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[PDF] WS/T 594-2018 - 英文版

标准号码	内文	价格美元	第2步(购买)	交付天数	标准名称	状态
WS/T 594-2018	英文版	249	WS/T 594-2018	[PDF]天数 >=3	蝇类抗药性检测方法家蝇不敏感乙酰胆碱酯酶等位基因检测法	有效

基本信息
标准编号	WS/T 594-2018 (WS/T594-2018)
中文名称	蝇类抗药性检测方法家蝇不敏感乙酰胆碱酯酶等位基因检测法
英文名称	Test methods of fly resistance to insecticides-A molecular method for detecting insensitive ace allele in the Musca domestica
行业	卫生行业标准 (推荐)
中标分类	C05
字数估计	10,179
发布日期	2018-03-01
实施日期	2018-08-01
标准依据	国卫通(2018)3号
发布机构	卫生健康委员会

WS/T 594-2018: 蝇类抗药性检测方法家蝇不敏感乙酰胆碱酯酶等位基因检测法 WS/T 594-2018 英文名称: Test methods of fly resistance to insecticides-A molecular method for detecting insensitive ace allele in the Musca domestica ICS 11.020 C 05 WS 中华人民共和国卫生行业标准蝇类抗药性检测方法家蝇不敏感乙酰胆碱酯酶等位基因检测法 1 范围本标准规定了家蝇不敏感乙酰胆碱酯酶等位基因的检测方法。本标准适用于家蝇乙酰胆碱酯酶第342氨基酸位点基因型的检测。 2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 2.1 乙酰胆碱酯酶 acetyl cholinesterase 存在于生物体的一种水解酶，由乙酰胆碱酯酶基因ace编码。 2.2 等位基因 allele 存在于同一物种的相同基因的不同形式互称为等位基因。 2.3 342G、342V 和 342A 342G、342V和342A分别表示家蝇乙酰胆碱酯酶第342氨基酸残基位点上的氨基酸为甘氨酸（Gly）、缬氨酸（Val）和丙氨酸（Ala）。 3 样本采集采用诱捕或网捕等方法从现场采集家蝇成虫内，浸泡在100%乙醇溶液中带回实验室。浸泡样品可在 4 ℃条件下短期（6个月内）保存，可在-20 ℃以下长期保存。 4 引物录A。配制为10 μmol/L浓度，保存于-20 ℃冰柜。 5 仪器设备 5.1 PCR（聚合酶链式反应）仪。 5.2 琼脂糖凝胶电泳仪。 5.3 凝胶成像仪。 5.4 恒温水浴锅。 6 主要试剂 6.1 DNA聚合酶（Taq酶）。 6.2 限制性内切酶Bsp1286I。 6.3 限制性内切酶Eae I。 7 操作步骤 7.1 在 PCR管中加入 10×PCR 缓冲液 (含 100 mmol/L Tris-HCl, 500 mmol/L KCl, 15 mmol/L MgCl2) 2.5 μL，dNTP（2.5 mmol/L）2.0 μL，引物 F 0.5 μL，引物 R 0.5 μL，单头家蝇的基因组 DNA 1 μL （100 ng～300 ng，提取方法可参见附录 B，也可用商售的 DNA提取试剂盒或其他类似方法提取）和 Taq 酶 (2～5个单位)，用灭菌水补齐至 25 μL，混匀。 7.2 将 PCR管放入 PCR 仪中，设置 PCR反应程序为：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35个循环；72 ℃ 10 min。运行程序。 7.3 PCR运行结束后，取 5 μL PCR产物在 1.5% 的琼脂糖凝胶上进行电泳，电压设定在 160 V，电泳 20 min后在紫外光下检测，有清楚单一的 609bp 的条带的 PCR产物用于进行以下酶切反应。 7.4 取合格样品（即电泳检测产物为 609bp）的 PCR产物设置两个酶切反应，反应 A 用 Bsp1286I酶、反应 B用 Eae I酶进行酶切，酶切反应体系的设置根据酶产品的使用说明进行（参见附录 C）。 7.5 将酶切后的产物上样在 1.5% 的......

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