路径: 主页 > GB > 第29页 > GB 31658.13-2021 | 标准编号 | GB 31658.13-2021 (GB31658.13-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of robenidine residues in animal derived food by liquid chromatography-tandem mass spectrometric method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 7,738 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.13-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中氯苯胍残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
动物性食品中氯苯胍残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０《标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
本文件系首次发布.
１ 范围
本文件规定了动物性食品中氯苯胍残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱的检测方法.
本文件适用于鸡的肌肉、肝脏、肾脏和皮＋脂组织中氯苯胍残留量的测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的氯苯胍用０.１％甲酸乙腈提取,固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱法测定,内标法
定量.
５ 试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５.１ 试剂
５.１.１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５.１.２ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５.１.３ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
５.１.４ 正己烷(C６H１４).
５.１.５ 二甲亚砜(C２H６OS).
５.２ 溶液配制
５.２.１ ０.１％甲酸乙腈溶液:取甲酸０.１mL,用乙腈稀释至１００mL.
５.２.２ ８５％乙腈溶液:取乙腈８５mL,用水稀释至１００mL.
５.２.３ ０.１％甲酸水溶液:取甲酸０.１mL,用水稀释至１００mL.
５.２.４ ０.３％甲酸水溶液:取甲酸０.３mL,用水稀释至１００mL.
５.２.５ ５０％乙腈甲酸水溶液:取乙腈５０mL,用０.３％甲酸水溶液稀释至１００mL.
５.３ 标准品
５.３.２ 盐酸氯苯胍-D８(Robenidine-D８hydrochloride,C１５H６Cl３D８N５,CAS号:１１７３０９７-７７-２):含量≥９９.０％.
５.４ 标准溶液制备
５.４.１ 氯苯胍标准储备液:取盐酸氯苯胍标准品适量(相当于氯苯胍１０mg),精密称定,加甲醇适量使溶解并稀释定容至１０mL容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的标准储备液.-１８℃以下保存,有效期６个月.
５.４.２ 氯苯胍标准工作液:准确量取氯苯胍标准储备液１mL,于１００mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的氯苯胍标准工作液.２℃~８℃保存,有效期３个月.
５.４.３ 氯苯胍-D８内标储备液:取盐酸氯苯胍-D８标准品适量(相当于氯苯胍-D８１０mg),加二甲亚砜适量使溶解,用甲醇稀释定容至１０mL容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的氯苯胍-D８内标储备液.-１８℃以下保存,有效期６个月.
５.４.４ 氯苯胍-D８内标中间溶液:准确量取氯苯胍-D８内标储备液１mL,于１００mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的氯苯胍-D８内标中间溶液.２℃~８℃保存,有效期１个月.
５.４.５ 氯苯胍-D８内标工作溶液:准确量取氯苯胍-D８内标中间溶液１mL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１μg/mL的氯苯胍-D８内标工作液.现用现配.
５.５ 材料
１) 此处列出 HLB固相萃取柱仅是为了提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的固相萃取柱.
５.５.１ HLB固相萃取柱１):２００mg/３mL,或相当者.
５.５.２ 中性氧化铝固相萃取柱:５００mg/３mL,或相当者.
５.５.３ 尼龙微孔滤膜:０.２２μm.
５.５.４ 离心管:５０mL.
５.５.５ 刻度试管:１０mL,分度值０.１mL.
６ 仪器和设备
６.１ 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源.
６.２ 分析天平:感量０.００００１g和０.０１g.
６.３ 低温高速离心机:转速可达８０００r/min.
６.４ 组织匀浆器.
６.５ 涡旋混合器.
６.６ 固相萃取装置.
６.７ 氮吹仪.
７ 试料的制备与保存
７.１ 试料的制备
取新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作溶液,作为空白添加试料.
７.２ 样品的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８.１ 提取
取试料２g(准确至±０.０２g),于５０mL离心管,准确加氯苯胍-D８内标工作溶液１００μL,加０.１％甲酸乙腈溶液５mL,涡旋混合,中速振荡１０min,８０００r/min离心１０min,取上清液,再加水１mL,混匀,作为备用液１.
８.２ 净化
取中性氧化铝固相萃取柱,用乙腈２mL活化,取备用液１过柱,收集全部流出液于１０mL试管中,用
８５％乙腈溶液２mL淋洗,合并流出液,于４０℃氮气吹至体积小于２mL,再加水８mL,混匀,作为备用液２.取HLB固相萃取柱,依次用甲醇３mL、水３mL活化,取备用液２过柱,用水３mL淋洗,抽干３０s,正己烷３mL淋洗,抽干１０min,甲醇５mL洗脱,收集洗脱液,于４０℃氮气吹干,用５０％乙腈甲酸水溶液１.０mL溶解残余物,涡旋,尼龙微孔滤膜过滤,供液相色谱-串联质谱测定.
８.３ 标准曲线的制备
精密量取氯苯胍标准工作溶液、氯苯胍-D８内标工作溶液适量,用５０％乙腈甲酸水溶液稀释,配制成氯苯胍浓度为５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、２０ng/mL、５００ng/mL和氯苯胍-D８内标均为１００ng/mL的系列标准溶液,供液相色谱-串联质谱测定.以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、相对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.
８.４ 测定
８.４.１ 色谱条件参考条件
a) 色谱柱:C１８(１００mm×２.１mm,１.７μm),或相当者;
b) 柱温:３０℃;
c) 进样量:５μL;
d) 流速:０.３mL/min;
e) 流动相:A为乙腈,B为０.１％甲酸水溶液,梯度洗脱条件见表１.
８.５ 测定法
８.５.１ 定性测定
在同样测试条件下,试料溶液中氯苯胍的保留时间与标准工作液中氯苯胍的保留时间相对偏差在±
２.５％以内,且检测到的相对离子丰度,应当与浓度相当的校正标准溶液相对离子丰度一致.其允许偏差应符合表３的要求.
８.５.２ 定量测定
取试料溶液和相应的标准工作液,作单点或多点校准,按内标法以特征离子质量色谱峰面积定量,标
准工作液及试料溶液中的氯苯胍响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述色谱-质谱条件下,氯苯胍
标准溶液特征离子质量色谱图见附录A.
８.６ 空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试料中氯苯胍残留量按标准曲线或公式(１)计算.
１０ 检测方法灵敏度、准确......
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