| 标准编号 | GB 31656.3-2021 (GB31656.3-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of norfloxacin, ciprofloxacin, enrofloxacin, ofloxacin, oxolinic acid and flumequine residues in fishery products by high performance liquid chromatography | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X20 | | 字数估计 | 8,864 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31656.3-2021: 食品安全国家标准 水产品中诺氯沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、噁喹酸、氯甲喹残留量的测定 高效液相色谱法
书食品安全国家标准
水产品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、
氧氟沙星、 喹酸、氟甲喹残留量的测定
高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
水产品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、
喹酸、氟甲喹残留量的测定 高效液相色谱法
１ 范围
本文件规定了水产品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、 喹酸、氟甲喹残留量检测的制样
和高效液相色谱测定方法.
本文件适用于水产品中鱼类肌肉组织,虾、蟹、贝类的可食组织中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟
沙星、 喹酸、氟甲喹残留量的检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅
该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T ３０８９１-２０１４ 水产品抽样规范
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、 喹酸、氟甲喹,经酸化乙腈提取,正己烷脱
脂,C１８固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ荧光检测法测定,外标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５.１ 试剂
5.1.1 乙腈(CH₃CN):色谱纯。
5.1.2 甲醇(CH₃OH):色谱纯。
5.1.3正己烷(C₆H₁):色谱纯。
5.1.4 盐酸(HCI),
5.1.5磷酸(H₃PO₄)。
5.1.6氨水(NH₃·H₂O)。
5.1.7氢氧化钠(NaOH)。
5.1.8二水合磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O)。
5.1.9无水硫酸钠(Na₂SO₄)。
５.１.１０ 四丁基溴化铵(C₁₆H₃₆BrN).
５.２ 标准品
诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、 喹酸、氟甲喹:含量≥９８.０％,详见附录A.
５.３ 溶液配制
５.３.１ 盐酸溶液:取盐酸５０mL,加水稀释至１００mL,混匀.
５.３.２ 磷酸溶液:取磷酸１mL,加水稀释至１０mL,混匀.
５.３.３ 酸化乙腈溶液:取乙腈２５０mL,加盐酸溶液２mL,充分混匀.
５.３.４ 乙腈饱和正己烷溶液:取正己烷２００mL于２５０mL分液漏斗中,加适量乙腈后,剧烈振摇,待分配平衡后,弃去乙腈层,即得.
５.３.５ ０.１mol/L盐酸溶液:取盐酸９mL,用水稀释至１０００mL.
５.３.６ ０.１mol/L氢氧化钠溶液:取氢氧化钠４g,用水溶解并稀释至１０００mL.
５.３.７ ０.０５mol/L磷酸盐缓冲溶液:取二水合磷酸二氢钠１.５６g,加０.１mol/L氢氧化钠溶液７９mL溶解,用水稀释至２００mL.
５.３.８ ０.０１mol/L四丁基溴化铵溶液(pH３.０):取四丁基溴化铵３.２２g,加水９００mL使溶解,用磷酸溶液调节pH到３.０,用水稀释至１０００mL.
５.３.９ 洗脱液:取氨水２５mL,用甲醇稀释至１００mL.
５.４ 标准溶液制备
５.４.１ 诺氟沙星、氧氟沙星标准储备液(１００μg/mL):取诺氟沙星、氧氟沙星各约１０mg,精密称定,用０.１mol/L盐酸溶液１０mL使溶解,用乙腈稀释定容至１００mL棕色容量瓶中,摇匀,即得.４℃以下避光保存,有效期３个月.
５.４.２ 环丙沙星、恩诺沙星标准储备液 (１００μg/mL):取盐酸环丙沙星、恩诺沙星各约１０mg,精密称定,用甲醇溶解并稀释定容至１００mL棕色容量瓶中,摇匀,即得.４℃以下避光保存,有效期３个月.
５.４.３ 喹酸、氟甲喹标准储备液 (１００μg/mL):取 喹酸、氟甲喹各约１０mg,精密称定,用０.１mol/L氢氧化钠溶液１０mL使溶解,加乙腈稀释定容至１００mL棕色容量瓶中,摇匀,即得.４℃以下避光保存,有效期３个月.
５.４.４ 混合标准工作液(１０μg/mL):精密量取诺氟沙星、氧氟沙星标准储备液,环丙沙星、恩诺沙星标准储备液, 喹酸、氟甲喹标准储备液各１mL,于１０mL棕色容量瓶中,用流动相A稀释至刻度,摇匀,配制
成浓度为１０μg/mL混合标准工作液.４℃以下避光保存,有效期１个月.
５.５ 材料
C１８固相萃取柱:５００mg/３mL,或相当者.
６ 仪器和设备
６.１ 高效液相色谱仪:配荧光检测器.
６.２ 分析天平:感量０.００００１g和０.０１g.
６.３ 氮吹仪.
６.４ 超声波振荡器.
６.５ 均质机:１５０００r/min.
６.６ 离心机:４０００r/min.
６.７ 尼龙微孔滤膜:０.２２μm.
６.８ 梨形瓶:１００mL.
６.９ 分液漏斗:２５０mL.
６.１０ 旋转蒸发器.
６.１１ 分液漏斗振摇器.
７ 试样的制备与保存
７.１ 试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,按GB/T ３０８９１-２０１４中附录B的要求制样.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.
７.２ 试样的保存
-１８℃以下保存,３个月内进行分析检测.
８ 测定步骤
８.１ 提取
称取试样５g(准确至±０.０２g),加酸化乙腈溶液２０mL、无水硫酸钠１０g,高速均质１min~２min,
３０００r/min离心５min,取上清液至分液漏斗,用酸化乙腈溶液２０mL,清洗刀头并溶解沉淀,重复提取２次,合并上清液.加乙腈饱和正己烷溶液６０mL,置分液漏斗振摇器(１５０r/min)上振荡２０min,静置,取下层乙腈至梨形瓶,４０℃旋转蒸发至干.加磷酸盐缓冲液４mL,超声振荡１min,静置３０s,溶液转移至
１５mL离心管.再重复提取残余物２次,溶液转移至同一离心管,合并３次残余物溶解液,３０００r/min离
心５min,取上清液,备用.
８.２ 净化
取C１８固相萃取柱,依次用甲醇、水、磷酸盐缓冲液各３mL活化.取上述备用液过柱,流速控制为每
秒１滴.水３mL淋洗,抽干,加洗脱液５mL,收集洗脱液,５０℃氮气吹干,加流动相A１.０mL使溶解,
过０.２２μm微孔滤膜,高效液相色谱测定.
８.３ 标准曲线的制备
分别精密量取混合标准工作液适量,用流动相A稀释成浓度分别为１０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/
mL、５００ng/mL、１０００ng/mL、２０００ng/mL的系列标准溶液,供高效液相色谱分析;现用现配.以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标,制作标准曲线.
８.４ 测定
８.４.１ 色谱条件
a) 色谱柱:C１８色谱柱(１５０mm×４.６mm,５μm),或相当者;
b) 流动相:A为０.０１mol/L四丁基溴化铵溶液Ｇ乙腈(９４∶６,V/V),B为乙腈,梯度洗脱条件见表１;
c) 流速:０.９mL/min;
d) 柱温:３５℃;
e) 进样量:１０μL;
f) 检测波长:时间程序见表２.
８.４.２ 测定法
取试样溶液和标准溶液,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.标准溶液及试样溶液中目
标药物的峰面积均应在仪器检测的线性范围之内.在上述色谱条件下,混合标准溶液色谱图见附录B.
８.５ 空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试样中待测药物的残留量按标准曲线或公式(１)计算.
１０ 方法灵敏度、准确度和精密度
１０.１ 灵敏度
本方法诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星的检测限为２.５μg/kg, 喹酸、氟甲喹的检测限
为５μg/kg;诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、......
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