| 标准编号 | GB 31656.2-2021 (GB31656.2-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of Tylosin residues in aquatic products by high performance liquid chromatography | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X20 | | 字数估计 | 6,663 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31656.2-2021: 食品安全国家标准 水产品中泰乐菌素残留量的测定 高效液相色谱法
食品安全国家标准
水产品中泰乐菌素残留量的测定
高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
水产品中泰乐菌素残留量的测定 高效液相色谱法
１ 范围
本文件规定了水产品中泰乐菌素残留检测的制样和高效液相色谱测定方法.
本文件适用于鱼、虾、蟹、甲鱼等水产品可食组织中泰乐菌素残留量测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T ３０８９１-２０１４ 水产品抽样规范
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的泰乐菌素,在弱碱性条件下,用乙酸乙酯提取、正己烷脱脂、SCX固相萃取柱净化,高效
液相色谱法测定,外标法定量.
５ 试剂与材料
以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
5.1 试剂
5.1.1 乙腈(CH₃CN):色谱纯。
5.1.2甲醇(CH₃OH):色谱纯。
5.1.3正己烷(C₆Hu):色谱纯。
5.1.4 乙酸乙酯(CH₃COOC₂H₅):色谱纯。
5.1.5磷酸氢二钾(K₂HPO₄)。
5.1.6磷酸二氢钾(KH₂PO)。
5.1.7磷酸(H₃PO₄)
5.2标准品
酒石酸泰乐菌素(Tylosin tartrate,CAS号：74610-55-2):含量≥98%。
5.3 溶液配制
5.3.1 磷酸盐缓冲溶液I(pH 8.0):取磷酸二氢钾0.52 g、磷酸氢二钾16.73 g,用水溶解并稀释至500 mL。
5.3.2磷酸盐缓冲溶液Ⅱ(pH4.0):用磷酸调节磷酸盐缓冲溶液I的pH至4.0。
5.3.3磷酸氢二钾溶液(0.1 mol/L,pH 9.0):取磷酸氢二钾1.74 g,用水溶解并稀释至100 mL。
5.3.4磷酸二氢钾溶液(0.01 mol/L,pH 2.5):取磷酸二氢钾1.36 g,用水溶解并稀释至1000mL,磷酸
调节pH至2.5。
５.４ 标准溶液制备
泰乐菌素标准储备液(１００μg/mL):取酒石酸泰乐菌素标准品约１０mg,精密称定,加乙腈适量使溶
解并定容至１００mL棕色容量瓶中,摇匀,即得.２℃~８℃避光保存,有效期１个月.
５.５ 材料
SCX固相萃取柱:５００mg/３mL,或相当者.
６ 仪器和设备
６.１ 液相色谱仪:配紫外检测器.
６.２ 分析天平:感量０.００００１g和０.０１g.
６.３ 高速组织捣碎机.
６.４ 离心机:５０００r/min.
６.５ 涡旋混合器.
６.６ 振荡器.
６.７ 旋转蒸发器.
６.８ 固相萃取装置.
６.９ 鸡心瓶:１００mL.
６.１０ 具塞离心管:５０mL.
７ 试料的制备与保存
７.１ 试料的制备
按GB/T ３０８９１-２０１４中附录B的要求制样.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７.２ 试料的保存
-１８℃以下保存,有效期３个月.
８ 测定步骤
８.１ 提取
取试料５g(准确至±０.０５g),于５０mL具塞离心管中,加磷酸盐缓冲溶液Ⅰ５mL,涡旋混匀１min.
加乙酸乙酯２５mL,振摇提取１０min,４５００r/min离心５min,上清液转移至１００mL鸡心瓶中,加乙酸乙酯２５mL,重复提取一次,合并提取液,４５℃水浴减压蒸发至近干.
８.２ 净化
用甲醇１mL溶解残渣,转移至另一５０mL离心管,用磷酸盐缓冲溶液Ⅱ１０mL和正己烷１０mL洗
涤鸡心瓶,涡旋混合２min,洗涤液合并于离心管,涡旋混匀,４５００r/min离心５min,弃去上层正己烷,取
下层水溶液,备用.取SCX固相萃取柱,用甲醇５mL、磷酸盐缓冲溶液Ⅱ５mL活化,备用液过柱(控制流速约１.５mL/min).依次用水３mL、甲醇５mL、水３mL、磷酸氢二钾溶液３mL、甲醇０.４mL洗柱,弃去洗出液,抽干.加甲醇３.０mL洗脱,收集洗脱液,涡旋混匀,０.４５μm微孔滤膜过滤,待上机分析.
８.３ 标准曲线的制备
精密量取泰乐菌素标准储备液适量,用甲醇稀释制成浓度为０.０５０μg/mL、０.１０μg/mL、０.５０μg/mL、１.００μg/mL、２.００μg/mL、５.００μg/mL的系列标准工作液,供液相色谱仪分析.
８.４ 测定
８.４.１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８色谱柱(２５０mm×４.６mm,５μm)或性能相当者;
b) 检测波长:２８５nm;
c) 流动相:A为磷酸二氢钾溶液,B为乙腈,梯度洗脱条件见表１;
d) 流速:１.０mL/min;
e) 柱温:３５℃;
f) 进样量:５０μL.
８.４.２ 测定法
取试样溶液和标准溶液各５０μL,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.标准溶液及试样
溶液中泰乐菌素响应值应在仪器检测的线性范围之内.根据泰乐菌素标准工作液的保留时间定性,外标
法定量.色谱图见附录A.
８.４.３ 空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作.
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