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SN/T 3524-2013
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化学品 鱼类生殖毒性试验方法
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| 标准编号 | SN/T 3524-2013 (SN/T3524-2013) | | 中文名称 | 化学品 鱼类生殖毒性试验方法 | | 英文名称 | Chemicals. Fish assay for the reproduction toxicology | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 字数估计 | 40,492 | | 标准依据 | 质检总局关于发布2013年第一批179项出入境检验检疫行业标准的通知 ;行业标准备案公告2013年第9号(总第165号) | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了化学品对鱼类生殖毒性试验方法的方法局限性说明、测试原理、测试可接受性标准、方法描述、测试设计、试验过程、数据和报告、对于测试结果的解释和接受。本标准适用于化学品鱼类生殖毒性测试。 | SN/T 3524-2013
Chemicals.Fish assay for the reproduction toxicology
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
化学品 鱼类生殖毒性试验方法
2013-03-01发布
2013-09-16实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
目次
前言 Ⅲ
引言 Ⅳ
1 范围 1
2 术语和定义 1
3 方法局限性说明 1
4 测试原理 2
5 测试可接受性标准 2
6 方法描述 3
6.1 仪器 3
6.2 水 3
6.3 测试溶液 3
6.4 鱼的饲养 4
6.5 预暴露和鱼的选择 4
7 测试设计 4
7.1 一般说明 4
7.2 测试浓度的选择 4
8 试验过程 5
8.1 受试鱼的选择与称量 5
8.2 暴露条件 5
8.2.1 时间 5
8.2.2 饲养 5
8.2.3 灯光和温度 5
8.3 分析检测和测量的频率 5
8.4 观察 5
8.4.1 一般说明 5
8.4.2 存活率 6
8.4.3 行为和表观 6
8.4.4 繁殖力 6
8.4.5 鱼的人道处死 6
8.4.6 第二性特征的观察 6
8.4.7 卵黄蛋白原(VTG) 6
8.4.8 性腺组织病理学评价 7
9 数据和报告 7
9.1 采用方差分析(ANOVA)对生物标志物响应进行评价 7
9.2 测试结果报告 7
10 对于测试结果的解释和接受 8
附录A(资料性附录) 卵黄蛋白原分析的样品收集的推荐程序 10
附录B(资料性附录) 检测特定内分泌活性物质对黑头呆鱼和青鳉的第二性特征的评估 19
附录C(资料性附录) 鱼类内分泌筛选测试实验条件 24
附录D(资料性附录) 斑马鱼和黑头呆鱼的产卵基板 26
附录E(资料性附录) 可接受的稀释水的一些化学特性 28
附录F(资料性附录) 卵黄蛋白原加强样品和分析方法间参比标准 29
附录G(资料性附录) 统计分析流程 30
参考文献 31
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院。
本标准主要起草人:程艳、崔媛、陈会明、谢文平、马萍。
引 言
环境水平的化学物质与内分泌系统相互作用,危害人类和野生动物,故需要发展和验证鱼类检测内
分泌干扰活性物质的技术和方法。1998年,OECD开始着手修订已有测试指南,并发展新的测试指南,
以筛选和检测潜在的内分泌干扰物。其中一项重要研究内容就是发展鱼类内分泌干扰测试方法指南。
鱼类短期生殖毒性测试经过了广泛的验证试验,针对所选定的化学物质,在多个实验室间进行了方法相
关性和可靠性分析测试,所选定的化学物质通过各种机制包括内分泌方式来影响鱼类繁殖[1]~[5]。
本测试指南(TG229)所有测试终点都已对黑头呆鱼进行了验证,一部分终点已对日本青鳉(例如卵黄
蛋白原和第二性征)和斑马鱼(例如卵黄蛋白原)进行了验证。验证部分工作已由测试方法指南组国家
验证工作由美国环境保护局[7]委托指定的专家同行评议。本测试并不识别荷尔蒙干扰的特定机制,因
为受试动物拥有完整的下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴,会对影响HPG轴的物质产生不同程度的反应。
本测试方法描述了一种体内筛选测试方法,性成熟的雄鱼和处于产卵期的雌鱼放在一起,在其生命
周期中暴露于化学品一段有限的时间(21d)。在21d暴露期结束时,根据所用物种,在雄性和雌性鱼
上对一种或两种生物标志物终点进行测试,作为测试化学物质内分泌活性指标。这些测试终点包括卵
黄蛋白原和第二性特征。对黑头呆鱼、日本青鳉和斑马鱼可进行卵黄蛋白原测试,而第二性特征只能在
黑头呆鱼和日本青鳉上测试。此外在整个测试过程中每天都要监测定量繁殖力;性腺需要保留,可能通
过病理组织学来评估测试动物的生殖健康,也为其他测试终点提供更有力的证据。
此生物测试作为特定内分泌干扰模式的体内筛选测试,其应用可在“OECD内分泌干扰化学物质
测试和评价框架”中看到。在这个框架内,鱼类短期生殖测试提议为等级4,作为体内试验提供有关多
种内分泌干扰机制的数据。
化学品 鱼类生殖毒性试验方法
1 范围
本标准规定了化学品对鱼类生殖毒性试验方法的方法局限性说明、测试原理、测试可接受性标准、
方法描述、测试设计、试验过程、数据和报告、对于测试结果的解释和接受。
本标准适用于化学品鱼类生殖毒性测试。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1
承载率 loadingrate
单位体积水的鱼的湿重。
2.2
承载密度 stockingdensity
单位体积水的鱼的数目。
2.3
卵黄蛋白原 vitelogenin,VTG
卵黄蛋白原是一种蛋黄蛋白的磷脂糖蛋白前体,一般产生于所有卵生动物的性成熟雌体中。
2.4
最大耐受浓度,代表大约LC50的10%。
2.5
HPG轴 hypothalamic-pituitary-gonadalaxis
下丘脑-垂体-性腺轴。
3 方法局限性说明
3.1 卵黄蛋白原(Vitelogenin,VTG)通常受循环的内源性雌激素的刺激,由雌性卵生脊椎动物的肝脏
产生。卵黄蛋白原是卵黄蛋白的前提,一旦在肝脏中产生,由血流进入卵巢,并被发育中的雌性配子吸
收并改变。卵黄蛋白原在未成熟的雌性和雄性鱼的血浆中几乎检测不到,因为它们缺乏足够的循环雌
激素,但是在受外源性的雌激素的刺激下,肝脏能够合成并分泌VTG。
3.2 VTG的测量能够检测不同雌激素作用模式的化学物质,对雌激素类化学物质的检测,有可能通过
测量雄性鱼的卵黄蛋白原的产生,并已在科学同行文献中有大量报道[8]。也有证明表示卵黄蛋白原的
产生也能由暴露于芳香化的雄激素引起([9]和[10])。在雌......
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