YY/T 0616.7-2020 相关标准英文版PDF
YY/T 0616.7-2020: 一次性使用医用手套 第7部分:抗原性蛋白质含量免疫学测定方法
YY/T 0616.7-2020 英文名称: Medical gloves for single use -- Part 7: Test method for the immunological measurement of antigenic protein
１ 范围
ＹＹ/T ０６１６的本部分规定了一次性使用医用天然胶乳手套中抗原性蛋白质含量的免疫学测定的
试验原理、仪器、试剂和耗材、测定方法和试验报告。
本部分适用于一次性使用医用天然胶乳手套中抗原性蛋白质含量的定量测定。
２ 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T １６８８６．１ 医疗器械生物学评价 第１部分：风险管理过程中的评价与试验
GB/T １６８８６．２０ 医疗器械生物学评价 第２０部分：医疗器械免疫毒理学试验原则和方法
３ 术语和定义
GB/T １６８８６．１、GB/T １６８８６．２０界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
４ 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
５ 试验原理
本部分是采用天然胶乳（ＮＲＬ）蛋白特异性抗体测定天然胶乳手套中抗原蛋白含量的免疫学方法。
将试验样品和特异性ＮＲＬ蛋白特异性抗体共同孵育。分离剩余的ＮＲＬ蛋白抗体并将其与预先包被在固相载体上的过量ＮＲＬ蛋白抗原结合，加底物显色。通过底物显色反应导致颜色变化，测定ＯＤ值。
６ 仪器
并可选计算机进行数据分析）。
７ 试剂和耗材
７．１ 试剂
７．１．１ 缓冲液
７．１．１．１ 碳酸盐缓冲液
用天平称量并将０．７９５ｇ碳酸钠（Ｎａ２ＣＯ３）、１．４６５ｇ碳酸氢钠（ＮａＨＣＯ３）、０．１００ｇ叠氮化钠（ＮａＮ３）溶于蒸馏水中，定容至５００ｍＬ。检查ｐＨ并在必要时进行调整。
注：碳酸盐缓冲液可在（４±３）℃储存至少１个月。
７．１．１．２ PBS缓冲液
用天平称量５．１２５ｇ磷酸二氢钠（ＮａＨ２ＰＯ４·Ｈ２Ｏ）、４５．０００ｇ磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４·７Ｈ２Ｏ）并溶于１．５Ｌ蒸馏水中，并调整ｐＨ至７．４。加入１７５．３ｇ氯化钠（ＮａＣｌ），定容至２Ｌ，即为１０倍贮存液。
７．１．１．３ T-PBS洗液
在１ＬＰＢＳ工作液中加入０．５ｍＬ吐温２０（Ｔｗｅｅｎ２０），混匀。
７．１．２ 封闭液和抗体稀释液
７．１．２．１ 封闭液
含３ｇ／ｍＬ脱脂奶粉的Ｔ-ＰＢＳ，１００ｍＬ（用于测定板和稀释板的封闭处理）。
７．１．２．２ 稀释液
含０．２ｇ／ｍＬ脱脂奶粉的Ｔ-ＰＢＳ，１００ｍＬ（用于抗体稀释和竞争抑制步骤中的封闭）。
７．１．３ 参考品试剂
用蒸馏水制备的浓度为１ｍｇ／ｍＬ的ＮＲＬ蛋白溶液。聚丙烯管分装储存于（-２０±１０）℃，解冻后储存于（４±３）℃。
注：市售ＳｔＡｇ标准品溶液可选ＩＲＭ-９１３。
７．１．３．２ 包被抗原
用碳酸盐缓冲液将ＳｔＡｇ溶液配制成浓度为３μｇ／ｍＬ的溶液，用于包被测定板。
７．１．３．３ 参考标准品
用稀释液将ＳｔＡｇ溶液配制成浓度为２μｇ／ｍＬ的溶液，用于竞争抑制。为了减少可能的蛋白质损失，所有涉及含蛋白质溶液的步骤应在聚丙烯管或容器中进行。避免使用聚苯乙烯或玻璃容器。
７．１．４ 抗体
７．１．４．１ 一抗
可采用市售的抗ＮＲＬ抗体ＩＲＭ-９１４。
７．１．４．２ 二抗
辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）结合的抗兔ＩｇＧ，用于检测固相上 ＮＲＬ蛋白结合一抗。
７．１．５ 底物显色溶液
可将邻苯二胺（ＯＰＤ）和过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）用于黄色显色反应。
注：亦可采用ＴＭＢ试剂盒显色。
７．２ 耗材
９６孔微量测定板；稀释板，低蛋白结合的９６孔板用于样品稀释和抗体反应；多通道移液器；
板密封带或塑料盖子。
８ 测定方法
８．１ 样品制备
８．１．１ 宜使用７．１．１．２的ＰＢＳ工作液为浸提液。
８．１．２ 称量天然胶乳手套，并记录质量及表面积；每克天然胶乳手套宜加入５ｍＬ的浸提介质。浸提温度为（２５±５）℃；浸提时间为（１２０±５）ｍｉｎ。浸提过程应持续搅动，以确保样品与浸提介质充分接触。
或在浸提过程的开始、中间和结束阶段分别振荡３次，间隔１５ｓ／次。
低蛋白结合的０．４５μｍ滤器过滤收集浸提液至聚丙烯管中。
注１：在聚丙烯容器中进行浸提，以减少由于吸附到容器壁内表面而......
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