路径: 主页 > GB/T > 第746页 > GB/T 29375-2026 | 标准编号 | GB/T 29375-2026 (GB/T29375-2026) | | 中文名称 | 马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程 | | 英文名称 | Technical code of practice for virus-free potato in-vitro plantlets propagation | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B05 | | 国际标准分类 | 65.020.20 | | 字数估计 | 18,113 | | 发布日期 | 2026-04-30 | | 实施日期 | 2026-11-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 29375-2012 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 | GB/T 29375-2026: 马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程
GB/T 29375-2026 英文版: Technical code of practice for virus-free potato in-vitro plantlets propagation
ICS 65.020.20
CCSB05
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 29375-2012
马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程
2026-04-30发布
2026-11-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件代替GB/T 29375-2012《马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程》,与 GB/T 29375-2012相
比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下:
a) 增加了“试管苗”的定义(见3.8);
b) 删除了“定期消毒,按照40%的甲醛和高锰酸钾2∶1的比例,40%的甲醛溶液10mL倒入5g
高锰酸钾容器内(每立方米空间用量),进行熏蒸”,更改为“接种室、培养室应保持卫生,每周至
少消毒一次。可使用二氧化氯、臭氧密闭熏蒸,或紫外灯照射结合75%乙醇喷雾等方式消毒”
(见4.3.1,2012年版的4.4.1);
c) 更改了紫外灯的时间,将“20min”更改为“30min”(见4.3.3,2012年版的4.4.3);
d) 删除了若将温室作为培养室的内容(见2012年版的4.4.6);
e) 增加了“每天巡查培养苗生长状况,发现污染及时清理,并进行培养室消毒”(见4.3.6);
f) 增加了病毒和类病毒的检测方法,删除了“按照GB 18133-2000附录A和B的方法检测”(见
6.1.2,2012年版的5.1.2);
g) 删除了人工打破休眠的具体方法“用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸种5min”及催芽方法
“可采用0.1%多菌灵溶液浸泡30min或75%乙醇喷湿进行表面消毒,置于25℃黑暗条件下
催芽;或播种于含水量20%灭菌细沙中发芽(水中含5mg/L多菌灵)”(见2012年版的5.1.3.1
和5.1.3.3);
h) 更改了材料消毒的方法,将“用50g/L的漂白粉液浸泡7min~10min或0.1%的氯化汞溶液
浸泡5min~10min”更改为“用1%次氯酸钠浸泡7min~10min”(见6.2.2,2012年版的
5.2.2);
i) 更改了病毒检测前试管苗转接的长度及检测的表述,将“每株的上部1/3~1/2”更改为“取带
有1个~2个叶片”,将“植株下部1/3~1/2的茎段”更改为“对下部茎段继续培养或直接进行
病毒检测”(见7.1,2012年版的6.1和6.2);
j) 增加了病毒病的检测方法,删除了“按照GB 18133-2000附录A执行”(见7.2,2012年版的
6.3);
k) 更改了基础苗培养条件,将“温度22℃~26℃、相对湿度70%、光照强度2000lx~3000lx、
光照时数16h/d”更改为“温度20℃~26℃、相对湿度50%~70%、光照强度2000lx~
4500lx、光照时数10h/d~16h/d”(见9.3,2012年版的8.3);
l) 更改了基础苗保存条件,将“温度13℃~16℃、相对湿度70%、光照强度3000lx”更改为“温
度8℃~16℃、相对湿度50%~70%、光照强度3000lx~4500lx”(见10.2,2012年版的
9.2);
m) 更改了常规扩繁培养基量的表述,将“每瓶加入1/5容量的培养基”更改为“厚度2cm左右”
(见11.3,2012年版的10.1.3);
n) 更改了扩繁培养条件,将“白天23℃~25℃,夜间16℃ ~20℃,光照强度2000lx~
3000lx,光照时间16h/d,培养21d~25d”更改为“白天20℃~26℃,光照强度2000lx~
4500lx,光照时间14h/d~16h/d,培养18d~25d”(见11.6,2012年版的10.1.6);
o) 更改了再次切段繁殖的长度,将“待长出7~8片叶片后”更改为“待长出5个~8个叶片后”
(见11.7,2012年版的10.1.7);
p) 删除了水培扩繁和壮苗扩繁的内容(见2012年版的10.2和第11章)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国农业农村部提出。
本文件由全国蔬菜标准化技术委员会(SAC/TC467)归口。
本文件起草单位:内蒙古大学、雪川农业集团股份有限公司、四川省农业科学院作物研究所(四川省
种质资源中心)、恩施土家族苗族自治州农业科学院(硒应用技术与产品开发研究院)、宁波市农业技术
推广总站(宁波市种子管理站、宁波市植保植检中心)、定西马铃薯研究所(普通合伙)、甘肃省农业科学
院、重庆市农业技术推广总站、山东省农业科学院、内蒙古宏源农牧业科技股份有限公司、内蒙古民丰种
业有限公司、张家口市农业科学院(河北省高寒作物研究所)、安顺市农业科学院、呼伦贝尔市金满地农
业科技有限公司、内蒙古格瑞得马铃薯种业集团有限公司、黑龙江省农业科学院(黑龙江现代农业研究
院)、中国标准化研究院。
本文件主要起草人:孙清华、冯志文、韩伟、蒲媛媛、王克秀、高剑华、王旭伟、李华泽、田世龙、
欧建龙、董道峰、许向晖、朱艳慧、马恢、张鹏、齐建建、吴健、贾丰收、霍艳姣、盛万民、李进福、李冬虎、
杨丽、张若芳。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
---2012年首次发布为GB/T 29375-2012;
---本次为第一次修订。
马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程
1 范围
本文件规定了马铃薯茎尖脱毒与组织培养、脱毒试管苗扩繁的技术要求和操作规程。
本文件适用于马铃薯脱毒试管苗的培育和扩繁。
4 脱毒苗生产车间
4.1 布局
4.1.1 周围无污染源,具备隔离条件。
4.1.2 生产车间布局应遵循“环境清洁、便于操作、方便消毒”的原则。
4.1.3 入口处宜有风淋系统,具备更衣室、清洗室、配制室、灭菌室、贮存室、接种室、培养室等,各室应
隔离。
4.1.4 培养室具备充足的自然或人工光源。
4.1.5 脱毒苗生产车间布局平面示意图见图1。
图1 脱毒苗生产车间布局平面示意图
4.2 设备、试剂
4.2.1 配置室设备、器具:见附录A中A.1。
4.2.2 清洗室及灭菌室设备、器具:见A.2。
4.2.3 接种室设备、器具:见A.3。
4.2.4 培养室设备、器具:见A.4。
4.2.5 试剂:见A.5。
4.2.6 茎尖培养基:见附录B。
4.2.7 穆拉希吉-斯库格培养基(MS培养基):见附录C。
4.2.8 扩繁培养基:见附录D。
4.2.9 保存培养基:见附录E。
4.3 卫生要求
4.3.1 接种室、培养室应保持卫生,每周至少消毒一次。可使用二氧化氯消毒剂、臭氧密闭熏蒸,或紫
外灯照射结合75%乙醇喷雾等方式消毒。
4.3.2 接种前接种室应过滤通风。
4.3.3 使用超净工作台时,应提前30min打开紫外灯。接种时打开风机,关闭紫外灯,超净工作台面及
内壁用75%乙醇擦拭消毒。
4.3.4 镊子、剪刀、解剖刀、解剖针等工具使用前应灭菌,且每次接触植物材料的部位应灼烧或插入高
温灭菌器中灭菌,冷却后使用。
4.3.5 工作人员应穿消毒工作服,洗净双手,且在操作过程用75%的乙醇擦拭手和工作台面。
4.3.6 每天巡查试管苗生长状况,发现污染及时清除,并进行培养室消毒。
5 马铃薯脱毒试管苗繁育程序
马铃薯脱毒试管苗繁育程序包括9个阶段。其中,茎尖培养阶段细分为4个步骤;在第2个阶段检
测结果确认无(类)病毒的情况下,阶段3、4、5、6、7和8可省略。程序流程图如图2所示。
6 茎尖脱毒与培养
6.1 脱毒材料的选取
6.1.1 田间选择
现蕾期至开花期,选择具备原品种典型性状、生长势强的健康植株做好标记,收获期从丰产性好的
标记单株中挑选无病斑、虫蛀、机械损伤,符合品种特性的薯块作为脱毒材料。也可在苗期选取具备原
品种典型性状的健康植株中、下部短枝茎尖或腋芽作为脱毒材料。
6.1.2 病毒检测筛选
入选的薯块或植株,马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)按照GB/T 31790的鉴定方法检测、马铃薯X
病毒(PVX)按照GB/T 36833的鉴定方法检测、马铃薯Y病毒(PVY)按照GB/T 36816的鉴定方法检
测、马铃薯M病毒(PVM)按照GB/T 36846的鉴定方法检测,马铃薯卷叶病毒(PLRV)、马铃薯A病毒
(PVA)和马铃薯S病毒(PVS)采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测。筛选无PSTVd的块
茎或植株作为茎尖脱毒基础材料;若检测到无病毒薯块或植株,可直接进行扩繁。
6.1.3 催芽处理和病毒钝化
催芽处理和病毒钝化的操作如下:
a) 薯块可通过自然出芽或人为干预打破休眠催芽。
b) 对含有S病毒、X病毒的薯块,新芽长至2cm~3cm时置于(37±1)℃培养箱中钝化病毒
3周~4周。
6.2 茎尖培养
6.2.1 茎尖培养基的制备
制备茎尖培养基的操作如下:
a) 茎尖培养基配方见附录B。
b) 将制备好的茎尖培养基快速分装于容器中,并封口。
c) 将分装好的容器置于灭菌锅内,121℃高压(1.1kg/cm2)灭菌20min,冷却,放置3d~5d,无
污染的培养基备用。
6.2.2 材料消毒
取经6.1.3处理后薯块上2cm~3cm的芽,剪去外叶,流水冲洗30min,移入接种室,在超净工作
台上用75%乙醇浸泡30s,无菌水冲洗,再用1%次氯酸钠浸泡7min~10min,无菌水冲洗4次~
5次。
6.2.3 茎尖剥离与接种
借助40×双目解剖镜,剥去外叶,剥离茎尖直至露出半圆形光滑生长点,用解剖刀或解剖针切取带
1个~2个叶原基的生长点(0.1mm~0.3mm),迅速置于茎尖培养基表面,器皿口用酒精灯灭菌并封
口,注明编号、品种名称、接种时间。
6.2.4 离体培养
在温度20℃~25℃、相对湿度70%、光照强度2000lx~3000lx、光照时数16h/d的条件下离体
培养。
定期查看,待形成肉眼可见的茎叶后,转移到MS固体培养基(见附录C),培养成带4个~5个叶片
的幼苗。
7 病毒检测
7.1 将每个器皿的幼苗,在超净工作台内切取带有1个~2个叶片的上部茎段转入新的器皿中继续培
养,编号不变;根据病毒检测要求的取样量,对下部茎段继续培养或直接进行病毒检测,样品不能粘有培
养基。
7.2 检测方法采用6.1.2的方法,也可以采用灵敏度更高的检测技术,筛选出不含PVX、PVY、PVS、
PLRV、PVM、PVA病毒的脱毒苗。
7.3 记录每株脱毒苗的编号及检测结果。
8 试种观察
将部分脱毒苗移栽到防虫温网室,结出的薯块种植到田间试种观察,符合原品种典型性状的脱毒苗
即为核心苗。
9 基础苗培养
9.1 对核心苗切段扩繁。将培养器皿置于超净工作台上,器皿口用75%乙醇擦拭消毒,用镊子取出核
心苗,按单茎节切段,每个切段至少带1个叶片。
9.2 将剪下切段的腋芽朝上插入 MS培养基(见附录C)或其他脱毒苗扩繁培养基上(见附录D),器皿
口用酒精灯灭菌并封口,注明编号、品种名称、接种时间等。
9.3 培养条件:温度20℃~26℃、相对湿度50%~70%、光照强度2000lx~4500lx、光照时数
10h/d~16h/d。
10 基础苗保存
10.1 选择保存培养基(配方参见附录E)保存基础苗。
10.2 将基础苗置于温度8℃~16℃、相对湿度50%~70%、光照强度3000lx~4500lx、光照时数
10h/d~14h/d的条件下使其缓慢生长,继代培养出一定数量的脱毒苗保存。
11 扩繁
11.1 扩繁前检测基础苗是否带病毒(PVX、PVY、PVS、PLRV、PVM、PVA......
|