路径: 主页 > GB/T > 第628页 > GB/T 18089-2008 | 标准编号 | GB/T 18089-2008 (GB/T18089-2008) | | 中文名称 | 蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和抗体检测技术 | | 英文名称 | Isolation, identification and serum neutralization antibody test in bluetongue virus | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 10,142 | | 发布日期 | 2008-12-31 | | 实施日期 | 2009-05-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 18089-2000 | | 标准依据 | 国家标准批准发布公告2008年第25号(总第138号) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | | 范围 | 本标准规定了蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和抗体检测的技术。本标准适用于蓝舌病病毒的分离、鉴定及动物感染蓝舌病病毒后血清中和抗体的检测。 | GB/T 18089-2008
Isolation, identification and serum neutralization antibody test in bluetongue virus
ICS １１．２２０
B４１
中华人民共和国国家标准
GB/T １８０８９-２００８
代替GB/T １８０８９-２０００
蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和
抗体检测技术
２００８-１２-３１发布
２００９-０５-０１实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准代替GB/T １８０８９-２０００《蓝舌病微量血清中和试验及病毒分离和鉴定方法》。
本标准与GB/T １８０８９-２０００相比主要变化如下：
---对标准名称进行了修改；
---删除了蓝舌病病毒鉴定中的病毒中和试验部分；
---增加了病毒鉴定中ＲＴ-ＰＣＲ方法的鉴定。
本标准的附录Ａ为规范性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检
疫局。
本标准主要起草人：周晓黎、杨建明、艾军、花群义、杨晓花、张其艳、严树发、董俊、叶玲玲、徐维加。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
---GB/T １８０８９-２０００。
GB/T １８０８９-２００８
蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和
抗体检测技术
１ 范围
本标准规定了蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和抗体检测的技术。
本标准适用于蓝舌病病毒的分离、鉴定及动物感染蓝舌病病毒后血清中和抗体的检测。
２ 符号和缩略语
下列符号和缩略语适用于本标准。
ＢＨＫ２１---幼仓鼠肾细胞株；
ＢＬＰ---乳糖蛋白胨缓冲肉汤；
ＢＴ---蓝舌病；
ｂｐ---碱基对；
ＣＰＥ---致细胞病变作用；
Ｃ６／３６---蚊子细胞株；
ＤＥＰＣ---焦碳酸二乙酯；
ＳＰＦ---无特定病原体；
ＴＣＩＤ５０---半数组织培养感染量；
Ｖｅｒｏ---非洲绿猴肾细胞株。
３ 蓝舌病病毒分离
３．１ 材料
１０日龄～１１日龄ＳＰＦ鸡胚。
３．２ 设备与器材
鸡胚开孔器、照蛋灯或照蛋箱、乳钵或组织捣碎器、倒置显微镜。
３．３ 试验程序
３．３．１ 样品
肝素抗凝血（每５ｍＬ血液用１０ＩＵ肝素）、脏器（脾、肝、肾、淋巴结）、精液、库蠓。用于病毒分离的
样品应置冷藏容器中保存，在２４ｈ内送到实验室，并立即进行处理。
３．３．２ 血液样品制备
取肝素抗凝血５ｍＬ，用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，配方见附录Ａ）洗涤血样３次～４次，每次２０００ｒ／ｍｉｎ
离心１０ｍｉｎ，弃上清液后加入倍量ＢＬＰ（配方见附录Ａ），置冰浴中用超声波处理（４０μＡ、１ｍｉｎ）。经处
理的样品当天使用，使用前置４℃保存，剩余样品置-７０℃保存备用。
３．３．３ 组织样品制备
无菌采集动物脾、淋巴结、肝、肾各５ｇ，剪碎后加入ＢＬＰ１０ｍＬ（含青霉素２０００ＩＵ／ｍＬ、链霉素
２０００μｇ／ｍＬ），置乳钵中研磨，４℃冰箱中浸提４ｈ，取上清液５ｍＬ用超声波裂解处理（１００μＡ、１ｍｉｎ～
２ｍｉｎ）或冻融三次，３０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，取上清液使用，使用前置４℃保存，剩余样品置-７０℃......
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