| 标准编号 | GB 31659.6-2022 (GB31659.6-2022) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | (National food safety standards-Determination of cloprostinol residues in milk by liquid chromatography-tandem mass spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X16 | | 字数估计 | 9,922 | | 发布日期 | 2022-09-20 | | 实施日期 | 2023-02-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31659.6-2022: 食品安全国家标准 牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
GB 31659.6-2022 英文名称: (National food safety standards-Determination of cloprostinol residues in milk by liquid chromatography-tandem mass spectrometry)
中华人民共和国国家卫生健康委员会
食品安全国家标准
牛奶中氯前列醇残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
发 布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前 言
本文件按照 GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了牛奶中氯前列醇残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.
本文件适用于牛奶中氯前列醇残留量的检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的氯前列醇,用乙腈提取,混合阴离子交换固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱负离子模
式测定,外标法定量.
５ 试剂和材料
以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１２ 氨水(NH３H２O).
５１３ 甲酸(CH２O２).
５１４ 无水硫酸钠(Na２SO４).
５１５ 乙酸铵(CH３COONH４):色谱纯.
５２ 标准品
５２１ 氯前列醇(Cloprostenol,C２２H２９ClO６,CAS号:４０６６５Ｇ９２Ｇ７),含量≥９８％.
５３ 溶液配制
５３１ ０１％甲酸溶液:取甲酸１mL,用水稀释至１０００mL,混匀.
５３２ ５％氨水溶液:取氨水５０mL,用水稀释至１０００mL,混匀.
５３３ ２％甲酸乙腈溶液:取甲酸２０mL,用乙腈稀释至１０００mL,混匀.
５３４ ０１mol/L乙酸铵溶液:称取乙酸铵７７０g,用水溶解并稀释至１０００mL,混匀.
５３５ ５mmol/L乙酸铵溶液:取０１mol/L乙酸铵溶液５０mL,用水稀释至１０００mL,混匀.
５３６ 乙腈乙酸铵溶液:取乙腈３０mL,加５mmol/L乙酸铵溶液至１００mL,混匀.
５４ 标准溶液制备
５４１ 标准储备液:取氯前列醇钠对照品约１０mg,精密称定,加乙腈适量使溶解并稀释定容至１０mL
容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的氯前列醇标准储备液.-１８℃以下保存,有效期３个月.
５４２ 标准中间液:准确量取标准储备液０１mL,于１０mL容量瓶,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为
１０μg/mL的标准中间液.２℃~８℃保存,有效期１个月.
５４３ 系列标准工作液:准确量取标准中间液适量,用乙酸铵乙腈稀释配制成浓度为５ng/mL、
１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、５００ng/mL的系列标准工作溶液.现用现配.
５５ 材料
５５１ 混合阴离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL或其性能相当者.
５５２ 滤膜:０２２μm,有机相.
５５３ 离心管:１０mL,５０mL.
６ 仪器和设备
６１ 高效液相色谱Ｇ串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).
６２ 分析天平:感量００１g和０００００１g.
６３ 涡旋混合器.
６４ 超声仪.
６５ 冷冻离心机.
６６ 氮吹仪.
６７ 固相萃取装置.
７ 试样的制备与保存
７１ 试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试试样,并均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.
７２ 试样的保存
-１８℃以下储存.
８ 测定步骤
８１ 提取
取试料２g(准确至±００５g)于５０mL离心管中,加乙腈５mL,无水硫酸钠２g,涡旋混匀,超声提取
１０min,于４℃１００００r/min离心１０min,取上清液于１０mL离心管中,重复提取１次,合并２次上清液.
４０℃氮气吹干,残余物用１mL乙腈溶解,加０１％甲酸水溶液３mL,涡旋混匀,备用.
８２ 净化
取混合阴离子交换固相萃取柱,用乙腈３mL活化,水３mL平衡.取备用液过柱,用５％氨水溶液
３mL淋洗,抽干.用２％甲酸乙腈溶液３mL洗脱,收集洗脱液,４０℃氮气吹干,残余物用１mL乙腈乙酸
铵溶液溶解,用微孔滤膜过滤,供液相色谱Ｇ串联质谱测定.
８３ 基质匹配标准曲线的制备
准确量取氯前列醇的标准工作液各１mL,分别溶解经提取、净化及吹干后的空白试料残余物,滤膜过
滤,配制成氯前列醇浓度为５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、５００ng/mL的系列基
质匹配标准溶液,供液相色谱Ｇ串联质谱测定,以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度
为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.
８４ 测定
８４１ 色谱条件参考条件
a) 色谱柱:C１８柱长１５０mm,内径２１mm,粒径５μm,或性能相当者;
b) 流动相:A为５mmol/L乙酸铵溶液;B为乙腈;
c) 流速:０３mL/min;
d) 进样量:５μL;
e) 柱温:３０℃;
f) 流动相梯度及洗脱程序见表１.
８４２ 质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾离子源,负离子模式;
b) 检测方式:多反应监测(MRM);
c) 鞘气压力(GS１):３４４７５kPa(５０psi);
d) 辅助气压力(GS２):３４４７５kPa(５０psi);
e) 碰撞气压力(colisiongas):３４４７５kPa(５psi);
f) 卷帘气压力(curtaingas):２０６８５kPa(３０psi);
g) 负离子模式电喷雾电压(IS):-４５００V;
h) 雾化温度:５００℃;
i) 鞘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气.喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度;
j) 监测离子参数情况见表２.
８４３ 测定法
取试料溶液和基质匹配标准溶液,按８４１和８４２设定仪器条件操作,作单点或多点校准,外标法
计算.基质匹配标准溶液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范
围之内.试料溶液中待测物质的保留时间与基质匹配标准工作液中待测物质的保留时间之比,偏差在±
２５％以内,且试料溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表３的要求,
则可判定为样品中存在对应的待测物质.相关谱图见附录A.
８５ 空白试验
取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算与表......
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