路径: 主页 > MISC > 第347页 > WS/T 346-2011 | 标准编号 | WS/T 346-2011 (WS/T346-2011) | | 中文名称 | 网织红细胞计数的参考方法 | | 英文名称 | Reference method for reticulocyte counting | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C50 | | 国际标准分类 | 11.020 | | 字数估计 | 9,913 | | 发布日期 | 2011-09-30 | | 实施日期 | 2012-04-12 | | 标准依据 | 卫通(2011)16号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了网织红细胞计数参考方法的技术要求。本标准适用于建立并运行网织红细胞计数参考方法的实验室。 | WS/T 346-2011: 网织红细胞计数的参考方法
WS/T 346-2011 英文名称: Reference method for reticulocyte counting
ICs 11.020
C50
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
网织红细胞计数的参考方法
1 范围
本标准规定了网织红细胞计数参考方法的技术要求。
本标准适用于建立并运行网织红细胞计数参考方法的实验室。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1参考方法
一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术 ,该技术要有依据 ,可提供是够准确和精密的实验数
据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法 ,参考方法的准确性必须与决定性方法进
行比较 ,并且须标示不准确度和不精密度。
3 总则
为了保证参考方法检测结果的准确性 ,建立参考方法的实验室必须与其他参考实验室进行结果比对。
4 原理
网织红细胞是未完全成熟的红细胞 ,其胞质中含有嗜碱性的 RNA物质 ,经碱性染料活体染色后 ,
形成蓝色点粒状或丝网状结构。参考方法中 ,采用显微镜 (明 场或相差)对新亚甲蓝活体染色后制备的
血涂片进行网织红细胞计数 ,确定网织红细胞与红细胞的比值后 ,使用参考方法 (ICSH,1994)计 数红细
胞 ,网 织红细胞比值乘以红细胞计数结果 ,即 为网织红细胞的绝对数。网织红细胞绝对数的表达方式为
每升全血中含有网织红细胞的数量。
5 血液标本的要求
5.1 血液标本的采集应使用真空采血管或注射器采血后注人含抗凝剂 的洁净试管 中,要 注意防止溶血。
5.2 使用 EDTA· K2抗凝剂 ,加人血液后抗凝剂的终浓度为 3.7umol/mL~5.4umol/mL(1.5mg/mL~2.2mg/mL)。
5.3 标本采集后要求在 4h内进行染色。
5.4 检测前应先轻柔地颠倒试管以混匀标本 ,颠倒次数至少为 8次 (试管的最佳颠倒次数取决于试管
的种类和容积大小 )。 血液加人抗凝管后 ,管 内剩余空间应至少占试管体积的 ⒛ %。
5.5 不能使用旋涡混匀器和滚轴混匀器。
6 染料和染液配制
6.1 推荐使用的染料为新亚甲蓝。
6.2 染液的配制方法 :将 1。 Og新亚甲蓝 (染料应干燥)溶解于 100mL pH为7。 4的等渗磷酸盐缓冲
液(150mmol/L的NaH2P0418mL,15o mmol/L的N饧 HP0482mL)中。
6.3 待染料溶解后 ,必须充分混匀并过滤 ,然后将其装人干净的棕色瓶中 ,避光保存于 2℃~8℃条件
下 ,染液可稳定 1个月。
6.4 使用前取适量的染液用过滤器或滤纸 (要求孔径为 11um)再次进行过滤 ,以 去除沉淀的染料和其他颗粒物质。
7 实验器具
7.1 巴斯德移液管。
7.2 75mm×1omm的玻璃试管。
7.3 载玻片 (经酸处理 )。
8 操作过程
8.1 将 100uL过滤后的染液加至 75mm×10mm的试管中 ,再将约 100uL的全血加至该试管中 ,加
盖并充分混匀后 ,在室温条件下染色 3min~5min。
8.2 将细胞悬液重新混匀 ,在载玻片上推成薄血膜。血膜长度至少有 2.5cm,血膜末端离玻片的末端
至少有 1cm的距离 ,且整个血膜周边应留有光滑连续的空 白区。可用热吹风等方式使血膜快速干燥
(避免温度过高或时间过长 )。
8.3 在低倍镜下 (总 的放大倍数为 100倍 )先浏览血膜的细胞分布情况 ,以 确认细胞均匀地分布于适当
的计数区域内 ,然后在油镜下计数血膜上的红细胞 ,如 出现任何干扰因素 (女口疟原虫、H⒍nz小体),则不适用于参考方法。
9 计数
9.1 要获得准确的计数结果 ,就必须把每个视野中的成熟红细胞和网织红细胞准确地区分开来。要求
由两位经验丰富的检验技术人员通过视频监测器或者两人共用一台双头双筒的显微镜同时计数。
9.2 每份检测标本都应选用 3张血涂片进行计数。
9.3 计数过程中视野的移动顺序如图 1所示。
9.5 成熟红细胞和网织红细胞要分别记录 ,网织红细胞的比值 ('p)可用公式(1)计算 :
10 精密度要求
10.1 检测结果精......
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