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GB 4789.8-2016

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基本信息
标准编号 GB 4789.8-2016 (GB4789.8-2016)
中文名称 食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
英文名称 Microbiological examination of food hygiene -- Examination of Yersinia enterocolitica
行业 国家标准
中标分类 X09
字数估计 11,165
发布日期 2016-08-31
实施日期 2017-03-01
旧标准 (被替代) GB/T 4789.8-2008
标准依据 国家卫生和计划生育委员会公告2016年第11号

GB 4789.8-2016: 食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
GB 4789.8-2016 英文名称: Microbiological examination of food hygiene -- Examination of Yersinia enterocolitica
1 范围
本标准适用于食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验。
2 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.1 冰箱:0℃~4℃。
2.2 恒温培养箱:26℃±1℃、36℃±1℃。
2.3 显微镜:10倍~100倍。
2.4 均质器。
2.5 天平:感量0.1g。
2.6 灭菌试管。
2.7 灭菌吸管。
2.8 锥形瓶:200mL、500mL。
2.9 灭菌平皿:直径90mm。
2.10 微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂
3.1 改良磷酸盐缓冲液:见A.1。
3.2 CIN-1培养基:见A.2。
3.3 改良Y培养基:见A.3。
3.4 改良克氏双糖培养基:见A.4。
3.5 糖发酵管:见A.5。
3.6 鸟氨酸脱羧酶试验培养基:见A.6。
3.7 半固体琼脂:见A.7。
3.8 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和V-P试验用]:见A.8。
3.9 碱处理液:见A.9。
3.10 尿素培养基:见A.10。
3.11 营养琼脂:见A.11。
3.12 小肠结肠炎耶尔森氏菌诊断血清。
4 检验程序
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序见图1。
5 操作步骤
5.1 增菌
以无菌操作取25g(或25mL)样品放入含有225mL改良磷酸盐缓冲液增菌液的无菌均质杯或均
质袋内,以8000r/min均质1min或拍击式均质器均质1min。液体样品或粉末状样品,应振荡混匀。
均质后于26℃±1℃增菌48h~72h。增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定。
5.2 碱处理
除乳与乳制品外,其他食品的增菌液0.5mL与碱处理液4.5mL充分混合15s。
5.3 分离
将乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其他食品增菌液分别接种于CIN-1琼脂平板和改良Y琼脂
平板,26℃±1℃培养48h±2h。典型菌落在CIN-1上为深红色中心,周围具有无色透明圈(红色牛
眼状菌落),菌落大小为1mm~2mm,在改良Y琼脂平板上为无色透明、不黏稠的菌落。
5.4 改良克氏双糖试验
分别挑取5.3中的可疑菌落3个~5个,分别接种于改良克氏双糖铁琼脂,接种时先在斜面划线,再
于底层穿刺,26℃±1℃培养24h,将斜面和底部皆变黄且不产气的培养物做进一步的生化鉴定。
5.5 尿素酶试验和动力观察
用接种环挑取一满环5.4得到的可疑培养物,接种到尿素培养基中,接种量应足够大,振摇几秒钟,
26℃±1℃培养2h~4h。将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中,于26℃±1℃和
36℃±1℃培养24h。将在26℃有动力而36℃无动力的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板,进行
纯化培养,用纯化物进行革兰氏染色镜检和生化试验。
5.6 革兰氏染色镜检
将纯化的可疑菌进行革兰染色。
5.7 生化鉴定
5.7.1 从5.5中的营养琼脂平板上挑取单个菌落接种生化反应管,生化反应在26℃±1℃进行。小肠
结肠炎耶尔森氏菌的主要生化特征以及与其他相似菌的区别见表1。
5.7.2 如选择微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统,可根据5.6镜检结果,选择革兰阴性球杆
菌菌落作为可疑菌落,从5.5所接种的营养琼脂平板上挑取单菌落,使用微生物生化鉴定试剂盒或微生
物生化鉴定系统进行鉴定。
5.8 血清型鉴定(选做项目)
除进行生化鉴定外,可选择做血清型鉴定。在洁净的载玻片上加一滴O因子血清,将待试培养物
混入其内,使成为均一性混浊悬液,将玻片轻轻摇动0.5min~1min,在黑色背景下观察反应。如在
2min内出现比较明显的小颗粒状凝集者,即为阳性反应,反之则为阴性,另用生理盐水作对照试验,以
检查有无自凝现象;具体操作方法可按GB 4789.4中沙门氏菌O因子血清分型方法进行。
6 结果与报告
综合以上及生化特征报告结果,报告25g(或25mL)样品中检出或未检出小肠结肠炎耶尔森氏菌。
附 录 A
培养基和试剂
A.1 改良磷......
   
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