标准搜索结果: 'GB/T 18204.3-2025'
| 标准编号 | GB/T 18204.3-2025 (GB/T18204.3-2025) | | 中文名称 | 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物指标 | | 英文名称 | Examination methods for public places - Part 3: Airborne microorganism indicators | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | C51 | | 国际标准分类 | 13.060 | | 字数估计 | 24,247 | | 发布日期 | 2025-05-30 | | 实施日期 | 2025-12-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 18204.3-2013 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 18204.3-2025: 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物指标
ICS 13.060
CCSC51
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 18204.3-2013
公共场所卫生检验方法
第3部分:空气微生物指标
2025-05-30发布
2025-12-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
目次
前言 Ⅲ
引言 Ⅳ
1 范围 1
2 规范性引用文件 1
3 术语和定义 1
4 细菌总数 2
5 真菌总数 4
6 β-溶血性链球菌 7
7 嗜肺军团菌 9
附录A(规范性) 现场采样检测布点要求 17
参考文献 19
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件是GB/T 18204《公共场所卫生检验方法》的第3部分。GB/T 18204已经发布了以下部分:
---第1部分:物理性指标;
---第2部分:化学性指标;
---第3部分:空气微生物指标;
---第4部分:公共用品用具微生物指标;
---第5部分:集中空调通风系统;
---第6部分:卫生监测技术规范。
本文件代替 GB/T 18204.3-2013《公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物》,与
GB/T 18204.3-2013相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下:
a) 更改了“范围”(见第1章,2013年版的第1章);
b) 更改了“撞击法”“自然沉降法”的术语和定义(见3.5、3.6,2013年版的2.5、2.6);
c) 增加了“细菌总数”样品的保存和运输、结果计算、质量控制(见4.1.4.4、4.1.6.1、4.1.7和
4.2.4.4、4.2.6.1、4.2.7);
d) 增加了“真菌总数”样品的保存和运输、结果计算、质量控制(见5.1.4.4、5.1.6.1、5.1.7和
5.2.4.4、5.2.6.1、5.2.7);
e) 增加了“β-溶血性链球菌”样品的保存和运输、革兰氏染色镜检、触媒试验等生化鉴定、结果计
算、质量控制(见6.4.4、6.5.3~6.5.5、6.6.1、6.7);
f) 增加了“嗜肺军团菌”样品的保存和运输、生化鉴定、血清型鉴定、质量控制(见7.1.4.4、7.1.5.6、
7.1.5.7、7.1.6、7.1.7);
g) 增加了“嗜肺军团菌”的荧光聚合酶链(PCR)快速检测法(见7.2)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由国家疾病预防控制局提出并归口。
本文件起草单位:中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、江苏省疾病预防控制中心、
深圳市疾病预防控制中心、常州市疾病预防控制中心。
本文件主要起草人:姚孝元、唐宋、李霞、丁珵、丁震、周连、余淑苑、丁培、毛怡心、石晓路、谈立峰、
马恺。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
---2000年首次发布为GB/T 18204.1-2000《公共场所空气微生物检验方法 细菌总数测定》;
---2013年第一次修订,标准编号改为GB/T 18204.3-2013,代替GB/T 18204.1-2000,部分代
替GB/T 17220-1998《公共场所卫生监测技术规范》中空气微生物采样要求;
---本次为第二次修订。
引 言
GB/T 18204《公共场所卫生检验方法》是推荐性国家标准,与GB 37488《公共场所卫生指标及限值
要求》相配套使用,是开展公共场所卫生监测推荐遵循的标准检验方法。GB/T 18204(所有部分)的发
布有利于规范公共场所相关的样品采集、现场和实验室检测,提升检测机构检测结果的精密度、准确度
和可比性,为保障公共场所卫生安全和人群健康提供重要支撑。本文件是GB/T 18204的第3部分,本
次修订对GB 37488中涉及空气微生物指标的检验方法进行了完善,补充了各项指标采样后的运输和
保存要求、结果计算、质量控制要求,增加了β-溶血性链球菌的生化鉴定步骤,补充了嗜肺军团菌的定
量检测方法和荧光PCR快速检测法,从而有针对性地解决前版标准中部分指标存在操作步骤不清、缺
乏质量控制等问题,提高检验方法的科学性、准确性和适用性。
GB/T 18204由6个部分构成。
---第1部分:物理性指标。目的在于提供公共场所中物理性指标的现场检测的基本原则和要求。
---第2部分:化学性指标。目的在于提供公共场所中化学性指标的样品采集和实验室检测的基
本原则和要求。
---第3部分:空气微生物指标。目的在于提供公共场所中空气微生物指标的样品采集和实验室
检测的基本原则和要求。
---第4部分:公共用品用具微生物指标。目的在于提供公共场所中公共用品用具微生物指标的
样品采集和实验室检测的基本原则和要求。
---第5部分:集中空调通风系统。目的在于提供公共场所中集中空调通风系统指标的样品采集
和实验室检测的基本原则和要求。
---第6部分:卫生监测技术规范。目的在于规范公共场所卫生监测的频次与样本量、质量控制等
技术要求。
公共场所卫生检验方法
第3部分:空气微生物指标
1 范围
本文件描述了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与检
验方法。
本文件适用于公共场所中空气微生物指标的测定,其他场所参照执行。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 19489 实验室 生物安全通用要求
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
细菌总数 totalbacterialcount
在营养琼脂培养基上经36℃±1℃培养48h所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的
总数。
3.2
真菌总数 totalfungalcount
在沙氏琼脂培养基上经28℃±1℃、3d~5d培养所形成的菌落数。
3.3
能产生溶血素,血平板上在菌落周围形成界限分明、完全透明的溶血环(β-型溶血)的化脓(或 A
群)链球菌和无乳(或B群)链球菌。
[来源:GB 4789.11-2014,2.2,有修改]
3.4
两端钝圆,有鞭毛,无芽孢和荚膜的革兰氏阴性杆菌,具有在含有L-半胱氨酸和三价铁盐缓冲液的
活性炭-酵母提取液培养基上生长的特性,经生化试验和血清学试验鉴定确认的一种具有致病性的军团
菌,是引起军团菌病的主要菌型。
[来源:GB/T 40392-2021,3.2,有修改]
3.5
撞击法 impactingmethod
采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过惯性撞击,从而将悬浮在空气中的微生物采集到采样介
质上的采样方法。
3.6
自然沉降法 naturalsinkingmethod
将培养基平板暴露在空气中,微生物依靠重力作用自然沉降到平板上的采样方法。
4 细菌总数
4.1 撞击法
4.1.1 原理
采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过狭缝或小孔产生高速气流,将悬浮在空气中的微生物采
集到营养琼脂平板上,经36℃±1℃、48h培养后得到细菌菌落数。
4.1.2 仪器和耗材
本方法中使用的主要仪器和耗材如下:
---六级筛孔撞击式微生物采样器;
---高压蒸汽灭菌器;
---恒温培养箱:36℃±1℃;
---无菌平皿:直径为90mm;
---pH计或精密pH试纸。
4.1.3 营养琼脂培养基
4.1.3.1 成分
蛋白胨10.0g,牛肉浸膏3.0g,氯化钠5.0g,琼脂20.0g,纯水1000mL。也可采用符合
GB 4789.28要求的成品培养基。纯水水质应符合GB/T 6682三级水或以上的要求。
4.1.3.2 制法
将蛋白胨、牛肉浸膏、氯化钠溶于纯水中,校正pH 为7.4±0.2,加入琼脂,121℃,15min高压灭
菌。待冷却到45℃~50℃时,以无菌操作每皿倾注15mL培养基于平皿中,冷却后制成平板备用。
4.1.4 采样
4.1.4.1 采样点:应符合附录A中A.1的要求。
4.1.4.2 采样环境条件:采样时关闭门窗15min~30min,在难以关闭门窗的公共场所(如商场、候车室
等)采样时,应保持当时的环境状态。记录室内空调等设备运行状况、门窗状况、人员数量、温湿度及天
气状况等。
4.1.4.3 采样方法:应无菌操作,将营养琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器,以28.3L/min
流量采集5min~15min。采样器使用应按照说明书要求进行。
4.1.4.4 样品的保存和运输:将采集后的平板储存于4℃的环境,并于4h内返回实验室进行培养。
4.1.5 检验步骤
将采集后的营养琼脂平板倒置于36℃±1℃培养箱中培养48h±2h,菌落计数。
4.1.6 检验结果
4.1.6.1 结果计算
公共场所空气中细菌总数浓度按公式(1)计算。计算得出的细菌总数的值应四舍五入到整数。
C=
i=1
Ni×1000
v×t
(1)
式中:
C ---细菌总数浓度,单位为菌落形成单位每立方米(CFU/m3);
Ni---每级平板菌落数,单位为菌落形成单位(CFU);
v---采样流量,单位为升每分(L/min);
t ---采样时间,单位为分(min);
i ---平板数量。
4.1.6.2 结果报告
一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌总数测定值的最大值报告,检验
结果以菌落形成单位每立方米(CFU/m3)表示。
4.1.7 质量控制
4.1.7.1 每批培养基平板配置后应做无菌检查,可每批选定3块平板,按4.1.5的步骤培养观察,结果应
无菌落生长。
4.1.7.2 采样器应定期在负载条件下用检定/校准合格的流量计进行校准,相对偏差不应超过5%;在
采样前应对采样系统的气密性进行检查,不应漏气;如喷孔有塞物,可用中性洗涤剂温水或超声波清洗
撞击器;若喷孔发生阻塞,可用高压气流或配备的细针清除。采样前应用75%医用酒精棉擦拭采样
头,待酒精挥发后采样。
4.1.7.3 在采样开始前,确保所用试剂和材料为无菌状态,操作过程和样品运输中应无菌操作,避免人
为污染。
4.1.7.4 为避免运输和保存过程中的污染,应同时进行现场空白对照试验,每次或每个区域取一个对照
平板,与采样平板同法操作但不需暴露采样,然后与采样后的平板一起放入培养箱培养,结果应无菌落
生长。如空白对照有菌生长,则本批次样品作废,需重新采样检测。
4.1.7.5 实验人员个体防护和检测废弃物的处理应按照GB 19489执行。
4.2 自然沉降法
4.2.1 原理
将营养琼脂平板暴露在空气中,微生物依靠重力作用自然沉降到平板上,经36℃±1℃、48h培养
后得到细菌菌落数。
4.2.2 仪器和耗材
本方法中使用的仪器和耗材如下:
---高压蒸汽灭菌器;
---恒温培养箱:36℃±1℃;
---采样支架;
---无菌平皿:直径为90mm;
---pH计或精密pH试纸。
4.2.3 营养琼脂培养基
应符合4.1.3的要求。
4.2.4 采样
4.2.4.1 采样点:应符合A.2的要求。
4.2.4.2 采样环境条件:应符合4.1.4.2的要求。
4.2.4.3 采样方法:应无菌操作,将营养琼脂平板置于采样点处,打开皿盖,暴露5min后盖上皿盖。
4.2.4.4 样品的保存和运输:应符合4.1.4.4的要求。
4.2.5 检验步骤
应符合4.1.5的要求。
4.2.6 检验结果
4.2.6.1 结果计算
计数每块平板上生长的菌落数。
4.2.6.2 结果报告
一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌总数测定值的平均值报告,检验
结果以菌落形成单位每平皿(CFU/皿)表示,计算得出的细菌总数的值应四舍五入到整数。
4.2.7 质量控制
应符合4.1.7.1~4.1.7.5的要求。
5 真菌总数
5.1 撞击法
5.1.1 原理
采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过狭缝或小孔产生高速气流,从而将悬浮在空气中的微生
物采集到沙氏琼脂平板上,经28℃±1℃、3d~5d培养后得到真菌菌落数。
5.1.2 仪器和耗材
本方法中使用的仪器和耗材如下:
---六级筛孔撞击式微生物采样器;
---高压蒸汽灭菌器;
---真菌培养箱:28℃±1℃;
---无菌平皿:直径为90mm;
---pH计或精密pH试纸。
5.1.3 沙氏琼脂培养基
5.1.3.1 成分
蛋白胨10.0g,葡萄糖40.0g,琼脂20.0g,纯水1000mL。也可采用符合GB 4789.28要求的成品
培养基。
5.1.3.2 制法
将蛋白胨和葡萄糖溶解于纯水,调整pH为5.6±0.2,分装于玻璃容器中,经115℃高压蒸汽灭菌
15min。待冷却到45℃~50℃时,以无菌操作每皿倾注15mL培养基于平皿中,冷却后制成沙氏琼脂
平板备用。
5.1.4 采样
5.1.4.1 采样布点:应符合A.1的要求。
5.1.4.2 采样环境条件:应符合4.1.4.2的要求。
5.1.4.3 采样方法:应无菌操作,将沙氏琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器,以28.3L/min
流量采集5min~15min,采样器使用按照说明书要求进行。
5.1.4.4 样品的保存和运输:应符合4.1.4.4的要求。
5.1.5 检验步骤
将采集真菌后的沙氏琼脂平板倒置于28℃±1℃的真菌培养箱中培养,第3天开始观察真菌生长
情况,并于第5天记录结果。若真菌数量过多,可于第3天计数结果并记录培养时间。
5.1.6 检验结果
5.1.6.1 结果计算
公共场所内空气中真菌总数浓度按公式(2)计算。计算得出的真菌总数的值应四舍五入到整数。
C=
i=1
Ni×1000
v×t
(2)
式中:
C ---真菌总数浓度,单位为菌落形成单位每立方米(CFU/m3);
Ni---每级平板菌落数,单位为菌落形成单位(CFU);
v ---采样流量,单位为升每分(L/min);
t ---采样时间,单位为分(min);
i ---平板数量。
5.1.6.2 结果报告
一个区域空气中真菌总数的测定结果按该区域全部采样点中真菌总数测定值的最大值报告,检验
结果以菌落形成单位每立方米(CFU/m3)表示。
5.1.7 质量控制
5.1.7.1 每批培养基平板配置后应做无菌检查,可每批选定3块平板,按5.1.5的步骤培养观察,结果应
无菌落生长。
5.1.7.2 其他质量控制应符合4.1.7.2~4.1.7.5的要求。
5.2 自然沉降法
5.2.1 原理
将沙氏琼脂平板暴露在空气中,微生物依靠重力作用自然沉降到平板上,经实验室培养后得到真菌
总数。
5.2.2 仪器和耗材
本方法中使用的仪器和耗材如下:
---高压蒸汽灭菌器;
---真菌培养箱:28℃±1℃;
---采样支架;
---无菌平皿:直径为90mm;
---pH计或精密pH试纸。
5.2.3 沙氏琼脂培养基
应符合5.1.3的要求。
5.2.4 采样
5.2.4.1 采样点:应符合A.2的要求。
5.2.4.2 采样环境条件:应符合4.1.4.2的要求。
5.2.4.3 采样方法:应无菌操作,将沙氏琼脂平板置于采样点处,打开皿盖,暴露5min后盖上皿盖。
5.2.4.4 样品运输和保存:应符合4.1.4.4的要求。
5.2.5 检验步骤
应符合5.1.5的要求。
5.2.6 检验结果
5.2.6.1 结果计算
计数每块平板上生长的真菌菌落数。
5.2.6.2 结果报告
一个区域空气中真菌总数的测定结果按该区域全部采样点中真菌总数测定值的平均值报告,检验
结果以菌落形成单位每平皿(CFU/皿)表示,计算得出的真菌总数的值应四舍五入到整数。
5.2.7 质量控制
应符合5.1.7.1和4.1.7.3~4.1.7.5的要求。
6 β-溶血性链球菌
6.1 原理
采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过狭缝或小孔产生高速气流,从而将悬浮在空气中的微生
物采集到血琼脂平板上,经36℃±1℃,培养18h~24h后计数和生化鉴定,得到β-溶血性链球菌菌
落数。
6.2 仪器和耗材
本方法中使用的仪器和耗材如下:
---六级筛孔撞击式微生物采样器;
---高压蒸汽灭菌器;
---恒温培养箱:36℃±1℃;
---普通显微镜:10倍~100倍;
---电子天平;
---pH计或精密pH试纸。
6.3 培养基和试剂
6.3.1 血琼脂平板
6.3.1.1 成分
蛋白胨10.0g,氯化钠5.0g,琼脂20.0g,脱纤维羊血50mL~100mL,纯水1000mL。也可采用
符合GB 4789.28要求的成品培养基。
6.3.1.2 制法
脱纤维羊血:在无菌操作条件下,将羊血加入盛有灭菌玻璃珠的容器中,振摇10min左右,静置后
除去附有血纤维的玻璃珠即可。
将蛋白胨、氯化钠、琼脂加热溶化于纯水中,校正pH为7.5±0.1,121℃,15min灭菌。待冷却至
45℃左右,以无菌操作加入无菌脱纤维羊血,摇匀后每皿倾注15mL培养基于平皿中,制成血琼脂平板
备用。
6.3.2 革兰氏染色液
6.3.2.1 结晶紫染色液
6.3.2.1.1 成分
结晶紫1.0g,95%(体积分数)乙醇20mL,1%草酸铵水溶液80mL。
6.3.2.1.2 制法
将结晶紫完全溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。
6.3.2.2 革兰氏碘液
6.3.2.2.1 成分
碘1.0g,碘化钾2.0g,纯水300mL。
6.3.2.2.2 制法
将碘与碘化钾先进行混合,加入少许纯水充分振摇,待完全溶解后,再加纯水至300mL。
6.3.2.3 沙黄复染液
6.3.2.3.1 成分
沙黄0.25g,95%(体积分数)乙醇10mL,纯水90mL。
6.3.2.3.2 制法
将沙黄溶解于乙醇中,然后用纯水稀释。
6.3.2.4 染色方法
将涂片在酒精灯火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗,滴加革兰氏碘液,作用1min,水
洗,滴加95%(体积分数)乙醇脱色,约15s~30s,直至染色液被洗掉,不要过分脱色,水洗,滴加复染
液,复染1min,水洗后进行干燥,镜检。
6.3.3 3%过氧化氢(H2O2)溶液
吸取100mL30%过氧化氢溶液,溶于900mL纯水中,混匀,分装备用。
6.4 采样
6.4.1 采样布点:应符合A.1的要求。
6.4.2 采样环境条件:应符合4.1.4.2的要求。
6.4.3 采样方法:应无菌操作,将血琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器,以28.3L/min流
量采集5min~15min,采样器使用按照说明书要求进行。
6.4.4 样品的保存和运输:应符合4.1.4.4的要求。
6.5 检验步骤
6.5.1 培养方法:采样后的血琼脂平板在36℃±1℃培养箱中培养18h~24h。
6.5.2 菌落形态:培养后,在血琼脂平板上形成灰白色、表面突起、直径0.5mm~0.7mm的细小菌
落,菌落透明或半透明,表面光滑有乳光;菌落周围有明显的2mm~4mm界限分明、完全透明无色溶
血环。
6.5.3 革兰氏染色镜检:挑取可疑菌落纯化后染色镜检。β-溶血性链球菌为革兰氏阳性无芽孢球菌,圆
形或卵圆形,呈链状排列。
6.5.4 触酶试验:挑取可疑菌落于洁净的载玻片上,滴加适量的3%过氧化氢溶液,立即产生气泡者为
阳性,β-溶血性链球菌为阴性。
6.5.5 其他检验:使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。
6.5.6 综合以上实验结果,确定为β-溶血性链球菌。
6.6 检验结果
6.6.1 结果计算
公共场所内空气中β-溶血性链球菌浓度按公式(3)计算。计算得出的β-溶血性链球菌的值应四舍
五入到整数。
C=
i=1
Ni×1000
v×t
(3)
式中:
C ---β-溶血性链球菌浓度,单位为菌落形成单位每立方米(CFU/m3);
Ni---每级平板经生化鉴定为β-溶血性链球菌阳性的菌落数,单位为菌落形成单位(CFU);
v ---采样流量,单位为升每分(L/min);
t ---采样时间,单位为分(min);
i ---平板数量。
6.6.2 结果报告
一个区域空气中β-溶血性链球菌的测定结果按该区域全部采样点中β-溶血性链球菌测定值中的最
大值给出。在所有平板均无可疑菌落生长时报告该区域β-溶血性链球菌未检出。
6.7 质量控制
6.7.1 试验应设置阳性对照(β-溶血性链球菌标准菌株ATCC21059或其他等效标准菌株)和阴性对照
(金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923或其他等效标准菌株)。
6.7.2 每批培养基平......
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