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[PDF] HJ 1216-2021 - 英文版

标准号码	内文	价格美元	第2步(购买)	交付天数	标准名称	状态
HJ 1216-2021	英文版	379	HJ 1216-2021	[PDF]天数 >=4	水质浮游植物的测定 0.1 ml计数框-显微镜计数法	有效

基本信息
标准编号	HJ 1216-2021 (HJ1216-2021)
中文名称
英文名称	Water quality - Determination of phytoplankton - 0.1 ml chamber - Microscope counting method
行业	环保行业标准
字数估计	16,189
发布机构	生态环境部

HJ 1216-2021: 水质浮游植物的测定 0.1 ml计数框-显微镜计数法 HJ 1216-2021 英文名称: Water quality - Determination of phytoplankton - 0.1 ml chamber - Microscope counting method 中华人民共和国国家生态环境标准水质浮游植物的测定 0.1 ml计数框- 显微镜计数法本电子版为正式标准文本，由生态环境部环境标准研究所审校排版。 2021-11-29 发布 2022-06-01 实施生态环境部发布 1 适用范围本标准规定了测定水中浮游植物的 0.1 ml 计数框-显微镜计数法。本标准适用于地表水中浮游植物的密度测定。样品浓缩 50 倍时，对角线方式计数方法检出限为 9.2×103 cells/L；行格方式计数方法检出限为 3.0×103 cells/L；全片方式计数方法检出限为 9.2×102 cells/L；随机视野方式计数的方法检出限与观察的视野数、显微镜视野面积有关，按附录 A 计算。 2 规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 GB/T 14581 水质湖泊和水库采样技术指导 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ 494 水质采样技术指导 3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。 4 方法原理在显微镜下，利用 0.1 ml 计数框对样品中的浮游植物进行人工分类和计数，计算单位体积样品中各种类浮游植物的细胞数量。 5 试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。 5.1 碘（I2）。 5.2 碘化钾（KI）。 5.3 甲醛溶液：w(HCHO)＝37%～40%。 5.4 丙三醇（HOCH2CHOHCH2OH）。 5.5 鲁哥氏碘液：称取 60 g 碘化钾（5.2），溶于 100 ml 水中，再加入 40 g 碘（5.1），充分搅拌使其完全溶解，加水定容至 1000 ml，转移至棕色磨口玻璃瓶，室温避光保存。 6 仪器和设备 6.1 25 号浮游生物网：网孔直径为 0.064 mm，网呈圆锥形，网口套在铜环上，网底端有出水开关活塞。 6.2 定性采样瓶：30 ml～100 ml 广口聚乙烯瓶。 6.3 采水器：不锈钢或有机玻璃材质，圆柱形。容量和深度规格要满足采样要求。 6.4 定量采样瓶：1 L～2 L 广口聚乙烯瓶。 6.5 正置或倒置生物显微镜：物镜 4×、10×、20×、40×，目镜 10×或 15×。 6.6 浓缩装置：1 L～2 L 筒形分液漏斗或量筒。 6.7 样品瓶：50 ml 具塞棕色玻璃广口瓶。 6.8 超声波发生装置：工作频率 40 kHz，水浴方式。 6.9 微量移液器：100 μl。 6.10 0.1 ml 浮游植物计数框：面积 20 mm×20 mm，框内划分横竖各 10 行格，共 100 个小方格。 6.11 盖玻片：面积 22 mm×22 mm，厚度小于 0.2 mm。 6.12 载物台测微计：又称镜台测微计，1 mm/100 DIV，分划值为 0.01 mm。注：DIV 指等分格，1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。 6.13 目镜分划板：又称目镜测微尺，5 mm/50 DIV，分划值为 0.1 mm。 6.14 计数器。 6.15 一般实验室常用仪器和设备。 7 样品 7.1 样品的采集 7.1.1 定性样品点位布设及采样频次按照 GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 的相关规定执行。也可根据调查研究目的确定。使用 25 号浮游生物网（6.1）采集定性样品。关闭浮游生物网底端出水活塞开关，在水面表层至 0.5 m 深处以 20 cm/s～30 cm/s 的速度做“∞”形往复，缓慢拖动约 1 min～3 min，待网中明显有浮游植物进入，将浮游生物网（6.1）提出水面，网内水自然通过网孔滤出，待底部还剩少许水样（5 ml～10 ml）时，将底端出口移入定性采样瓶（6.2）中，打开底端活塞开关收集定性样品。采集分层样品时，用 25 号浮游生物网（6.1）过滤特定水层样品，其他步骤同采集表层样品。定性样品采集完成后及时将浮游生物网清洗干净。样品采集后冷藏避光运输。如有定性样品采集的技术规范，按技术规范有关要求执行。 7.1.2 定量样品按照 GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 的相关规定进行定量样品的采集。用采水器（6.3）采集样品至定量采样瓶（6.4）中，一般采集不少于 500 ml 样品。若水体透明度较高，浮游植物数量较少时，应酌情增加采样体积。定量样品采集后，样品瓶不应装满，以便摇匀。注 1：有些浮游植物（如蓝藻）常浮于水面或成片、条带分布，可在此水华密集区域采样作为峰值参考。注 2：定量样品采集应在定性样品采集之前。应保持固定时间段采样，以便结果之间可相互比较。 7.2 样品的保存 7.2.1 定性样品定性样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.5），用量为水样体积的 1.0%～1.5%。镜检活体样品不加鲁哥氏碘液固定。定性样品在室温避光条件下可保存 3 周；1 ℃～5 ℃冷藏避光条件下可保存 12 个月。活体样品在 4 ℃～10 ℃避光条件下可保存 36 h。 7.2.2 定量样品定量样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.5）固定，用量为水样体积的 1.0%～1.5%。也可将鲁哥氏碘液（5.5）提前加入定量采样瓶（6.4）中带至现场使用。定量样品在室温避光条件下可保存 3 周；1 ℃～ 5 ℃冷藏避光条件下可保存 12 个月。样品在保存过程中，应每周检查鲁哥氏碘液（5.5）的氧化程度，若样品颜色变浅，应向样品中补加适量的鲁哥氏碘液（5.5），直到样品的颜色恢复为黄褐色。注：若样品需长期保存，应加入甲醛溶液（5.3），用量为水样体积的 4%。 8 分析步骤 8.1 混匀样品每次取样前，采用上下颠倒至少 30 次的方式充分混匀所采样品，混匀动作要轻。 8.2 定性样品的分析在显微镜（6.5）下观察定性样品（7.1.1），鉴定浮游植物的种类。优势种类鉴定到种，其他种类至少鉴定到属。部分物种鉴定参考资料见参考文献。注：种类鉴定除用定性样品观察外，还可吸取已完成计数的定量样品进行观察。 8.3 定量样品的分析 8.3.1 试样制备 8.3.1.1 预检将样品放至室温，用微量移液器（6.9）取 0.1 ml 混匀样品，注入 0.1 ml 浮游植物计数框（6.10）中，用盖玻片（6.11）将计数框（6.10）完全盖住，静置片刻，无气泡可观察样品，如有气泡应重新取样。随机选取若干计数小格或视野，初步估计浮游植物的数量。对于含有细胞聚集成团的浮游植物样品，当不满足以下两个条件中的任何一个时，应进行超声波分散处理： a）群体中的浮游植物细胞个体较易被辨识，能够对群体中的细胞进行计数； b）当群体中所含细胞数量与群体体积或长度有固定比例时，如空星藻、盘星藻、丝状藻等，可以将群体作为计数对象，依据比例得到浮游植物细胞数量。 8.3.1.2 调整浮游植物密度适宜测定的浮游植物密度为 107 cells/L～108 cells/L。若定量样品（7.1.2）中的浮游植物细胞密度低于 107 cells/L，应浓缩样品；若定量样品（7.1.2）中的浮游植物细胞密度高于 108 cells/L，应稀释样品。最终使加入计数框中的 0.1 ml 样品约含有 500 个～10000 个浮游植物细胞。样品浓缩：将全部定量样品摇匀倒入浓缩装置（6.6）中，避免阳光直射的环境下，静置 48 h。用细小虹吸管吸取上清液置于烧杯中，直至浮游植物沉淀物体积约 20 ml。旋开浓缩装置（6.6）底部活塞，将浮游植物沉淀物放入 100 ml 量筒中。用少许上清液冲洗浓缩装置（6.6）1～3 次，将冲洗水一并放入量筒中，再用上清液定容至所需浓缩倍数的体积。为了减少浮游植物吸附在浓缩装置壁上，在静置初期，应适时轻敲浓缩装置器壁。虹吸过程中，吸液口与浮游植物沉淀物间距离应大于 3 cm。如水样中浮游植物密度极低，采样量 1 L 及以上时，可多次浓缩，即每次浓缩后再静置 24 h～48 h，重复浓缩操作，调整至所需浓缩倍数体积。浓缩后的样品可根据需要，经超声处理后计数。样品稀释：根据稀释倍数，选取相应体积的容量瓶，量取不少于 25 ml 混匀后的定量样品或经超声分散处理后的样品，用水定容至刻线。如要保存稀释后的样品，应注意补充鲁哥氏碘液（5.5），使稀释后的样品中的鲁哥氏碘液浓度与稀释前一致。注：超声波分散处理具体步骤为取混匀的定量样品于样品瓶（6.7）中，用超声波发生装置（6.8）处理约 10 min 后，在显微镜（6.5）下观察，如仍存在大量未分散的细胞团，则应延长超声波处理时间，直至能够准确计数。超声波分散处理过程中应注意水温，防止过热造成水分蒸发和浮游植物细胞结构被破坏。 8.3.2 显微镜计数 8.3.2.1 装片同 8.3.1.1 步骤进行装片。可根据需要，用滴管吸取少许丙三醇（5.4）均匀涂抹盖玻片四周，以防止计数框水分蒸发形成气泡。涂抹时应避免渗入计数框。 8.3.2.2 选取计数方式根据调整后样品（8.3.1.2）中浮游植物的密度，选用一种适当的计数方式，使测定过程中浮游植物细胞的总计数量为 500 个～1500 个。表 1 为推荐选用的计数方式。 8.3.2.3.1 全片计数方式在 40×物镜下，逐一观察浮游植物计数框中全部 100 个小方格，分类计数每个小方格内所有浮游植物细胞，并记录每行的分类计数结果。若浮游植物细胞体积较大时，可降低物镜倍数。 8.3.2.3.2 行格计数方式在 40×物镜下，逐一观察浮游植物计数框中第 2、5、8 行，共 30 个小方格，分类计数每个小方格内所有浮游植物细胞，并记录每个小格的分类计数结果。若浮游植物细胞体积较大时，可降低物镜倍数。 8.3.2.3.3 对角线计数方式在 40×物镜下，逐一观察位于浮游植物计数框对角线位置上的 10 个小方格，分类计数每个小方格内所有浮游植物细胞，并记录每个小格的分类计数结果。若浮游植物细胞体积较大时，可降低物镜倍数。 8.3.2.3.4 随机视野方式在 40×物镜下，随机抽取一定数量的视野，分类计数每个视野内所有浮游植物细胞，并记录每个视野的分类计数结果。若浮游植物细胞体积较大时，可降低物镜倍数。计数前应测量或计算显微镜视野面积，测量和计算方法参见附录 B。 8.3.2.3.5 计数要求每一样品装片计数两次。两次浮游植物细胞总计数量结果相对偏差应在±15%以内，否则应增加计数一次，直至某两次计数结果符合这一要求为止。测定结果为相对偏差在±15%以内......

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