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| 标准编号 | GB/T 17376-2008 (GB/T17376-2008) | | 中文名称 | 动植物油脂 脂肪酸甲酯制备 | | 英文名称 | Animal and vegetable fats and oils - Preparation of methyl esters of fatty acids | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | X14 | | 国际标准分类 | 67.200.10 | | 字数估计 | 25,248 | | 发布日期 | 2008-11-04 | | 实施日期 | 2009-01-20 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 17376-1998 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 15687 | | 采用标准 | ISO 5509-2000, IDT | | 起草单位 | 国家粮食储备局西安油脂科学研究设计院 | | 归口单位 | 全国粮油标准化技术委员会 | | 标准依据 | 国家标准批准发布公告2008年第18号(总第131号);国家卫生和计划生育委员会公告2016年第17号 | | 提出机构 | 国家粮食局 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | | 范围 | 本标准规定了脂肪酸甲脂的制备方法。本标准包括了从动植物油脂、脂肪酸及脂肪酸盐制备脂肪酸甲酯的方法。规定了以下三种甲酯化方法：a)三氟化硼法(见第3章)；b)三甲基氢氧化硫法(见第4章)；c)酯交换法(见第5章)。本标准适用于气相色谱、薄层色谱、红外光谱等需要甲酯衍生物的各种分析过程。 | GB/T 17376-2008: 动植物油脂 脂肪酸甲酯制备
GB/T 17376-2008 英文名称: Animal and vegetable fats and oils -- Preparation of methyl esters of fatty acids
中华人民共和国国家标准
GB/T １７３７６-２００８／ISO ５５０９：２０００
代替GB/T １７３７６-１９９８
动植物油脂 脂肪酸甲酯制备
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前 言
本标准等同采用ISO ５５０９：２０００《动植物油脂 脂肪酸甲酯制备》（英文版）。
为便于使用，本标准对ISO ５５０９：２０００进行了下列编辑性修改：
---删除国际标准的前言；
---“本国际标准”一词改为“本标准”；
---用小数点“．”代替作为小数点的逗号“，”。
本标准是对GB/T １７３７６-１９９８《动植物油脂 脂肪酸甲酯制备》的修订。
本标准与GB/T １７３７６-１９９８的主要差异如下：
---用异辛烷（色谱纯）代替庚烷试剂；
---用三甲基氢氧化硫（ＴＭＳＨ）法代替原标准中的“不用三氟化硼的替代方法”；
---用酯交换法代替原标准中的“四碳或四碳以上脂肪酸甲酯的特殊制备方法”；
---将各方法中常用到的一些主要分析程序及原标准的第６章内容放在附录Ａ中；
---增加了资料性附录Ｂ。
本标准自实施之日起代替GB/T １７３７６-１９９８。
本标准中附录Ａ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。
本标准由国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。
本标准负责起草单位：国家粮食储备局西安油脂科学研究设计院。
本标准参与起草单位：陕西省产品质量监督检验所、安徽大平工贸（集团）有限公司。
本标准起草人：孟橘、夏天文、陈勇、王慧芳、朱文鑫、任春明。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
---GB/T １７３７６-１９９８。
GB/T １７３７６-２００８／ISO ５５０９：２０００
动植物油脂 脂肪酸甲酯制备
１ 范围
本标准规定了脂肪酸甲脂的制备方法。
本标准包括了从动植物油脂、脂肪酸及脂肪酸盐制备脂肪酸甲酯的方法。规定了以下三种甲酯化
方法：
ａ） 三氟化硼法（见第３章）；
ｂ） 三甲基氢氧化硫法（见第４章）；
ｃ） 酯交换法（见第５章）。
本标准适用于气相色谱、薄层色谱、红外光谱等需要甲酯衍生物的各种分析过程。
２ 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T ６６８２-２００８，ISO ３６９６：２００８，ＭＯＤ）
GB/T １５６８７ 动植物油脂 试样的制备（GB/T １５６８７-２００８，ISO ６６１：２００３，ＩＤＴ）
３ 三氟化硼法（常用方法）
警告：方法中涉及到危险试剂的使用。应采取适当的防护措施以保护眼睛，并避免腐蚀性化学物品
灼伤的危险。三氟化硼有毒，建议分析人员尽量不用甲醇和三氟化硼制取三氟化硼甲醇溶液（见附录A
中第A．１章）。
３．１ 原理
甘油酯在氢氧化钠甲醇溶液中皂化，生成的脂肪酸盐与三氟化硼甲醇溶液反应生成甲酯。如果要
分析纯脂肪酸及其脂肪酸盐，则不需要皂化，直接与三氟化硼反应甲酯化。
３．２ 适用范围
本方法适用于大多数油脂及衍生物（脂肪酸、脂肪酸盐），不适用于乳脂和含有下列基团的化合物：
---次氧基化合物（如：酮基、环氧基、羟基、氢过氧基）；
---环丙烷和环丙烷基化合物；
---炔类脂肪酸。
如果油脂中仅含有少量的上述化合物（如棉籽油），仍可按第３章的一般方法进行酯化。否则要采
用第４章或第５章所述方法。
气相色谱分析中使用异辛烷做溶剂制得的甲酯溶液回收率最高，但对己酸甲酯的回收率只
有７５％。
３．３ 试剂
除有特殊说明，仅使用确认为分析纯的试剂。
３．３．１ 水：应符合GB/T ６６８２中３级水的要求。
３．３．２ 氢氧化钠甲醇溶液：约０．５ｍｏｌ／Ｌ。
将２ｇ氢氧化钠溶于１００ｍＬ含水不超过０．５％的甲醇中。该溶液存放时间较长时，可能会形成少
量白色的碳酸钠沉淀，但不会影响甲酯的制备。
GB/T １７３７６-２００８／ISO ５５０９：２０００
３．３．３ 三氟化硼甲醇溶液：质量分数１２％～１５％１）（见附录Ａ的第Ａ．１章）。
１） 可选购１４％、２０％、（ＭｅｒｃｋＮＯ．８．０１６６３）和５０％的市售试剂，提供此信息仅是为了方便本标准的使用者，而不
是对这些产品的认可。
３．３．４ 异辛烷（２，２，４-三甲基戊烷）：色谱纯（见附录Ａ的第Ａ．２章）。
警告：异辛烷易燃易爆，在空气中的爆炸极限为１．１％～６．０％（体积分数）。异辛烷有毒，不要误食
或吸入，操作应当在通风橱中进行。
３．３．５ 氯化钠：饱和水溶液。
３．３．６ 无水硫酸钠。
３．３．７ 氮气：含氧量低于５ｍｇ／ｋｇ。
３．３．８ 己烷：色谱纯，仅用于干酯制备。也可用石油醚：沸程４０℃～６０℃，溴值低于１，无残渣（见附录
Ａ的第Ａ．２章）。
３．３．９ 甲基红：１ｇ／Ｌ，溶于体积分数为６０％的乙醇中。
３．４ 仪器
实验室常用仪器，以及下列仪器：
３．４．１ 磨口烧瓶：５０ｍＬ或１００ｍＬ，具塞。
３．４．２ 回流冷凝器：有效长度２００ｍｍ～３００ｍｍ，具有与磨口烧瓶（３．４．１）配合的磨口接头。
３．４．３ 沸石：脱脂。
３．４．４ 移液管或自动加液器：至少１０ｍＬ。
３．４．５ 玻璃瓶：具螺旋盖，容量至少４ｍＬ。
３．４．６ 分液漏斗：２５０ｍＬ，用于干脂制备。
３．４．７ 旋转蒸发仪。
３．４．８ 分析天平：分度值为０．００１ｇ。
３．５ 试样制备
试样应为液体且无水、透明，按照GB/T １５６８７制备试样。如需加热样品，则采用刚好高于熔点的
温度。
３．６ 操作步骤
警告：三氟化硼有毒，以下操作需在通风橱里进行，玻璃器具用后，应立即用水冲洗。
３．６．１ 试样
根据所需样品试样量，按表１选择合适的烧瓶及适量的试剂和溶液。
３．６．２ 皂化
３．６．２．１ 油脂从３．６．２．２开始进行，脂肪酸及脂肪酸盐从３．６．２．３开始进行。
３．６．２．２ 将试样置于合适的烧瓶中（见表１和附录Ａ），加入适量（见表１）氢氧化钠甲醇溶液（３．３．２）
GB/T １７３７６-２００８／ISO ５５０９：２０００
及沸石（３．４．３），然后接上冷凝器（３．４．２）。
如果存在两个以上双键的脂肪酸，在回流前，迅速向烧瓶中导入几分钟干燥氮气（３．３．７）将空气
排掉。
在水浴上回流直至油滴消失，每３０ｓ～６０ｓ缓慢摇动烧瓶，以防止氢氧化钠形成固态附着在瓶壁
上。回流过程通常需要５ｍｉｎ～１０ｍｉｎ，有些情况可能会更长（见附录Ａ第Ａ．３章和第Ａ．４章）。用移
液管从冷凝器顶部加入适量（见表１）的三氟化硼甲醇溶液（３．３．３）于沸腾的溶液里。
接下来按照３．６．３或３．６．４步骤执行。
３．６．２．３ 将试样置于合适的烧瓶中（见表１），加入适量（见表１）的三氟化硼甲醇溶液（３．３．３），然后接
冷凝器（３．４．２）。
接下来按照３．６．３或３．６．４步骤执行。
３．６．３ 甲酯溶液制备（主要用于气液色谱分析）
３．６．３．１ 继续煮沸３ｍｉｎ。对于含长链脂肪酸的油脂，如鱼油，继续煮沸３０ｍｉｎ。
３．６．３．２ 从冷凝器顶部加入适量的异辛烷（３．３．４）于沸腾的混合溶液里。
３．６．３．３ 取下冷凝器，拿出烧瓶。立即加入２０ｍＬ氯化钠溶液（３．３．５）。塞住烧瓶，猛烈振摇至少
１５ｓ。
３．６．３．４ 继续加入氯化钠溶液（３．３．５）至烧瓶颈部，静置分层。
３．６．３．５ 吸取１ｍＬ～２ｍＬ上层异辛烷溶液于玻璃瓶（３．４．５）中，加入适量无水硫酸钠（３．３．６）去除溶
液中痕量的水，并按照以下几种方式注入气相色谱仪 ：
ａ） 直接注入填充柱（见附录Ａ的第Ａ．５章）；
ｂ） 先用异辛烷适度稀释再注入毛细管柱（见附录Ａ的第Ａ．６章）；
ｃ） 对于毛细管柱，特殊情况可使用沸点更低的庚烷稀释。
３．６．４ 干甲酯制备（用于薄层色谱或红外光谱分析）
３．６．４．１ 继续煮沸３ｍｉｎ。
３．６．４．２ 从冷凝器顶部加入适量的己烷（３．３．８）于沸腾的混合溶液里。
３．６．４．３ 取下冷凝器，拿出烧瓶。立即加入２０ｍＬ氯化钠溶液（３．３．５）。塞住烧瓶，猛烈振摇至少
１５ｓ。
３．６．４．４ 将混合溶液转移至２５０ｍＬ分液漏斗中（３．４．６）。加入约３０ｍＬ饱和氯化钠溶液，静置分层，
保留己烷液。放出的氯化钠溶液再用５０ｍＬ己烷（３．３．８）萃取两次。
３．６．４．５ 将己烷液和两次萃取物合并，然后用每次２０ｍＬ蒸馏水（３．３．１）洗涤，直至用甲基红试剂
（３．３．９）检验不显酸性为止。再用无水硫酸钠（３．３．６）干燥、过滤，用水浴通氮气流（３．３．７）或使用旋转蒸
发仪（３．４．７）蒸发溶剂。
在干酯制备过程中部分短链甲酯（Ｃ６～Ｃ１０）会流失，不足５００ｍｇ的试样，最好按比例减少氯化钠溶
液、溶剂和蒸馏水体积，见附录Ａ的第Ａ．６章。
４ 三甲基氢氧化硫（TMSH）法
警告：方法中涉及到危险试剂的使用。应采取适当的防护措施以保护眼睛，并避免腐蚀性化学物品
灼伤的危险。三甲基氢氧化硫甲醇溶液有毒。
４．１ 原理
试样溶解于甲基叔丁醚中，通过与三甲基氢氧化硫甲醇溶液进行酯交换来实现甲酯化。分析样品
时气化室温度高于２５０℃。如果样品中含有短链脂肪酸时（Ｃ４～Ｃ８），推荐使用戊酸甲酯作为内标物
（见４．２）。
４．２ 适用范围
本快速甲酯化方法仅适用于气相色谱分析用的甲酯制备。本方法适用于所有油脂，包括乳脂和含
有乳脂的混合物，未发现有不饱和脂肪酸的异构化。
本方法也适用于含有３．２中所列化学基团的物质，但不能肯定甲酯化是否完全，游离脂肪酸只有
７０％～８０％被甲酯化。
含有羟基的脂类会部分生成相应的邻甲基醚衍生物，这可能会干扰甲酯的气液色谱分离。因此如
样品含有较多羟基，则该方法不适宜，可用气质联用仪分析。
气液色谱分析时，柱温低则该方法不适用。另外，该方法不推荐使用极性固定相。
分析短链脂肪酸（Ｃ４～Ｃ８）时，若样品中不含戊酸建议使戊酸甲酯作为内标物。
４．３ 试剂
所有试剂均为分析纯。
４．３．１ 甲基叔丁醚。
４．３．２ 三甲基氢氧化硫甲醇溶液２）：０．２ｍｏｌ／Ｌ。４℃时，该溶液在密闭试管内可保存２个月以上。
注：如自制，制备方法参见参考文献［３］。
２） 三甲基氢氧化硫可由 Ｍａｃｈｅｒｅｙ-ＮａｇｅｌＧｍｂＨ 公司购买，提供此信息仅是为了方便本标准的使用者，而不是对
这些产品的认可。
４．３．３ 内标储备液：仅用于丁酸或己酸测定。称取大约２５０ｍｇ（精确至０．１ｍｇ）戊酸甲酯于５０ｍＬ容
量瓶中，用异辛烷溶解并稀释至刻度。
４．３．４ 内标参比液：仅用于丁酸或己酸测定。取１０ｍＬ储备液（４．３．３）于１００ｍＬ容量瓶中，用异辛烷
稀释至刻度。计算浓度（见附录Ａ的第Ａ．８章）。
４．３．５ 石油醚。
４．３．６ 无水硫酸钠。
４．４ 仪器
实验室常用仪器，以及下列仪器：
４．４．１ 试管：２ｍＬ，具磨口玻璃塞，或螺旋口自动进样瓶。
４．４．２ 移液管：１０００μＬ。
４．４．３ 容量瓶：５０ｍＬ和１００ｍＬ。
４．４．４ 滤纸。
４．４．５ 旋转蒸发仪。
４．５ 试样制备
试样应为液体且无水、透明，按照GB/T １５６８７制备试样。如需加热样品，则采用刚好高于熔点的
温度。
４．６ 步骤
４．６．１ 试样
称取１０ｍｇ±２ｍｇ样品于试管（４．４．１）中。如果样品含水量较高，适当增大称样量。对固态样品，
在约高于１０℃的温度下加热使其融化。避免温度过高加热。用石油醚（４．３．５）溶解样品，加入无水硫
酸钠（４．３．６）干燥３０ｍｉｎ，然后用滤纸过滤，再用石油醚洗涤残渣数次，用旋转蒸发仪（４．４．５）回收
溶剂。
４．６．２ 甲酯制备
４．６．２．１ 用移液管（４．４．２）移取５００μＬ甲基叔丁醚加入到试样中以溶解试样，......
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