶液５mL重复提取,合并上清液.加正己烷５mL,涡旋１min,静置分层,弃去上层正己烷,加入正己烷５mL重复操作,取下层溶液备用.
８.１.３ 牛奶
取试料２g(准确至±０.０２g),置于５０mL离心管中,加１０mol/L氢氧化钠溶液５０μL、０.００４g/mL焦亚硫酸钠溶液０.５mL,涡旋１min,加乙腈１０mL、乙酸乙酯５mL,涡旋,振荡５min,１００００r/min离心５min,移取上清液.加无水硫酸钠５g,振荡５min,１００００r/min离心５min,取上清液,４０℃氮吹至近干.残渣加正己烷５mL,涡旋１min,再加入０.２mol/L盐酸水-乙腈溶液２mL,涡旋１min,静置分层,弃去上层正己烷,取下层溶液备用.
８.２ 净化
酸性氧化铝固相萃取柱依次用０.２mol/L盐酸水-乙腈溶液３mL、０.１mol/L乙二胺四乙酸二钠溶
液３mL活化,取备用液过柱,收集流出液,用０.２mol/L盐酸-乙腈溶液１mL淋洗,合并流出液,加
０.２mol/L盐酸溶液８mL,混匀.再通过依次用甲醇３mL、０.１mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液３mL、水
３mL、０.２mol/L盐酸溶液３mL活化的混合型阳离子交换固相萃取柱,用０.２mol/L盐酸溶液３mL、甲醇３mL淋洗,抽干１min,１０％氨化乙腈溶液５mL洗脱,抽干,收集洗脱液,４０℃水浴氮气吹干.用复溶
液１.０mL溶解残余物,过尼龙微孔滤膜后,供高效液相色谱测定(上机溶液应在７２h内完成测定).
８.３ 标准曲线的制备
准确移取混合标准中间液适量,用复溶液稀释阿苯达唑和阿苯达唑亚砜浓度为０.０５μg/mL、
０.１μg/mL、０.２ μg/mL、０.５ μg/mL、１ μg/mL、２ μg/mL,阿 苯 达 唑 砜 浓 度 为 ０.００５ μg/mL、０.０１μg/mL、０.０２μg/mL、０.０５ μg/mL、０.１ μg/mL、０.２ μg/mL,阿 苯 达 唑-２-氨 基 砜 浓 度 为０.０２５μg/mL、０.０５μg/mL、０.１μg/mL、０.２μg/mL、０.５μg/mL、１μg/mL的系列标准工作溶液,供高效液相色谱测定.以待测物峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.
８.４ 测定
８.４.１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８(１５０mm×４.６mm,５μm),或相当者;
b) 柱温:３０℃;
c) 进样量:２０μL;
d) 激发波长:２９０nm;
e) 发射波长:３３０nm;
f) 流动相:A为乙腈,B为甲醇,C为０.５mol/L乙酸铵溶液,梯度洗脱条件见表１.
８.４.２ 测定法
取试料溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.标准工作液及试料
溶液中阿苯达唑及其代谢物响应值应在仪器检测的线性范围之内.试料中阿苯达唑及其代谢物峰的保留
时间与标准工......
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