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GB 5009.5-2016

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基本信息
标准编号 GB 5009.5-2016 (GB5009.5-2016)
中文名称 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定
英文名称 National Food Safety Standard -- Determination of Protein in Foods
行业 国家标准
中标分类 C53
国际标准分类 67.040
字数估计 9,936
发布日期 2016-12-23
实施日期 2017-06-23
旧标准 (被替代) GB 5009.5-2010; GB/T 14489.2-2008; GB/T 15673-2009; GB/T 5511-2008; GB/T 9695.11-2008; GB/T 9823-2008
标准依据 National Health and Family Planning Commission Notice No.17 of 2016
发布机构 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会、国家食品药品监督管理总局
范围 本标准规定了食品中蛋白质的测定方法。本标准第一法和第二法适用于各种食品中蛋白质的测定,第三法适用于蛋白质含量在10g/100 g以上的粮食、豆类奶粉、米粉、蛋白质粉等固体试样的测定。本标准不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质的食品的测定。

GB 5009.5-2016: 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定
GB 5009.5-2016 英文名称: National Food Safety Standard -- Determination of Protein in Foods
中华人民共和国国家标准
1 范围
本标准规定了食品中蛋白质的测定方法。
本标准第一法和第二法适用于各种食品中蛋白质的测定,第三法适用于蛋白质含量在10g/100g
以上的粮食、豆类奶粉、米粉、蛋白质粉等固体试样的测定。
本标准不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质的食品的测定。第一法 凯氏定氮法
5 分析步骤
5.1 凯氏定氮法
5.1.1 试样处理:称取充分混匀的固体试样0.2g~2g、半固体试样2g~5g或液体试样10g~25g
(约当于30mg~40mg氮),精确至0.001g,移入干燥的100mL、250mL或500mL定氮瓶中,加入
0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸,轻摇后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45℃角斜支于有小孔的石
棉网上。小心加热,待内容物全部碳化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝
绿色并澄清透明后,再继续加热0.5h~1h。取下放冷,小心加入20mL水,放冷后,移入100mL容量
瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。同时做试剂空白试验。
5.1.2 测定:按图1装好定氮蒸馏装置,向水蒸气发生器内装水至2/3处,加入数粒玻璃珠,加甲基红乙
醇溶液数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾。
5.1.3 向接受瓶内加入10.0mL硼酸溶液及1滴~2滴A混合指示剂或B混合指示剂,并使冷凝管的
下端插入液面下,根据试样中氮含量,准确吸取2.0mL~10.0mL试样处理液由小玻杯注入反应室,以
10mL水洗涤小玻杯并使之流入反应室内,随后塞紧棒状玻塞。将10.0mL氢氧化钠溶液倒入小玻
杯,提起玻塞使其缓缓流入反应室,立即将玻塞盖紧,并水封。夹紧螺旋夹,开始蒸馏。蒸馏10min后
移动蒸馏液接收瓶,液面离开冷凝管下端,再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部,取下蒸
馏液接收瓶。尽快以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定至终点,如用A混合指示液,终点颜色为灰蓝色;如
用B混合指示液,终点颜色为浅灰红色。同时做试剂空白。
5.2 自动凯氏定氮仪法
称取充分混匀的固体试样0.2g~2g、半固体试样2g~5g或液体试样10g~25g(约当于30mg~
40mg氮),精确至0.001g,至消化管中,再加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸于消化炉进行
消化。当消化炉温度达到420℃之后,继续消化1h,此时消化管中的液体呈绿色透明状,取出冷却后加
入50mL水,于自动凯氏定氮仪(使用前加入氢氧化钠溶液,盐酸或硫酸标准溶液以及含有混合指示剂
A或B的硼酸溶液)上实现自动加液、蒸馏、滴定和记录滴定数据的过程。
7 精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第二法 分光光度法
8 原理
食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解,分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵,在pH4.8的乙
酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合
物。在波长400nm下测定吸光度值,与标准系列比较定量,结果乘以换算系数,即为蛋白质含量。
9 试剂和材料
9.1 试剂
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的三级水。
9.1.1 硫酸铜(CuSO4·5H2O)。
9.1.2 硫酸钾(K2SO4)。
9.1.3 硫酸(H2SO4):优级纯。
9.1.4 氢氧化钠(NaOH)。
9.1.5 对硝基苯酚(C6H5NO3)。
9.1.6 乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。
9.1.7 无水乙酸钠(CH3COONa)。
9.1.8 乙酸(CH3COOH):优级纯。
9.1.9 37%甲醛(HCHO)。
9.1.10 乙酰丙酮(C5H8O2)。
9.2 试剂配制
9.2.1 氢氧化钠溶液(300g/L):称取30g氢氧化钠加水溶解后,放冷,并稀释至100mL。
9.2.2 对硝基苯酚指示剂溶液(1g/L):称取0.1g对硝基苯酚指示剂溶于20mL95%乙醇中,加水稀释至100mL。
9.2.3 乙酸溶液(1mol/L):量取5.8mL乙酸,加水稀释至100mL。
9.2.4 乙酸钠溶液(1mol/L):称取41g无水乙酸钠或68g乙酸钠,加水溶解稀释至500mL。
9.2.5 乙酸钠-乙酸缓冲溶液:量取60mL乙酸钠溶液与40mL乙酸溶液混合,该溶液pH4.8。
9.2.6 显色剂:15mL甲醛与7.8mL乙酰丙酮混合,加水稀释至100mL,剧烈振摇混匀(室温下放置稳定3d)。
9.2.7 氨氮标准储备溶液(以氮计)(1.0g/L):称取105℃干燥2h的硫酸铵0.4720g加水溶解后移
于100mL容量瓶中,并稀释至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于1.0mg氮。
9.2.8 氨氮标准使用溶液(0.1g/L):用移液管吸取10.00mL氨氮标准储备液于100mL容量瓶内,加
水定容至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于0.1mg氮。
10 仪器和设备
10.1 分光光度计。
10.2 电热恒温水浴锅:100℃±0.5℃。
10.3 10mL具塞玻璃比色管。
10.4 天平:感量为1mg。
11 分析步骤
11.1 试样消解
称取充分混匀的固体试样0.1g~0.5g(精确至0.001g)、半固体试样0.2g~1g(精确至0.001g)
或液体试样1g~5g(精确至0.001g),移入干燥的100mL或250mL定氮瓶中,加入0.1g硫酸铜、1g
硫酸钾及5mL硫酸,摇匀后于瓶口放一小漏斗,将定氮瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。缓慢加
热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,
再继续加热0.5h。取下放冷,慢慢加入20mL水,放冷后移入50mL或100mL容量瓶中,并用少量水
洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。按同一方法做试剂空白试验。
11.2 试样溶液的制备
吸取2.00mL~5.00mL试样或试剂空白消化液于50mL或100mL容量瓶内,加1滴~2滴对硝
基苯酚指示剂溶液,摇匀后滴加氢氧化钠溶液中和至黄色,再滴加乙酸溶液至溶液无色,用水稀释至刻度,混匀。
11.3 标准曲线的绘制
吸取0.00mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL和1.00mL氨氮标准使用
溶液(相当于0.00μg、5.00μg、10.0μg、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg和100.0μg氮),分别置于
10mL比色管中。加4.0mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液及4.0mL显色剂,加水稀释至刻度,混匀。置于
100℃水浴中加热15min。取出用水冷却至室温后,移入1cm比色杯内,以零管为参比,于波长400nm
处测量吸光度值,根据标准各点吸光度值绘制标准曲线或计算线性回归方程。
11.4 试样测定
吸取0.50mL~2.00mL(约相当于氮< 100μg)试样溶液和同量的试剂空白溶液,分别于10mL比
色管中。加4.0mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液及4.0mL显色剂,加水稀释至刻度,混匀。置于100℃水浴
中加热15min。取出用水冷却至室温后,移入1cm比色杯内,以零管为参比,于波长400nm处测量吸
光度值,试样吸光度值与标准曲线比较定量或代入线性回归方程求出含量。
13 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第三法 燃烧法
14 原理
试样在900℃~1200℃高温下燃烧,燃烧过程中产生混合气体,其中的碳、硫等干扰气体和盐类
被吸收管吸收,氮氧化物被全部还原成氮气,形成的氮气气流通过热导检测器(TCD)进行检测。
15 仪器和设备
15.1 氮/蛋白质分析仪。
15.2......
   
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