路径: 主页 > NY/T > 第37页 > NY/T 2006-2011 | 标准编号 | NY/T 2006-2011 (NY/T2006-2011) | | 中文名称 | 谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定 | | 英文名称 | Determination of β-glucan in cereal and its products | | 行业 | 农业行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B22 | | 国际标准分类 | 67.060 | | 字数估计 | 9,913 | | 发布日期 | 2011-09-01 | | 实施日期 | 2011-12-01 | | 引用标准 | GB 5009.3; GB/T 5491; GB/T 6682 | | 采用标准 | AOAC Official Method 995.16, MOD | | 标准依据 | 农业部公告第1642号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部 | | 范围 | 本标准规定了谷物及其制品中β-葡聚糖含量的酶-比色测定方法。本标准适用于燕麦、大麦、青裸、黑麦等谷物及其加工制品(面粉、教皮、麦片、饮料等)中β-葡聚糖含量的测定。 | NY/T 2006-2011: 谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定
ICS 67.060
B 22
中华人民共和国农业行业标准
NY／T 2006-2011
谷物及其制品中 β-葡聚糖含量的测定
2011-09-01 发布
2011-12-01 实施
中华人民共和国农业部 发布
NY／T 2006-2011
前言
本标准按照 GB ／T 1.1-2009 给出的规则起草。
本标准修改采用 AOAC Official Method 995.16-《大麦和燕麦中的 β – D -葡聚糖-改进酶法》（英
文版）。
本标准修改采用时主要技术内容修改如下：
--增加了规范性引用文件；
--扩大了标准的应用范围，增加了谷物种类以及谷物饮料等加工制品。
本标准由中华人民共和国农业部农产品加工局提出并归口。
本标准起草单位：中国农业科学院农产品加工研究所、中国农业大学、北京特品降脂燕麦开发公司、
郑州轻工业学院。
本标准主要起草人：王强、周素梅、吴广枫、吕耀昌、申瑞玲、刘红芝、林伟静、路长喜。
NY／T 2006-2011
谷物及其制品中 β-葡聚糖含量的测定
1 范围
本标准规定了谷物及其制品中 β -葡聚糖含量的酶一比色测定方法。
本标准适用于燕麦、大麦、青稞、黑麦等谷物及其加工制品（面粉、麸皮、麦片、饮料等）中 β -葡聚糖
含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 5009.3 食品安全国家标准 食品中水分的测定
GB ／T 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法
GB ／T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
该法利用地衣聚糖酶（或称葡聚糖酶）和 β -葡萄糖苷酶对样品中(1→3)(1→4)- β -D-葡聚糖（混联
β -D-葡聚糖，或简称 β -葡聚糖)的酶解作用，由地衣聚糖酶专一性地水解 β -葡聚糖成寡糖，β -葡萄糖
苷酶则将寡糖水解成葡萄糖；葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧
化物酶作用下，与 4-氨基安替比林氧化缩合生成红色醌类化合物。此化合物在 510 nm 有吸收，其吸光
度值与葡萄糖含量成正比。
4 试剂
除非另有说明，在分析中仅使用经确认的分析纯试剂，实验用水应符合 GB ／T 6682 中三级水的要
求。
4.1 50 U／mL 地衣聚糖酶溶液
将 1 mL 地衣聚糖酶溶液(1 000 U／mL)用磷酸钠缓冲液 (20 mmol／L、pH6.5) 稀释至 20.0 mL，把
酶液等分成 4 份，每份 5 mL，置于聚丙烯塑料瓶中,在-20℃下冷冻保存，备用。【注：地衣聚糖酶活力
单位定义为：在 pH6.5、40℃条件下，每分钟从大麦 β -葡聚糖(10 mg／mL)中释放出相当于 1µmol／L
葡萄糖还原糖当量所需的酶量，即为 1U。】
4.2 2 U／mL β -葡萄糖苷酶溶液
将 1 mLβ -葡萄糖苷酶溶液(40 U／mL)用乙酸钠缓冲液(50 mmol／L、pH4.0)稀释至 20 mL，把酶液
等分成 4 份，每份 5 mL，置于聚丙烯塑料瓶中,在-20℃下冷冻保存,备用。【注：β -葡萄糖苷酶活力单
位定义为：在 pH4.0、40℃条件下，每分钟从对硝基苯基 -β -葡萄糖苷(10 mmol) 中释放出相当于
1 µmol／L 对-硝基苯酚所需的酶量，即为 1U。】
4.3 葡萄糖氧化酶一过氧化物酶一缓冲液混合物
内含葡萄糖氧化酶( >12 000 U／L)、过氧化物酶( >650 U／L)、4-氨基安替比林 (0.4 mmol／L)。
注：葡萄糖氧化酶活力单位定义为：在 pH5.1、35℃条件下,每分钟氧化 1 mmol 葡萄糖所需的酶量，即为 1U;过氧化
物酶活力单位定义为：在 pH6.0、20℃条件下，20 s 内使焦性没食子酸生成 1.0 mg 红梧酚所需的酶量，即为 1U。
缓冲液的配制：称取 13.6 g KH2 PO4、4.2 g NaOH 和 3.0g 4-羟基苯甲酸，溶于水中，调节 pH7.4，
定容至 100 mL。
NY／T 2006-2011
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-缓冲液混合物的配制：取 50 mL 缓冲液稀释至 1000 mL；用该稀释
缓冲液溶解葡萄糖氧化酶-过氧化物酶混合试剂，使之达到所需浓度。该混合试剂在 4℃下可稳定存
放 2 个～3 个月，-20aC 下可稳定存放 2 年～3 年，与葡萄糖反应所形成的颜色可稳定数小时。
4.4 50%乙醇溶液
4.5 20 mmol／L、pH6.5 磷酸钠缓冲液
称取 3.12 g NaH2 PO4·2H2O，加 900 mL 水溶解；调节 pH6.5，定容至 1000 mL。该缓冲液在 4℃
下可存放一个月。
4.6 乙酸钠缓冲液
4.6.1 200 mmol／L、pH4.0 乙酸钠缓冲液：取 7.6 mL 冰醋酸于 900 mL 水中，加入 4.8 g 三水乙酸钠，
溶解；调节 pH4.0，定容至 1000 mL。
4.6.2 50 mmol／L、pH 4.0 乙酸钠缓冲液：取 250 mL 200 mmol／L、pH 4.0 乙酸钠缓冲液稀释至
1000 mL。
4.7 1.000 mg／mL 葡萄糖标准贮存溶液
将葡萄糖粉末（纯度大于 99%）于 100℃下常压干燥 2 h；置于干燥器中冷却,室温下密闭保存。准
确称取 0.100 0 g 干燥葡萄糖，用 50 mmol／L、pH 4.0 乙酸钠缓冲液 (4.6.2) 溶解并定容至 100 mL。该
标准溶液在 4℃下可存放一个月。
注：其中 4.1、4.2.4.3 涉及酶制剂均可由 Megazyme 混联 β - D-葡聚糖测定试剂盒提供。Megazyme 是爱尔兰
Megazyme 公司产品的商品名，给出这一信息是为了方便本标准的使用者。如果还有其他产品具有相同的效果，
则可使用这些等效产品。
5 仪器和设备
5.1 旋风磨或粉碎机：样品粉碎后可过 0.5 mm 或 35 目筛网。
5.2 离心机：能容纳 15 mm×l00 mm 或 10 mm× 75 mm 的玻璃试管，离心力 1 000×g。
5.3 水浴锅：温度稳定性±0.2℃。
5.4 旋涡混合仪。
5.5 pH 计：精度 0.01。
5.6 分析天平：感量 0.000 1g。
5.7 干燥箱：可保持 105℃±1℃。
5.8 分光光度计：检测波长 510 nm。
5.9 比色皿。
5.10 移液器：量程 10 µL～l00 µL、20 µL～200 µL、1 000 µL～5 000 µL，配备一次性吸头。
5.11 容量瓶：容积 100 mL、1000 mL。
5.12 具塞玻璃试管：容积 15 mL～20 mL，可于 1 000×g 下离心。
5.13 试管架：30 孔或 40 孔，能放置 15 mL～20 mI，具塞玻璃试管。
5.14 计时器（秒表）。
6 试样制备
6.1 待测样品
按照 GB ／T 5491 的规定取样。
粉末状样品：取 50 g 以上，充分混匀后于广口瓶中密闭保存。
颗粒或片状样品：取 50 g 以上，使用粉碎机(5.1)粉碎，混匀后于广口瓶中密闭保存。
NY／T 2006-2011
液体样品：取 200 mL 以上，混匀后于试剂瓶中密闭保存。
固体样品中水分含量或液体样品中干物质含量的测定可参照 GB 5009.3 规定的方法执行。
6.2 葡萄糖标准工作液
平行移取 100 µL 葡萄糖标准贮存溶液(4.7)至 3 支试管中，分别添加 100 µL 50 mmol／L 乙酸钠缓
冲液(4.6.2)。
6.3 试剂空白
移取 200 µL 50 mmol／L 乙酸钠缓冲液(4.6.2)至试管中。
7 分析步骤
在样品测定时，需同时进行葡萄糖标准工作液（3 个平行）的测定，分光光度计用试剂空白调零。
必要时可添加一个已知 β -葡聚糖含量的对照样品以检验结果的准确性。
7.1 样品称取
7.1.1 无糖固体样品
精确称取待测样品 0.080 0 g～0.100 0 g，放入玻璃试管底部。
7.1.2 高含糖固体样品
精确称取适量样品至试管中，加入 10 mL 50%乙醇溶液 (4.4)，80℃预提取 10 min；离心 (1 000×g、
10 min)，弃去上清液；将沉淀重复醇洗一次、离心 (1 000×g、10 min)，保留沉淀，备用。
7.1.3 液体样品
移取待测样品 1 mL ～5 mL(精确至 0.01 mL)，置于玻璃试管（已知重量）底部；添加 3 倍体积 95%
(v／v)乙醇溶液，于旋涡混合仪上剧烈振荡混合，室温下放置 5 min;离心(1 000×g、10 min)，弃去上清
液；添加 10 mL 50%乙醇溶液(4.4) 将沉淀再次分散；离心 (1 000×g、10 min)，弃去上清液，保留沉淀，
备用。
注：此步骤需称取含沉淀试管质量，减去试管质量和待测样品干物质质量，可得样品吸水量，记入样品反应总体积。
7.2 酶解前处理
7.2.1 向待测样品试管中添加 0.2 mL 50%乙醇溶液 (4.4)，于旋涡混合仪上振荡分散；加入 4.0 mL
磷酸钠缓冲液(4.5)，充分振荡。
7.2.2 将试管放入沸水浴中，保持 1 min;取出试管,在旋涡混合仪上剧烈振荡数秒；沸水浴中继续保持
2 min，振荡处理同前。
7.3 酶解反应
7.3.1 试管在 50℃水浴中保温 5 min，添加 0.2 mL 地衣聚糖酶溶液(4.1)，剧烈振荡数秒；加盖试管
塞，50℃水浴继续保温 60 min；其间将试管取出，振荡处理 3 次～4 次。
7.3.2 取出试管，向其中添加 5 mL 200 mmol／L 乙酸钠缓冲液(4.6.1)，混合均匀，室温下冷却 5 min～
10 min；离心(1000×g、10 min)，取上清液，备用。
7.3.3 分别准确移取 0.1 mL 上清液至 3 支试管的底部，向其中 2 支试管中分别添加 0.1 mL (β -葡萄糖
苷酶溶液 (4.2)；另一支试管中添加 0.1 mL 50 mmol／L 乙酸钠缓冲液 (4.6.2)，作为反应空白，将上述
试管在 50℃下保温 10 min。
7.4 显色反应
分别移取 3.0 mL 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-缓冲液混合物 (4.3) 至各试管（包括 2 个测试样、1
个反应空白、3 个 D-葡萄糖标准工作溶液、1 个试剂空白），50℃下反应 20 min；取出试管,冷却至室温。
7.5 比色
以试剂空白调零，于 510 nrn 处测定吸光值。
如果试样中 β -葡聚糖的浓度大于 10%，将产生比 100 µg 葡萄糖标准工作溶液高的吸光度。此时，
NY／T 2006-2011
需在步骤 7.3.2 之后，取适量 50 mmol／L 乙酸缓冲液(4.6.2)稀释上清液，然后继续 7.3.3 以下步骤，
结果计算时应把稀释因子考虑在内。
8 结果计算
8.1 固体样品
样品湿基中 β -葡聚糖的质量百分含量（%，w／w），按式(1)计算：
100- % = A F
β Δ × × × × ×-6葡聚糖含量（，湿基） 94 10 0.9(1)
式中：
△A--样品吸光值与反应空白吸光值的差值；
F--吸光值转化为 µg 葡萄糖的转换因子，F=100 µg 葡萄糖／100 µg 葡萄糖的吸光值；
94--体积校正因子（从 9.4 mL 取 0.1 mL 用于分析）；
W--固体样品质量，单位为克(g)；
0.9--葡萄糖转化为 β -葡聚糖的脱水转换因子。
......
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