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[PDF] GB/T 18448.2-2008 - 英文版

标准号码	内文	价格美元	第2步(购买)	交付天数	标准名称	状态
GB/T 18448.2-2008	英文版	229	GB/T 18448.2-2008	[PDF]天数 >=3	实验动物　弓形虫检测方法	有效

基本信息
标准编号	GB/T 18448.2-2008 (GB/T18448.2-2008)
中文名称	实验动物　弓形虫检测方法
英文名称	Laboratory animal -- Method for examination of Toxoplasma gondii
行业	国家标准 (推荐)
中标分类	B44
国际标准分类	65.020.30
字数估计	10,150
发布日期	2008-12-03
实施日期	2009-03-01
旧标准 (被替代)	GB/T 18448.2-2001
标准依据	国家标准批准发布公告2008年第19号(总第132号)
发布机构	中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会
范围	GB/T 18448的本部分规定了实验动物弓形虫的检测方法和试剂等。本部分适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬及猴等实验动物弓形虫的检测。

GB/T 18448.2-2008 Laboratory animal.Method for examination of Toxoplasma gondii ICS ６５．０２０．３０ B４４中华人民共和国国家标准 GB/T １８４４８．２-２００８代替GB/T １８４４８．２-２００１实验动物　弓形虫检测方法２００８-１２-０３发布２００９-０３-０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布前言 GB/T １８４４８《实验动物》由１０项实验动物寄生虫检测方法组成。本部分为GB/T １８４４８的第２部分《实验动物　弓形虫检测方法》。本部分自实施之日起代替GB/T １８４４８．２-２００１。本部分与GB/T １８４４８．２-２００１相比主要技术差异如下：ａ）　增加弓形虫酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫酶染色试验（ＩＥＡ），将ＰＣＲ检测方法列入附录内容，保留间接血凝试验（ＩＨＡ）作为推荐方法之一；ｂ）　将检测方法所需的“材料与试剂”和“检测步骤”分别叙述。本部分附录Ａ是规范性附录。本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。本部分起草单位：全国实验动物标准化技术委员会。本部分主要起草人：潘振业、屈霞琴、陈俏梅、李冠民、王彦平。本部分所代替标准的历次版本发布情况为： ---GB/T １４９２６．３４-１９９４，GB/T １８４４８．２-２００１。 GB/T １８４４８．２-２００８实验动物　弓形虫检测方法１　范围 GB/T １８４４８的本部分规定了实验动物弓形虫的检测方法和试剂等。本部分适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬及猴等实验动物弓形虫的检测。２　原理根据免疫学原理，采用弓形虫抗原检测被检动物血清中的弓形虫抗体。３　主要试剂和器材３．１　试剂３．１．１　ＥＬＩＳＡ抗原３．１．１．１　特异性抗原弓形虫（ＲＨ株）速殖子腹腔接种清洁级以上实验小鼠（ＫＭ、ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ等均可），３ｄ～５ｄ后，以无菌生理盐水灌洗被接种小鼠的腹腔，收集含有虫体的小鼠腹腔液，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取沉淀，ＰＢＳ洗３次。沉淀物加适量蒸馏水反复冻融５次，或用超声波处理后，１００００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清液。上清液用葡聚糖凝胶Ｇ２００进行纯化（柱内径×柱高：１．５ｃｍ×６０ｃｍ），流速为０．２ｍＬ／ｍｉｎ。每管收集２ｍＬ左右。共收集６０管以上。分别测定每个收集管中蛋白在２８０ｎｍ下的吸光度值。分离纯化后，出现２个蛋白峰；将第一峰各管合并，即为弓形虫特异性抗原（也称弓形虫可溶性抗原）。３．１．１．２　正常抗原以无菌生理盐水注射清洁级以上实验小鼠（与制备抗原的小鼠同品种或品系）腹腔，３ｄ～５ｄ后，以无菌生理盐水灌洗被注射小鼠腹腔，收集小鼠腹腔液，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取沉淀，ＰＢＳ洗３次。沉淀物加适量蒸馏水反复冻融５次，或用超声波处理后，１００００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清液，即为正常抗原。３．１．２　抗原片弓形虫ＲＨ株速殖子腹腔接种清洁级以上实验小鼠（ＫＭ、ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ等均可），３ｄ～５ｄ后处死，收取虫体，胰酶消化，以一定浓度涂片，充分晾干后冷丙酮固定，-２０℃保存。３．１．３　弓形虫抗原致敏绵羊红细胞将绵羊红细胞与一定浓度的鞣酸液反应，制成鞣化红细胞，然后，用弓形虫可溶性抗原在适宜的条件下致敏鞣化红细胞，制成弓形虫抗原致敏绵羊红细胞。３．１．４　正常对照绵羊红细胞。３．１．５　阳性对照血清自然感染弓形虫的相应动物抗体阳性血清，或弓形虫免疫血清。３．１．６　阴性对照血清确证无弓形虫感染的动物血清。３．１．７　酶结合物辣根过氧化物酶标记的抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬和猴ＩｇＧ抗体；或辣根过......

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