标准搜索结果: 'GB/T 40980-2021'
标准编号 | GB/T 40980-2021 (GB/T40980-2021) | 中文名称 | 生化制品中还原糖的测定 柱前衍生高效液相色谱法 | 英文名称 | Determination of reducing sugar in biochemical products -- High-performance liquid chromatography with pre-column derivatization | 行业 | 国家标准 (推荐) | 中标分类 | A40 | 国际标准分类 | 07.080 | 字数估计 | 8,868 | 发布日期 | 2021-11-26 | 实施日期 | 2022-06-01 | 起草单位 | 中国测试技术研究院生物研究所、深圳市分析测试协会、甘肃中商食品质量检验检测有限公司、西华大学、电子科技大学、青岛科技大学、中国测试技术研究院 | 归口单位 | 全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387) | 标准依据 | 国家标准公告2021年第14号 | 提出机构 | 全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387) | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 |
GB/T 40980-2021
生化制品中还原糖的测定 柱前衍生高效液相色谱法
Determination of reducing sugar in biochemical products -- High-performance liquid chromatography with pre-column derivatization
1 范围
本文件规定了采用柱前衍生高效液相色谱法测定生化制品中D-甘露糖、D-核糖、L-鼠李糖、D-半乳
糖、L-阿拉伯醛糖、D-木糖、L-岩藻糖、D-葡萄糖、D-麦芽糖、D-乳糖10种还原糖的测定方法。
本文件适用于含糖胃蛋白酶、静脉注射用人免疫球蛋白、狂犬病人免疫球蛋白、改良Y培养基、葡
萄糖肉汤培养基、缓冲动力-硝酸盐、木糖-明胶培养基等生化制品中的甘露糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖含量测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
样品中的还原糖经沸水提取,提取液与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)在碱性条件下反应,生成
糖衍生物,经液相色谱分离紫外检测器测定,色谱保留时间定性、外标法定量。
5 试剂或材料
除特殊说明外,本方法所用试剂除流动相为色谱纯外均为分析纯,试验用水均为GB/T 6682规定
的一级水。
5.1 磷酸二氢钾(KH2PO4)。
5.2 氢氧化钠(NaOH)。
5.3 亚铁氰化钾 [K4Fe(CN)6·3H2O]。
5.4 乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]。
5.5 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(C10H10N2O,PMP)。
5.6 盐酸(HCl)。
5.7 三氯甲烷(CHCl3)。
5.8 甲醇(CH3OH)。
5.9 乙腈(CH3CN):色谱纯。
5.10 三乙胺(C6H15N)。
5.11 正己烷(C6H6)。
5.12 亚铁氰化钾溶液(106g/L):称取106.0g亚铁氰化钾,用水溶解并稀释至1000mL。
5.13 乙酸锌溶液(220g/L):称取220.0g乙酸锌,用水稀释至1000mL。
5.14 0.5mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生溶液:称取87.1gPMP衍生化试剂,加甲醇溶
6 仪器设备
6.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器(UV)或二极管阵列检测器(DAD)。
6.2 分析天平:感量0.01mg和0.0001g。
6.3 超声波提取器:功率250W,工作频率40kHz。
6.4 离心机:最大转速15000r/min。
6.5 酸度计:精度为0.01个pH单位,pH值测定范围为0~14。
6.6 数显恒温水浴锅:精确度到0.1℃。
6.7 涡旋混匀器。
6.8 电动粉碎机。
7 分析步骤
7.1 样品制备
取有代表性的样品至少50g,固体样品(液体样品混匀直接待用)用电动粉碎机粉碎(过孔径为
0.3mm 的筛),混匀后装入洁净的盛样容器内,作为试样,室温密封储存。
7.2 样品前处理
7.2.1 固体样品前处理
称取样品5g(精确到0.001g)于50mL离心管中,加入20mL水,在沸水浴中提取30min,超声提
取10min;样液泠却后,加入正己烷5mL,涡旋2min,于5000r/min离心5min,弃去正己烷层,将水
层清液倒入50mL容量瓶中;向固体残渣中加入10mL水,涡旋2min,于5000r/min离心3min,水
层合并于上述50mL容量瓶中,加入5mL亚铁氰化钾溶液,5mL乙酸锌溶液,用水定容,混匀,离心取
上清液,经0.45m滤膜过滤后待用。
7.2.2 含油脂及蛋白类液体样品前处理
称取样品5g(精确到0.001g)于50mL离心管中,加入20mL水,在沸水浴中提取15min,超声提
取10min,样液冷却后,加入3mL亚铁氰化钾溶液,3mL乙酸锌溶液,用水定容至40mL,充分振摇离
心管,于5000r/min离心5min;取部分澄清水层,加入正己烷5mL,振摇或涡旋2min,于5000r/min
离心5min。取水层清液,经0.45μm滤膜过滤后待用。
7.2.3 不含油脂及蛋白类液体样品前处理
称取样品5g(精确到0.001g)于50mL离心管中,加水至40mL,在沸水浴中提取15min,超声提
取10min,样液泠却后,转移至50mL容量瓶中定容,取水层清液经0.45μm滤膜过滤后待用。
7.3 试样衍生
分别吸取试样和不同浓度的标准工作溶液0.4mL于15mL具塞试管中,加入1.0mol/LNaOH
溶液0.2mL,0.5mol/LPMP衍生溶液1.0mL,在70℃恒温水浴中反应60min;冷却至室温,加入
1.0mol/LHCl溶液0.2mL,摇匀后,氮气吹干;加入2mL蒸馏水复溶,再加入2mL三氯甲烷,充分涡
旋后静置或离心,弃去下层有机层,重复此操作三次,取上层水相过0.45μm滤膜后进入液相色谱分析。
7.4 仪器色谱参考条件
仪器色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:C18色谱柱,250mm×4.6mm,3.0μm,或同等性能的色谱柱;
b) 流动相:A相为含20mmol/LKH2PO4(三乙胺调节pH值至7.8±0.1)水溶液,B相为......
|