路径: 主页 > SN/T > 第70页 > SN/T 1105-2019 | 标准编号 | SN/T 1105-2019 (SN/T1105-2019) | | 中文名称 | 大家白蚁检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Detection and identification of Coptotermes curvignathus Holmgren | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | | | 字数估计 | 17,116 | | 发布日期 | 2019-09-03 | | 实施日期 | 2020-03-01 | | 旧标准 (被替代) | SN/T 1105-2014 | | 标准依据 | 海关总署公告2019年第142号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 1105-2019: 大家白蚁检疫鉴定方法
SN/T 1105-2019 英文名称: Detection and identification of Coptotermes curvignathus Holmgren
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T１１０５-２０１９代替ＳＮ/T １１０５-２０１４
大家白蚁检疫鉴定方法
中华人民共和国海关总署 发 布
前言
本标准按照GB/T １．１-２００９给出的规则起草。
本标准代替ＳＮ/T １１０５-２０１４《大家白蚁检疫鉴定方法》。
本标准与ＳＮ/T １１０５-２０１４相比，主要技术变化如下：
---删除了规范性引用文件；
---修改了术语和定义；
---修改了器材和试剂，将形态学部分与分子生物学部分进行了整合；
---增加现场检疫的内容，利于发现白蚁；
---增加了鉴定特征测量部位；
---增加了附录Ａ中大家白蚁的寄主与分布；
---增加了附录Ｂ世界乳白蚁的研究概述，厘清了乳白蚁属的同物异名。删除原标准近似种中的
白蚁的同物异名，菲岛乳白蚁为是格斯特乳白蚁的同物异名，锡纳邦乳白蚁是大家白蚁的同物
异名；
---修改了附录Ｃ大家白蚁及其近似种的检索表；
---增加了附录Ｅ大家白蚁的彩图；
---增加了附录Ｆ大家白蚁近似种的彩图。
本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国厦门海关、中华人民共和国拱北海关。
本标准主要起草人：庞金、黄蓬英、方志鹏、方元炜、林振基、姚向荣、董文广、张卫东、廖力。
本标准所代替标准的版本发布情况为：
---ＳＮ/T １１０５-２０１４。
大家白蚁检疫鉴定方法
１ 范围
本标准适用于大家白蚁的检疫和鉴定。
３ 大家白蚁基本信息
锯木及木包装传播等铺垫材料等扩散。其寄主、分布及生物学参见附录Ａ。世界乳白蚁属研究概述参
见附录Ｂ，美洲、非洲、大洋洲的乳白蚁因近似种不多，总的来说比较好鉴别，亚洲乳白蚁种类较多，较难
区分。大家白蚁与亚洲其他重要乳白蚁的检索表参见附录Ｃ。
４ 方法步骤
根据大家白蚁的为害状，在检疫现场或发生疑似大家白蚁的地方，取得卵、兵蚁、工蚁或成虫等。现
场检疫如发现有白蚁的兵蚁，依据形态学特征进行鉴定。如未发现白蚁兵蚁，而有卵、工蚁或有翅成虫
等时，利用大家白蚁ＩＴＳ特异性扩增引物的常规ＰＣＲ检测方法和实时荧光ＰＣＲ检测方法，可准确、快
速将大家白蚁与格斯特乳白蚁、台湾乳白蚁和南亚乳白蚁等３种乳白蚁区分开来。
５ 器材和试剂
５．１ 器材
显微镜、解剖镜、树皮铲、手锯、油锯、铁锥、螺丝刀、小斧头、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、毛笔、养
虫管、指形管、测微尺；ＰＣＲ扩增仪、实时荧光ＰＣＲ仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、台式离心机、核
酸蛋白分析仪、烘箱、高压灭菌锅、电子天平、研钵、摇床、水浴锅、旋涡震荡器、冰箱、微量加样器
（０．５μＬ，２μＬ，１０μＬ，２０μＬ，１００μＬ，２００μＬ，１０００μＬ）、ＰＣＲ反应管（０．２ｍＬ，０．５ｍＬ）。
５．２ 试剂
７５％乙醇、双蒸馏水、液氮、蛋白酶 Ｋ（２０ｍｇ／ｍＬ）、ＲＮＡ消化酶、Ｔｒｉｓ饱和酚、ＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑ
（２×）、氯仿、异戊醇、异丙醇、７５％乙醇、９５％乙醇、１０×ＰＣＲ缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸（ｄＮＴＰｓ）、
Ｔａｑ酶、ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ、琼脂糖、溴化乙锭（ＥＢ）、引物探针、昆虫基因组ＤＮＡ提取试剂盒。提取液Ａ：１％ＳＤＳ，５０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ·Ｃｌ（ＰＨ８．０），２５ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，２５ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ（ＰＨ８．０）。
６ 现场检测
６．１ 检查空洞
用铁锥敲打原木或木方两端和中部，听取是否有空心回声，探明是否有空洞。若是发出异常声响，
应撬开空洞，仔细检查是否有白蚁行踪。
６．２ 检查白蚁外露的活动踪迹
检查原木、木方等检疫物是否有白蚁泥（即白蚁排泄物及泥土堆积的蚁路）、分飞孔（此孔是有翅成
虫繁殖出飞的孔口，孔口常有泥土封住）和通气孔（即蚁巢外面直径约１ｍｍ的针尖状小孔，通常有十几
至几十个，孔口有时有细泥土，并常有兵蚁守卫），对有危害迹象的部位可用锯子进行剖木检查，必要时
取样本段回室内检疫。原木带树皮时需要用铲子或螺丝刀掀开树皮，观察树皮内侧和原木木质部是否
有白蚁危害状或虫体。
６．３ 查寻巢穴
在现场对有白蚁外露活动踪迹的可疑木材仔细查寻巢穴，如发现有白蚁活动，应及时收集标本，以
备进行实验室鉴定。
７ 实验室鉴定
７．１ 标本处理
标本置培养皿中用７５％的乙醇清洗，用细毛笔轻轻除去虫体附着的木屑和泥土。随后在体视显微
镜下用解剖针将虫体摆正，使鉴定的主要特征处于一个平面上，特别是兵蚁需虫体软化后将上颚分开。
７．２ 形态特征测量
标本虫体用带测微尺的体视显微镜进行特征观察，并对重要鉴定特征进行测量，测量标本不少于
１０头（标本数量少除外）。兵蚁标本测量包括：头长至上颚、头最宽、头高、左上颚长、囟孔长径、囟孔短
径、后颏最宽、后颏最狭、前胸背板宽、前胸背板长和触角节数等特征。有翅成虫标本测量包括体长（不
含翅）、头长到上唇端、头长至上颚、头宽连眼、复眼长径、复眼短径、复眼至头部下缘、单眼长径、单眼短
径，前翅长（无鳞）、前胸背板长、前胸背板宽、后足胫节长和触角节数等特征，单位为毫米（ｍｍ）。
７．３ 记录和计算
对所有测量的特征进行记录，并按照体视显微镜的倍数对测量值进行换算，统一换算成毫米
（ｍｍ）。同时，计算所有测量个体的平均值。
７．４ 形态学鉴定
７．４．１ 乳白蚁属鉴定
７．４．１．１ 兵蚁形态特征
头卵形，前段明显变狭，囟位于头前部，呈短管延出，囟孔大，朝向前方，上颚细而弯曲，除基部的锯
齿形缺刻外，内缘光滑无齿，触角１３节～１７节，上唇尖吞形。前胸背板平坦，狭于头部。
７．４．１．２ 有翅成虫形态特征
头部宽卵形，后唇基极短而平，触角１８节～２５节，囟位于头中部。前胸背板扁平，狭于头部，前翅
鳞大于后翅鳞且覆盖后翅鳞之上，翅脉有极浅的网状纹，翅面具毛，前翅中脉由肩缝处独立伸出，后翅中
脉由胫分脉基部分出，中脉距肘脉极近。
７．４．２ 大家白蚁鉴定
７．４．２．１ 工蚁形态特征
体长４．１０ｍｍ～５．０５ｍｍ。头近圆形，淡褐色，头宽１．３０ｍｍ～１．７５ｍｍ，头长０．８５ｍｍ～
１．０５ｍｍ，触角１４节～１５节。前胸背板宽０．６０ｍｍ～０．８５ｍｍ，前缘略翘起，中央有缺刻，前胸背板及
腹部乳白色，疏生淡黄色短毛。
７．４．２．２ 兵蚁形态特征
头壳深黄色，上颚深褐色，胸部腹部与足淡黄色。头壳稀布小毛，上唇端有１对端毛，囟孔两侧各具
１枚刚毛，囟孔与触角间也有１枚粗刚毛，前胸背板中区具短毛约２０枚。头壳卵圆形，最宽处在头的后
半部，上颚瘦长，军刀状，颚端强烈弯曲，左上颚基部有１深凹处，其前具小齿刻，上唇为舌形，长稍大于
宽，端部稍尖，唇端半透明，囟孔大、圆形，侧面观孔口倾斜，上部稍向后。触角１５节～１６节，一般为１６
节，第３、４节短小，几乎相等，第２节稍长于第３节或相等。前胸背板元宝形，宽大于长，前后缘中央具
浅凹，前侧角圆，两侧缘斜向后缘（参见附录Ｄ、附录Ｅ和附录Ｆ）。
７．４．２．３ 有翅成虫形态特征
全长１６ｍｍ～１７ｍｍ，翅长１３ｍｍ～１４ｍｍ，体长（不含翅）７．５ｍｍ，头近圆形，深褐色，头长
１．１５ｍｍ。触角黄褐色，２１节，第２、３、４节短于其他各节，其中第３节最短。复眼大，近圆形，单眼卵圆
形。触角与复眼间距小于触角与单眼间距，单眼与复眼间距小于单眼的宽度。前胸背板前缘中央向后
凹入，后缘中央向前凹入。前胸背板褐色，密生黄褐色长毛。前翅鳞大于后翅鳞，翅面密生细短的淡褐
色毛，前翅中脉从肩缝处独立伸出，肘脉有４条～１０条分支。后翅中脉从径分脉基部分出，肘脉有８
条～１０条分支，在不同个体间翅脉变化较大。
７．５ 分子生物学鉴定
７．５．１ 大家白蚁基因组DNA提取
取白蚁（工蚁、兵蚁、有翅成虫等）１头于双蒸水中漂洗，吸水纸吸干，解剖镜下剔除其体表的附着物
及腹部内容物，以免原生动物污染。置于１．５ｍＬＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，加入４０μＬ提取液Ａ，放置于-７０℃冰箱中，４ｍｉｎ后取出，用牙签捣碎，匀浆，加入等体积的３ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸钾（ＰＨ７．２），冰上放置１ｈ，加
入等体积酚／氯仿，混匀，１２０００ｇ离心１０ｍｉｎ，取上清液，加入２倍体积冰冻无水乙醇混匀放置冰箱１ｈ
沉淀ＤＮＡ；１２０００ｇ离心１５ｍｉｎ，弃上清，加入１ｍＬ７５％乙醇洗涤沉淀，１２０００ｇ离心１ｍｉｎ，晾干乙醇
后用１００μＬ双蒸水溶解沉淀，用微量分光光度仪测定ＤＮＡ浓度和纯度后，将提取的基因组ＤＮＡ于
-２０℃保存备用；也可采用试剂盒方法提取基因组ＤＮＡ。
７．５．２ DNA质量检查
用核酸蛋白分析仪测定ＤＮＡ的纯度与浓度，分别取得２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处的吸收值，计算核酸的
纯度和浓度，计算公式如下：
７．５．３ 常规PCR检测
７．５．３．１ 引物
大家白蚁常规ＰＣＲ扩增引物序列见表１。
７．５．３．２ 反应体系
常规ＰＣＲ反应体系见表２。
７．５．３．３ 反应条件
预变性９４℃５ｍｉｎ；变性９４℃１ｍｉｎ，退火延伸７２℃１ｍｉｎ，３０个循环；最后７２℃延伸５ｍｉｎ。
７．５．３．４ 阴性对照、阳性对照和空白对照的设置
以乳白蚁属其他种类ＤＮＡ模板为阴性对照，以大家白蚁的ＤＮＡ作为阳性对照，以灭菌去离子水
作空白对照，各做２个重复。
７．５．３．５ 琼脂凝胶电泳检测
常规ＰＣＲ产物用琼脂糖凝胶电泳检查扩增目标片段的大小。取ＰＣＲ产物５μＬ，加入１０×ＰＣＲ缓冲液１μＬ，并用ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ作分子量标记，在含ＤＮＡ染色剂的１．５％琼脂糖凝胶上电泳３０ｍｉｎ（９０Ｖ），凝胶图像分析仪上检查是否扩增出预期大小的目标片段，拍摄并记录结果。
７．５．４ 实时荧光PCR检测
７．５．４．１ 引物及探针
大家白蚁实时荧光ＰＣＲ引物及探针序列见表３。
７．５．４．２ 反应体系
大家白蚁实时荧光反应体系见表４。
７．５．４．３ 反应条件
预变性９４℃１ｍｉｎ；变性９４℃１５ｓ，６０℃退火延伸１ｍｉｎ，４０个循环。
７．５．４．４ 阴性对照、阳性对照和空白对照的设置
同７．５．３．４。
８ 结果判定
８．１ 形态学方法
以兵蚁的形态特征为依据，有翅成虫的鉴定特征可作参考，符合７．４．２．２可判定为大家白蚁。
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