路径: 主页 > MISC > 第244页 > LY/T 2347-2014 | 标准编号 | LY/T 2347-2014 (LY/T2347-2014) | | 中文名称 | 刚竹属DNA扩散片段长度多态性（AFLP)分析方法 | | 英文名称 | Method of DNA amplification fragment length polymorphism (AFLP) for Phyllostachys bamboo | | 行业 | 林业行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B65 | | 国际标准分类 | 65.020.20 | | 字数估计 | 10,187 | | 实施日期 | 12/1/2014 | | 标准依据 | 国家林业局公告2014年第12号;行业标准备案公告2015年第3号(总第183号) | | 发布机构 | 国家林业局 | | 范围 | 本标准规定了刚竹属(Phyllostachys)竹种的DNA提取、酶切、连接、扩增实验步骤及采用的仪器设备。本标准适用于刚竹属竹种DNA多态性的分析。 | LY/T 2347-2014
Method of DNA amplification fragment length polymorphism (AFLP) for Phyllostachys bamboo
ICS 65.020.20
B65
中华人民共和国林业行业标准
刚竹属DNA扩增片段长度多态性(AFLP)
分析方法
2014-08-21发布
2014-12-01实施
国 家 林 业 局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准的附录为规范性附录。
本标准由全国竹藤标准化技术委员会(SAC/TC263)提出并归口。
本标准起草单位:国际竹藤中心、北京林业大学、中国林业科学研究院亚热带林业研究所。
本标准主要起草人:李雪平、高志民、牟少华、陈敏、袁金玲。
刚竹属DNA扩增片段长度多态性(AFLP)
分析方法
1 范围
本标准规定了刚竹属(Phyllostachys)竹种的DNA提取、酶切、连接、扩增实验步骤及采用的仪器
设备。
本标准适用于刚竹属竹种DNA多态性的分析。
2 试剂
2.1 所用化学试剂如没有特殊说明,均为分析纯。
2.2 DNA提取液:1mol/LTris-HClpH8.2、细胞裂解液(1mol/LTris-HClpH7.5,0.25mol/LED-
TApH8.0,5mol/L氯化钠,2%CTAB)与5%SLS按5∶5∶2混合,在使用前加入亚硫酸钠至终浓
度为0.02mol/L。
2.3 三氯甲烷∶异戊醇=24∶1。
2.4 异丙醇。
2.5 70%乙醇:70mL无水乙醇加蒸馏水定容到100mL。
2.6 5mol/L氯化钠:称取29.22g氯化钠,用蒸馏水溶解后定容到100mL。
2.7 0.5mg/mL溴化乙锭:称取5mg溴化乙锭,用蒸馏水溶解后定容到10mL。
2.8 变性缓冲液:去离子甲酰胺50mL,EDTA(0.5mol/L,pH=8.0)1mL,二甲苯青FF0.125g,溴酚
蓝0.125g。
2.9 10×TBE:Tris108.0g,硼酸55.0g,0.5mol/LEDTA(pH8.0)40mL,定容到1000mL。
2.10 40%丙烯酰胺溶液:2.0g甲叉双丙烯酰胺,38.0g丙烯酰胺混合加水定容到100mL。
2.11 10%过硫酸胺溶液:1.0g过硫酸胺加水定容到10mL。
3 仪器
3.1 PCR仪(具有touchdown功能,温度精度±0.2℃)。
3.2 移液器。
3.3 4℃低温离心机(max14000r/min以上)。
3.4 水浴锅。
3.5 电泳仪(可满足DNA测序)。
3.6 紫外分光......
|