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| 标准编号 | GB 5009.26-2016 (GB5009.26-2016) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品中N-亚硝胺类化合物的测定 | | 英文名称 | Determination of N-nitrosamines in foods | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.040 | | 字数估计 | 11,111 | | 发布日期 | 2016-12-23 | | 实施日期 | 2017-06-23 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 5009.26-2003 | | 标准依据 | National Health and Family Planning Commission Notice No.17 of 2016 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会、国家食品药品监督管理总局 | | 范围 | 本标准规定了食品中N-二甲基亚硝胺含量的测定方法。本标准适用于肉及肉制品、水产动物及其制品中N-二甲基亚硝胺含量的测定。 | GB 5009.26-2016: 食品安全国家标准 食品中N-亚硝胺类化合物的测定
GB 5009.26-2016 英文名称: Determination of N-nitrosamines in foods
中华人民共和国国家标准
1 范围
本标准规定了食品中N-二甲基亚硝胺含量的测定方法。
本标准适用于肉及肉制品、水产动物及其制品中N-二甲基亚硝胺含量的测定。
第一法 气相色谱-质谱法
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 提取
水蒸馏装置蒸馏:准确称取200g(精确至0.01g)试样,加入100mL水和50g氯化钠于蒸馏管中,
充分混匀,检查气密性。在500mL平底烧瓶中加入100mL二氯甲烷及少量冰块用以接收冷凝液,冷
凝管出口伸入二氯甲烷液面下,并将平底烧瓶置于冰浴中,开启蒸馏装置加热蒸馏,收集400mL冷凝液后关闭加热装置,停止蒸馏。
5.1.2 萃取净化
在盛有蒸馏液的平底烧瓶中加入20g氯化钠和3mL的硫酸(1+3),搅拌使氯化钠完全溶解。然
后将溶液转移至500mL分液漏斗中,振荡5min,必要时放气,静置分层后,将二氯甲烷层转移至另一
平底烧瓶中,再用150mL二氯甲烷分三次提取水层,合并4次二氯甲烷萃取液,总体积约为250mL。
5.1.3 浓缩
将二氯甲烷萃取液用10g无水硫酸钠脱水后,进行旋转蒸发,于40℃水浴上浓缩至5mL~10mL
改氮吹,并准确定容至1.0mL,摇匀后待测定。
5.2 气相色谱-质谱测定条件
5.2.1 气相色谱条件
毛细管气相色谱柱:INNOWAX石英毛细管柱(柱长30m,内径0.25mm,膜厚0.25μm);进样口
温度:220℃;程序升温条件:初始柱温40℃,以10℃/min的速率升至80℃,以1℃/min的速率升至
100℃,再以20℃/min的速率升至240℃,保持2min;载气:氦气;流速:1.0mL/min;进样方式:不分
流进样;进样体积:1.0μL。
5.2.2 质谱条件
选择离子检测。9.9min开始扫描N-二甲基亚硝胺,选择离子为15.0,42.0,43.0,44.0,74.0;电子
轰击离子化源(EI),电压:70eV;离子化电流:300μA;离子源温度:230℃;接口温度:230℃;离子源真
空度:1.33×10-4Pa。
5.3 标准曲线的制作
分别准确吸取 N-亚硝胺的混合标准储备液(1μg/mL)配制标准系列的浓度为0.01μg/mL、
0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL的混合标准系列溶液,进样分析,质谱图
见图B.1,用峰面积对浓度进行线性回归,表明在给定的浓度范围内N-亚硝胺呈线性,回归方程分别为
y为峰面积,x为浓度(μg/mL)。
5.4 试样溶液的测定
将试样溶液注入气相色谱-质谱联用仪中,得到某一特定监测离子的峰面积,根据标准曲线计算得
到试样溶液中N-二甲基亚硝胺(μg/mL)。
7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
8 其他
当取样量为200g,浓缩体积为1.0mL时,本方法的检出限为0.3μg/kg,定量限为1.0μg/kg。
第二法 气相色谱-热能分析仪法
9 原理
试样经水蒸气蒸馏,样品中的N-二甲基亚硝胺随着蒸气通过二氯甲烷吸收,再以二氯甲烷液液萃
取、分离,供气相色谱-热能分析仪(GC-TEA)测定。
GC-TEA测定原理:自气相色谱柱分离后的N-二甲基亚硝胺在热解室中经特异性催化裂解产生
一氧化氮(NO)基团,后者与臭氧反应生成激发态NO*。当激发态NO*返回基态时发射出近红外光
(600nm~2800nm),并被光电倍增管检测(600nm~800nm)。由于特异性催化裂解,加上CTR过滤
器除去杂质,使热能分析仪只能检测NO基团,而成为N-亚硝胺类化合物的特异性检测器。
10 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。
10.1 试剂
10.1.1 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯,每批应取100mL在40℃水浴上用旋转蒸发仪浓缩至1mL,在
热能分析仪上应无阳性响应,如有阳性响应,则需经全玻璃装置重蒸后再试,直至阴性。
10.1.2 氯化钠(NaCl)。
10.1.3 无水硫酸钠(Na2SO4)。
10.1.4 硫酸(H2SO4)。
10.1.5 无水乙醇(C2H5OH)。
10.2 试剂配制硫酸溶液(1+3):量取30mL硫酸,缓缓倒入90mL冷水中,一边搅拌使得充分散热,冷却后小心混匀。
10.3 标准品
N-亚硝胺标准品(C2H6N2O,CAS号:62-75-9):纯度≥98.0%。
10.4 N-亚硝胺标准溶液的制备
10.4.1 N-亚硝胺(C2H6N2O,CAS号:62-75-9)标准溶液:用二氯甲烷配制成1mg/mL的溶液。
10.4.2 N-亚硝胺标准中间液(C2H6N2O,CAS号:62-75-9)标准使用液:用二氯甲烷配制成1μg/mL的标准使用液。
11 仪器和设备
11.1 气相色谱仪(GC)。
11.2 热能分析仪(TEA)。
11.3 全玻璃水蒸气蒸馏装置或等效的全自动水蒸气蒸馏装置(见图A.1)。
11.4 旋转蒸发仪。
11.5 氮吹仪。
11.6 制冰机。
11.7 电子天平:感量为0.01g和0.1mg。
12 分析步骤
12.1 试样制备
12.1.1 提取
水蒸馏装置蒸馏:准确称取200g(精确至0.01g)试样,加入100mL水和50g氯化钠于蒸馏管中,
充分混匀,检查气密性。在500mL平底烧瓶中加入100mL二氯甲烷及少量冰块用以接收冷凝液,冷
凝管出口伸入二氯甲烷液面下,并将平底烧瓶置于冰浴中,开启蒸馏装置加热蒸馏,收集400mL冷凝
液后关闭加热装置,停止蒸馏。
12.1.2 萃取净化
在盛有蒸馏液的平底烧瓶中加入20g氯化钠和3mL硫酸(1+3),搅拌使氯化钠完全溶解。然后
将溶液转移至500mL分液漏斗中,振荡5min,必要时放气,静置分层后,将二氯甲烷层转移至另一平
底烧瓶中,再用150mL二氯甲烷分三次提取水层,合并4次二氯甲烷萃取液,总体积约为250mL。
12.1.3 浓缩
将二氯甲烷萃取液用10g无水硫酸钠脱水后,进行旋转蒸发,于40℃水浴上浓缩至5mL~10mL
后改氮吹,并准确定容至1.0mL,摇匀后待测定。
12.2 仪器参考条件
12.2.1 气相色谱条件
气相色谱条件列出如下:
a) 色谱柱:VF-WAX毛细管色谱柱(柱长30m,内径为0.32mm,膜厚0.25μm,固定液为聚乙二醇)或相当型号色谱柱;
b) 进样口温度:120℃;
c) 程序升温条件:初始温度60℃保留2min,6℃/min升至150℃,20℃/min升至200℃,保留5min;
d) 载气:氮气(≥99.999%);
e) 流速:1.0mL/min;
f) 进样方式:不分流进样;
g) 进样体积:2μL。
12.2.2 热能分析仪条件热能分析仪条件列出如下:
a) 接口温度:250℃;
b) 热解室温度:500℃;
c) 真空度:59.85Pa~66.5Pa;
d) 氧气压力:13.79kPa;
e) 臭氧水平:244(22.8V)。
12.3 标准曲线的制作
分别准确吸取200μL、400μL、600μL、800μL、1000μLN-二甲基亚硝胺标准工作液(1μg/mL)
于1.0mL容量瓶中用二氯甲烷定容至1.0mL,其浓度分别为0.2μg/mL、0.4μg/mL、0.6μg/mL、
0.8μg/mL、1.0μg/mL。
将上述浓度梯度N-二甲基亚硝胺标准系列工作液分别注入GC-TEA中,用保留时间定性,测定
N-二甲基亚硝胺的峰面积,谱图见图C.1。以N-二甲基亚硝胺标准工作液的浓度为横坐标(μg/mL),以
N-二甲......
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