| 标准编号 | SN/T 1559.2-2005 (SN/T1559.2-2005) | | 中文名称 | 非洲猪瘟间接免疫荧光试验操作规程 | | 英文名称 | Protocol of indirect immunofluorescent assay for African swine fever | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 6,698 | | 发布日期 | 2005-02-17 | | 实施日期 | 2005-07-01 | | 标准依据 | Industry standard filing Notice No. 4 of 2005 (No. 64 overall); National Quality recognize [2010] 98; industry standard filing Notice No. 5 of 2010 (No. 125 overall) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 | | 范围 | 本标准规定了间接免疫荧光试验检测非洲猪瘟抗体的方法;本标准适用于非洲猪瘟抗体的检测; | SN/T 1559.2-2005
Protocol of indirect immunofluorescent assay for African swine fever
书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T１５５９．２-２００５
非洲猪瘟间接免疫荧光试验操作规程
２００５-０２-１７发布
２００５-０７-０１实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准参照了国际动物卫生组织（ＯＩＥ）公布的《诊断试验和疫苗标准手册》（２００４年版）关于非洲
猪瘟诊断中的间接免疫荧光抗体试验方法。
本标准的附录Ａ为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局负责起草。
本标准主要起草人：刘中勇、周仲芳、许如苏、游洪。
本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
SN／T１５５９．２-２００５
非洲猪瘟间接免疫荧光试验操作规程
１ 范围
本标准规定了间接免疫荧光试验检测非洲猪瘟抗体的方法。
本标准适用于非洲猪瘟抗体的检测。
２ 仪器设备
２．１ 荧光显微镜。
２．２ 倒置显微镜。
２．３ 二氧化碳培养箱和普通恒温培养箱。
２．４ 冰箱。
３ 试验材料
３．１ 非洲猪瘟标准毒株。
３．２ 非洲猪瘟标准阴性血清和阳性血清。
３．３ 抗猪荧光抗体。
３．４ ＰＫ-１５细胞（猪肾细胞）或Ｖｅｒｏ细胞（非洲绿猴肾细胞）。
３．５ 胎牛血清。
３．６ 被检血清：５６℃灭活３０ｍｉｎ。
３．７ 蒸馏水（ｐＨ７．４），配制方法参见附录Ａ。
３．８ 细胞基础培养液、细胞生长培养液和细胞维持液，配制方法参见附录Ａ。
３．９ ０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．４ＰＢＳ（磷酸盐缓冲液），配制方法参见附录Ａ。
３．１０ 缓冲甘油：使用中性无自发荧光的甘油（分析纯）配制，配制方法参见附录Ａ。
３．１１ 丙酮：使用前置冰箱预冷。
４ 操作方法
４．１ 病毒培养
用细胞生长液培养ＰＫ-１５细胞或Ｖｅｒｏ细胞，待细胞长成单层后，弃去培养液，加入非洲猪瘟标准
毒株，使病毒液刚好完全覆盖细胞。于３７℃５％二氧化碳培养箱中吸附０．５ｈ～２ｈ，弃去病毒液，换以
新鲜的细胞维持液，置于３７℃５％二氧化碳培养箱内培养，逐日观察，待５０％以上细胞出现ＣＰＥ（细胞病
变）时收获。同时培养未感染病毒的细胞，供对照使用。
４．２ 制备抗原片
将收获的非洲猪瘟病毒感染细胞配制成浓度为５×１０５／ｍＬ的细胞悬液，滴２～３滴于载玻片上，涂
成均匀薄片，室温下自然风干，用预冷丙酮固定１０ｍｉｎ后，制成抗原片。置-２０℃保存。
４．３ 制备细胞对照片
将长成细胞单层的ＰＫ-１５细胞或Ｖｅｒｏ细胞按４．２的方法制备细胞对照片。
４．４ 加样
用ＰＢ......
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