路径: 主页 > SN/T > 第56页 > SN/T 5170-2019 | 标准编号 | SN/T 5170-2019 (SN/T5170-2019) | | 中文名称 | 出口动物源食品中肾上腺素和去甲肾上腺素的测定 | | 英文名称 | Determination of adrenaline and noradrenaline in animal-origin foodstuffs for export | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.050 | | 字数估计 | 8,879 | | 发布日期 | 2019 | | 实施日期 | 2020-05-01 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 5170-2019: 出口动物源食品中肾上腺素和去甲肾上腺素的测定
SN/T 5170-2019 英文名称: Determination of adrenaline and noradrenaline in animal-origin foodstuffs for export
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
出口动物源食品中肾上腺素和去甲 肾上腺素的测定
中 华 人 民 共 和 国 海 关 总 署 发 布
1 范围
本标准规定了出口动物源食品中肾上腺素、去甲肾上腺素残留量的液相色谱测定方法和液相色谱 -
质谱/ 质谱确证方法。
本标准适用于猪肉、牛肉、羊肉、牛奶、鸡蛋中肾上腺素、去甲肾上腺素残留量的测定，其他
食品也可参照使用。
2 规范性引用文件
下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/ T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 方法提要
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋中肾上腺素和去甲肾上腺素经焦性没食子酸 - 乙二胺四乙酸二钠溶
液提取，三氯甲烷去蛋白，乙腈饱和正己烷溶液除脂；牛奶用高氯酸溶液提取。试样用阳离子固
相萃取小柱净化后，经液相色谱仪测定，基质添加标准曲线外标法定量，阳性样品采用液相色谱 -
质谱/ 质谱仪进行定性确证。
4 试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB/ T 6682 规定的一级水。
4.1 甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。
4.2 乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。
4.3 甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。
4.4 正己烷（C6H14，CAS 号：110-54-3）。
4.5 三氯甲烷（CHCl3，CAS 号：67-66-3）。
4.6 磷酸（H3PO4，CAS 号：7664-38-2）。
4.7 高氯酸（HClO4，CAS 号：7601-90-3）：含量 70%~72%。
4.8 磷酸二氢钾（KH2PO4，CAS 号：7778-77-0）。
4.9 乙酸铵（CH3COONH4，CAS 号：631-61-8）。
4.10 焦性没食子酸（C6H6O3，CAS 号：87-66-1）。
4.11 乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8，CAS 号：139-33-3）。
4.12 肾上腺素标准物质（C9H13O3N，CAS 号：51-42-3）：纯度大于等于 95%。
4.13 去甲肾上腺素标准物质（C8H11NO3，CAS 号：51-41-2）：纯度大于等于 95%。
4.14 高氯酸溶液（pH=2.0±0.2）：吸取约 0.4 mL 高氯酸（4.7）至 1 L 水中，配制成 pH=2.0±0.2
的高氯酸水溶液。
4.15 试样提取液：准确称取 1.26 g 焦性没食子酸（4.10）、1.86 g 乙二胺四乙酸二钠（4.11），加
入 950 mL 水，加 50 mL 乙腈（4.2）混合均匀。
4.16 乙腈饱和正己烷：量取 80 mL 正己烷（4.4）于 100 mL 分液漏斗中，加入适量乙腈（4.2）后，
剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腈层即得。
4.17 磷酸二氢钾 - 磷酸水溶液（pH=4.0）：准确称取 2.72 g 磷酸二氢钾（4.8），用水定容至 1 L，
用磷酸（4.6）调节 pH 至 4.0。
4.18 0.1% 甲酸甲醇溶液：准确移取 1 mL 甲酸（4.3），用甲醇（4.1）定容至 1 000 mL。
4.19 洗脱液：移取 2 mL 甲酸（4.3）加入 100 mL 的乙腈 - 水溶液（85 ： 15，体积比）中。
4.20 100 mmol/ L 乙酸铵溶液：准确称取 3.85 g 乙酸铵（4.9），用水溶解，定容至 500 mL。
4.21 40 mmol/ L 乙酸铵溶液：准确称取 1.54 g 乙酸铵（4.9），用水溶解，定容至 500 mL。
4.22 0.5 mmol/ L 乙酸铵溶液：准确称取 0.038 5 g 乙酸铵（4.9），用水溶解，定容至 1 L。
4.23 标准储备液：准确称取适量的肾上腺素标准物质（4.12）、去甲肾上腺素标准物质（4.13），均
精确至 0.000 1 g，用 0.1% 甲酸甲醇溶液（4.18）溶解，配制成浓度为 1 000 mg/ L 的标准储备液，-18 ℃
条件下避光保存，有效期 3 个月。
4.24 混合标准中间溶液：分别准确移取 5.0 mL 肾上腺素、去甲肾上腺素的标准储备液（4.23）至
100 mL 棕色容量瓶中，用 0.1% 甲酸甲醇溶液（4.18）稀释至刻度，配制成浓度为 50.0 mg/ L 的标准
中间溶液，于 -18 ℃ 条件下避光保存，有效期 1 个月。
4.25 基质混合标准工作溶液：将混合标准中间溶液（4.24）用磷酸二氢钾 - 磷酸水溶液（4.17）
稀释成浓度为 2.50 mg/ L~50.0 mg/ L 的标准系列溶液，称取与试样基质相应的阴性样品 5 g，加入
标准系列溶液 100 μL，与试样同时进行提取和净化，得到浓度分别为 125 μg/ L~2 500 μg/ L 的基质混
合标准工作溶液。
4.26 阳离子固相萃取（SPE）小柱：填料为 N- 乙烯基吡咯烷酮 - 二乙烯苯共聚物基质 -COOH
6 mL（150mg）或性能相当者。使用前依次用 6 mL 甲醇（4.1）、6 mL 水对柱子进行活化。
4.27 微孔滤膜：通用型，0.22 μm。
5 仪器与设备
5.1 液相色谱仪：配荧光检测器。
5.2 液相色谱 - 质谱/ 质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。
5.3 组织捣碎机。
5.4 涡旋混合器。
5.5 电子分析天平：感量为 0.000 1g 和 0.01g。
5.6 高速冷冻离心机：转速不低于 8 000 r/ min。
5.7 氮气吹干仪。
5.8 pH 计。
6 试样制备与保存
6.1 试样制备
6.1.1 猪肉、牛肉、羊肉
猪肉、牛肉、羊肉各约 500 g，放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成 2 份，分别装入清
洁容器内，并标明标记。
6.1.2 鸡蛋
取 16 枚新鲜鸡蛋（约 1 kg），洗净、去壳后充分混匀，均分成 2 份，分别装入清洁容器内，
并标明标记。
6.1.3 牛奶
将牛奶从冰箱中取出，放置至室温、摇匀，备用。
制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
6.2 试样保存
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋试样于 -20 ℃ 以下条件下保存；牛奶试样置于 0 ℃~4 ℃ 条件
下保存。
7 测定步骤
7.1 提取
7.1.1 猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋
称取试样 5 g （精确到 0.01 g）于 50 mL 具塞离心管中，加入 10 mL 试样提取液（4.15），涡
旋提取 1 min，加入 5 mL 三氯甲烷（4.5），涡旋混匀 30 s，以 8 000 r/ min 的转速离心 10 min
后，取全部上清液于另一 50 mL 离心管中，加入 5 mL 乙腈饱和正己烷（4.16），涡旋混匀 30 s，
以 8 000 r/ min 的转速离心 3 min，收集下层清液，用 100 mmol/ L 乙酸铵溶液（4.20）定容到
25 mL，待净化。
7.1.2 牛奶
称取试样 5 g（精确到 0.01 g）于 50 mL 具塞离心管中，加入 20 mL 高氯酸溶液（4.14），静置
20 min，于 4 ℃ 经涡旋提取 1 min，以 8 000 r/ min 的转速离心 10 min，取出上清液，用 100 mmol/ L
乙酸铵溶液（4.20）定容到 50 mL，待净化。
7.2 净化
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋样品取 7.1.1 中待净化溶液 12.5 mL 过 SPE 小柱（4.26）；牛奶样品取
7.1.2 待净化溶液 25 mL 过 SPE 小柱（4.26）。控制流速为 1 mL/ min~2 mL/ min，再依次用 5 mL
40 mmol/ L 乙酸铵溶液（4.21）和 5 mL 甲醇（4.1）淋洗柱子，经真空抽干，用 5 mL 洗脱液（4.19）
洗脱，控制流速为 1 mL/ min~2 mL/ min，收集洗脱液，用氮气吹至干，用磷酸二氢钾 - 磷酸水
溶液（4.17）定容至 1 mL，过 0.22 μm 微孔滤膜（4.27），供液相色谱仪分析。
7.3 测定
7.3.1 液相色谱条件
7.3.1.1 色谱柱：C18 色谱柱，250 mm×4.6 mm（内径），粒径 5.0 μm 或性能相当者。
7.3.1.2 柱温：35 ℃。
7.3.1.3 流动相：A 为磷酸二氢钾 - 磷酸水溶液（pH=4.0）（4.17），B 为甲醇（4.1），梯度洗脱，
梯度洗脱条件见表 1。
7.3.1.4 柱流速：1 mL/ min。
7.3.1.5 进样量：10 μL。
7.3.1.6 检测器激发波长：285 nm。
7.3.1.7 发射波长：320 nm。
7.3.2 定量测定
待测样品中化合物色谱峰的保留时间与基质混合标准工作溶液相比，变化范围应在 ±2.5%
之间。将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱仪中，保留时间定性，测得待测物
峰面积。待测样液中肾上腺素、去甲肾上腺素的响应值均应在仪器检测的定量线性响应范围内。
肾上腺素、去甲肾上腺素的液相色谱图参见附录 A。
7.4 液相色谱 - 质谱/ 质谱确证
7.4.1 阳性样品的确证
对于液相色谱方法检出阳性的样品，采用液相色谱 - 质谱/ 质谱方法进行定性确证。
7.4.2 液相色谱条件
7.4.2.1 色谱柱：C18 色谱柱，50 mm×2.1 mm（内径），粒径 1.7 μm 或性能相当者。
7.4.2.2 柱温：35 ℃。
7.4.2.3 流动相：A 为 0.5 mmol/ L 乙酸铵溶液（4.22），B 为 0.1 % 甲酸甲醇溶液（4.18），梯度
洗脱，梯度洗脱条件见表 2。
7.4.2.4 柱流速：0.25 mL/ min。
7.4.2.5 进样量：10 μL。
7.4.3 质谱条件
7.4.3.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。
7.4.3.2 扫描方式：正离子扫描。
7.4.3.3 检测方式：多反应监测模式（MRM）。
7.4.3.4 监测离子对、定量离子对见表 3。
7.4.3.5 使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求，参考质谱条件参见附录 B。
7.4.4 定性测定
按照液相色谱 - 质谱/ 质谱条件测定试样和基质混合标准工作溶液，试样中目标化合物的保
留时间与基质混合标准工作溶液中对应化合物的保留时间偏差在 ±2.5% 之内；定性离子对的......
|