路径: 主页 > SN/T > 第73页 > SN/T 3287-2012 | 标准编号 | SN/T 3287-2012 (SN/T3287-2012) | | 中文名称 | 棉花皱叶病毒分子检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Molecular detection and identification of cotton leaf crumple virus | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 07.080 | | 字数估计 | 13,167 | | 标准依据 | 国质检认(2012)643号 ;行业标准备案公告2013年第1号(总第157号) | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了棉花皱叶病毒(参见附录A)核酸的提取、PCR及实时荧光PCR检测的方法。本标准适用于进出境植物检疫中棉花皱叶病毒的检疫鉴定。 | SN/T 3287-2012
Molecular detection and identification of cotton leaf crumple virus
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
棉花皱叶病毒分子检疫鉴定方法
2012-10-23发布
2013-05-01实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人民共
和国广东出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:张永江、张明哲、李明福、冯黎霞、李桂芬。
棉花皱叶病毒分子检疫鉴定方法
1 范围
本标准规定了棉花皱叶病毒(参见附录A)核酸的提取、PCR及实时荧光PCR检测的方法。
本标准适用于进出境植物检疫中棉花皱叶病毒的检疫鉴定。
2 方法原理
制定的主要依据。
3 仪器设备、用具及试剂
3.1 仪器设备
PCR仪、电泳系统、高速冷冻离心机、凝胶成像系统、振荡器、4℃冰箱、电子分析天平(0.001g)、超
净工作台、水浴锅、-80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、微波炉。
3.2 用具
可调移液器(2.5μL,10μL,20μL,100μL,1000μL)及灭菌的吸头、离心管、PCR管和研钵等。
3.3 试剂
除有特殊说明外,所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂。
实时荧光PCR试剂、三氯甲烷、异戊醇、乙醇、TaqDNA聚合酶、DNA分子标记、溴化乙锭、琼脂
糖等。
试剂配制见附录B。
4 检疫鉴定方法
4.1 常规PCR检测
提取样品DNA,设置阳性对照、阴性对照和空白对照,进行常规PCR扩增。具体操作步骤见附
录C。
4.2 实时荧光PCR检测
提取样品DNA,设置阳性对照、阴性对照和空白对照,进行实时荧光PCR扩增。具体操作步骤见
附录D。
5 结果判断
样品经PCR及实时荧光PCR检测为阴性时,判定样品不携带CLCrV。
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