路径: 主页 > NY/T > 第8页 > NY/T 939-2016 | 标准编号 | NY/T 939-2016 (NY/T939-2016) | | 中文名称 | 巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定 | | 英文名称 | Identification of Reconstituted Milk in Pasteurized and UHT Milk | | 行业 | 农业行业标准 (推荐) | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 12,168 | | 发布日期 | 2016-03-23 | | 实施日期 | 2016-04-01 | | 旧标准 (被替代) | NY/T 939-2005 | | 引用标准 | GB 5009.5; GB/T 6682; GB/T 10111 | | 标准依据 | 农业部公告第2377号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部 | | 范围 | 本标准规定了巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定方法。本标准适用于巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳。 | NY/T 939-2016: 巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定
NY/T 939-2016 英文名称: Identification of reconstituted milk in pasteurized and UHT milk
中华人民共和国农业行业标准
NY IT 939-2016
代替 NY/T 939 -2005
巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定
中华人民共和国农业部发布
1 范围
本标准规定了巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定方法。本标准适用于巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 5009.5 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 10111随机数的产生及其在产品质量抽样检验中的应用程序
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
4 试验方法
4.1 糠氨酸含量的测定
4.1.1 原理
试样经盐酸水解后测定蛋白质含量，水解液经稀释后用高效液相色谱(HPLC)或超高效液相色谱(UPLC)在紫外(波长280nm)检测器下进行分析，外标法定量。
4.1.2 试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的实验室一级水。
4.1.2.1 甲醇(CH₃OH):色谱纯。
4.1.2.2 浓盐酸(HCl,密度为1.19g/mL)。
4.1.2.3 三氟乙酸：色谱纯。
4.1.2.4 乙酸铵。
4.1.2.5 糠氨酸：C₂H₁N₂O₄·xHCl。
4.1.2.6 盐酸溶液(3 mol/L):在7.5mL水中加入2.5mL浓盐酸，混匀。
4.1.2.7 盐酸溶液(10.6 mol/L):在12mL水中加入88mL浓盐酸，混匀。
4.1.2.8乙酸铵溶液(6g/L):准确称量6g乙酸铵溶于水中，定容至1L,过0.22μm水相滤膜，超声脱气10 min。
4.1.2.9 乙酸铵(6g/L)含0.1%三氟乙酸溶液：准确称量6g乙酸铵溶于部分水中，加入1mL三氟乙酸，定容至1L,过0.22μm水相滤膜，超声脱气10 min。
4.1.2.10 糠氨酸标准储备溶液(500.0 mg/L):将糠氨酸标准品按标准品证书提供的肽纯度系数(NetPeptide Content)换算后，用3mol/L盐酸溶液配制成标准储备溶液。-20℃条件下可储存24个月。
示例：
糠氨酸标准品证书上标注肽纯度系数为69.1%,则称取7.24mg糠氨酸标准品，用3mol/L盐酸溶液溶解并定容至10mL,标准储备溶液的浓度为500.0mg/L。
4.1.2.11 糠氨酸标准工作溶液(2.0mg/L):移取100μL糠氨酸标准储备溶液于25mL容量瓶，以3 mol/L盐酸溶液定容。此标准工作溶液浓度即为2.0mg/L。
4.1.2.12水相滤膜：0.22μm。
4.1.3 仪器
4.1.3.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
4.1.3.2 超高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
4.1.3.3 干燥箱：(110±2)℃。
4.1.3.4 密封耐热试管：容积为20mL。
4.1.3.5天平：感量为0.01mg,1mg。
4.1.3.6 削氏定氮仪.
4.1.4 采样
用于检测的巴氏杀菌乳储存和运输温度为2℃～6℃,UHT灭菌乳储存和运输温度不高于25℃。按GB/T 10111的规定取不少于250mL样品，样品不应受到破坏或者在转运和储藏期间发生变化。监督抽检或仲裁检验等采样应到加工厂抽取成品库的待销产品，1周内测定。
4.1.5 分析步骤
4.1.5.1 试样水解液的制备
吸取2.00mL试样，置于密闭耐热试管中，加入6.00mL10.6 mol/L盐酸溶液，混匀。密闭试管，置于干燥箱，在110℃下加热水解12h~23 h。加热约1h后，轻轻摇动试管。加热结束后，将试管从干燥箱中取出，冷却后用滤纸过滤，滤液供测定。
4.1.5.2 试样水解液中蛋白质含量的测定
移取2.00mL试样水解液，按GB 5009.5的规定测定试样溶液中的蛋白质含量。
4.1.5.3 试样水解液中糠氨酸含量的测定
移取1.00mL试样水解液，加入5.00mL的6g/L乙酸铵溶液，混匀，过0.22μm水相滤膜，滤液供上机测定。根据实验室配备的液相色谱仪器，按以下两种方法之一测定：
a) HPLC法测定
1) 色谱参考条件
色谱柱：C₈硅胶色谱柱，250mm×4.6 mm,5μm粒径，或相当者。
柱温：32℃。
流动相：0.1%三氟乙酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B。
2) 测定
利用流动相A和流动相B的混合液(50:50)以1mL/min的流速平衡色谱系统。然后，用初始流动相平衡系统直至基线平稳。注入10μL3 mol/L盐酸溶液，以检测溶剂的纯度。注入10μL待测溶液测定糠氨酸含量。色谱图参见附录A。
b) UPLC法测定
1) 色谱参考条件
色谱柱：HSS T3高强度硅胶颗粒色谱柱，100mm×2.1mm,1.8μm粒径，或相当者。
柱温：35℃。
流动相：6g/L乙酸铵含0.1%三氟乙酸水溶液为流动相A,甲醇为流动相B,纯水为流动相C。
洗脱条件：流动相A,等度洗脱，0.4mL/min。
2) 测定
宜使用流动相纯水和甲醇，依次冲洗色谱系统；仪器使用前，使用流动相纯水过渡，用
流动相A以0.4mL/min的流速平衡色谱柱。注人0.5μL3mol/L盐酸溶液，以检测溶
剂的纯度。注人0.5μL待测溶液测定糠氨酸含量。色谱图参见附录A。
4.1.6结果计算
4.1.6.1 试样中糠氨酸含量
糠氨酸含量以质量分数F计，数值以毫克每百克蛋白质(mg/100g蛋白质)表示，按式(1)计算。
4.1.6.2巴氏杀菌乳杀菌结束时糠氨酸含量
巴氏杀菌乳杀菌结束时，糠氨酸含量以FT计，数值以毫克每百克蛋白质(mg/100g蛋白质)表示，
按式(2)计算。
4.1.7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。在重现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值的20%。
4.1.8 检出限
HPLC法和UPLC法的检出限均为1.0mg/100g蛋白质。
4.2 乳果糖含量的测定
4.2.1 原理
试样经β-D-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)水解后产生半乳糖(galactose)和果糖(fructose),通过酶法测定产生的果糖量计算乳果糖含量。
试样中加入硫酸锌和亚铁氰化钾溶液，沉淀脂肪和蛋白质。滤液中加入β-D-半乳糖苷酶，在β-D
-半乳糖苷酶作用下乳糖水解为半乳糖和葡萄糖(glucose),乳果糖水解为半乳糖和果糖：
4.2.2 试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的实验室一级水。
4.2.2.1 灭菌水。
4.2.2.2过氧化氢(H₂O₂,质量分数为30%)。
4.2.2.3辛醇(C₈H1₈O)。
4.2.2.4 碳酸氢钠(NaHCO₃)。
4.2.2.5 硫酸锌(ZnSO₄7H₂O)。
4.2.2.6 亚铁氰化钾(K₄[Fe(CN)6]·3H₂O)。
4.2.2.7 氢氧化钠(NaOH)。
4.2.2.8硫酸铵[(NH₄)₂SO₄]。
4.2.2.9 磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)。
4.2.2.10磷酸二氢钠(NaH₂PO₄H₂O)。
4.2.2.11 硫酸镁(MgSO₄7H₂O)。
4.2.2.12 三乙醇胺盐酸盐[N(CH₂CH₂OH)₃HCl]。
4.2.2.13 β-D-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23);from Aspergillus oryzae,活性为12.6 IU/mg。
4.2.2.14 葡萄糖氧化酶(EC 1.1.3.4);from Aspergillus niger,活性为200 IU/mg。
4.2.2.15 过氧化氢酶(EC 1.11.1.6):from beef liver,活性为65000IU/mg。
4.2.2.16 己糖激酶(EC 2.7.1.1):from baker's yeast,活性为140 IU/mg。
4.2.2.17 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(EC1.1.1.49);from baker's yeast,活性为140IU/mg。
4.2.2.18磷酸葡萄糖异构酶(EC 5.3.1.9);from yeast,活性为350 IU/mg。
4.2.2.19 5'-腺苷三磷酸二钠盐(5'-ATP-Na₂)。
4.2.2.20烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐(β-NADP-Nag)。
4.2.2.21 硫酸锌溶液(168 g/L):称取300g硫酸锌溶于800mL水中，定容至1L。
4.2.2.22 亚铁氰化钾溶液(130g/L):称取150g亚铁氰化钾溶于800mL水中，定容至1L。
4.2.2.23 氢氧化钠溶液(0.33 mol/L):将1.32g氢氧化钠溶于100mL水中。
4.2.2.24 氢氧化钠溶液(1mol/L):将4g氢氧化钠溶于100mL水中。
4.2.2.25硫酸铵溶液(3.2mol/L):将42.24g硫酸铵溶于100mL水中。
4.2.2.26 缓冲液A(pH为7.5):称4.8g磷酸氢二钠、0.86g磷酸二氢钠和0.1g硫酸镁溶解于80mL水中，用1mol/L氢氧化钠溶液调整pH到7.5±0.1(20℃),定容到100mL。
4.2.2.27 缓冲液B(pH为7.6):称取14.00g三乙醇胺盐酸盐和0.25g硫酸镁溶解于80mL水中，用1mol/L氢氧化钠溶液调整pH到7.6±0.1(20℃),定容到100mL。
4.2.2.28缓冲液C:量取40.0mL缓冲液B,用水定容到100mL,摇匀。
4.2.2.29 β-D-半乳糖苷酶悬浮液(150mg/mL):用3.2 mol/L硫酸铵溶液将活性为12.6IU/mg的β-D-半乳糖苷酶制备成浓度为......
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