搜索结果: GB 1903.75-2025, GB1903.75-2025
| 标准编号 | GB 1903.75-2025 (GB1903.75-2025) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品营养强化剂 (6S)-5-甲基四氢叶酸，氨基葡萄糖盐 | | 英文名称 | National food safety standard - Nutrition fortifier - 6S-5-methyltetrahydrofolate, glucosamine salt | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X09 | | 字数估计 | 14,120 | | 发布日期 | 2025-03-16 | | 实施日期 | 2025-09-16 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 1903.75-2025: 食品安全国家标准 食品营养强化剂 (6S)-5-甲基四氢叶酸，氨基葡萄糖盐
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
食品营养强化剂 (6S)-5-甲基四氢叶酸,
氨基葡萄糖盐
2025-03-16发布
2025-09-16实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
食品安全国家标准
食品营养强化剂 (6S)-5-甲基四氢叶酸,
氨基葡萄糖盐
1 范围
本标准适用于以叶酸为原料,经甲基化、盐化、结晶、冻干等工艺制得的食品营养强化剂(6S)-5-甲
基四氢叶酸,氨基葡萄糖盐。
2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量
2.1 化学名称
N-[4-[[[(6S)-2-氨基-1,4,5,6,7,8-六氢-5-甲基-4-氧代-6-蝶啶]甲基]氨基]苯甲酰]-L-谷氨
酸,氨基葡萄糖盐
2.2 分子式
C32H51N9O16
2.3 结构式
2.4 相对分子质量
817.80(无水物)(按2022年国际相对原子质量)
3 技术要求
3.1 感官要求
感官要求应符合表1的规定。
表1 感官要求
项 目 要 求 检验方法
色 泽 乳白色至淡棕色
状 态 粉末,无肉眼可见杂质
气 味 无异臭
取适量试样置于洁净、干燥的白瓷盘中,在自然光线下观
察其色泽、状态,嗅其气味
3.2 理化指标
理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标
项 目 指 标 检验方法
(6S)-5-甲基四氢叶酸,氨基葡萄糖盐(以干基计),w/% 96.0~105.0 附录A中A.4
(6S)-5-甲基四氢叶酸(以干基计),w/% 54.0~59.0 附录A中A.4
氨基葡萄糖(以干基计),w/% 34.0~46.0 附录A中A.5
非对映异构体[(6S)-5-甲基四氢叶酸]/% ≥ 99.0 附录A中A.6
水分,w/% ≤ 8.0 GB 5009.3中卡尔·费休法
灰分,w/% ≤ 0.2 GB 5009.4
总杂质,w/% ≤ 2.5
4-氨基苯甲酰谷氨酸(ABGA),w/% ≤ 0.3
4α-羟基-5-甲基四氢叶酸(HOMeTHFA),w/% ≤ 1.0
(6S)-吡嗪-s-三嗪衍生物[(6S)-Mefox],w/% ≤ 0.3
5-甲基四氢蝶酸(MeTHPA),w/% ≤ 0.3
附录A中A.7
总砷(以As计)/(mg/kg) ≤ 2.0 GB 5009.11或GB 5009.76
铅(Pb)/(mg/kg) ≤ 2.0 GB 5009.12或GB 5009.75
镉(Cd)/(mg/kg) ≤ 1.0 GB 5009.15
总汞(以 Hg计)/(mg/kg) ≤ 0.1 GB 5009.17
注:商品化的(6S)-5-甲基四氢叶酸,氨基葡萄糖盐产品应以符合本标准的(6S)-5-甲基四氢叶酸,氨基葡萄糖盐
为原料,添加工艺所需的食品原料和/或食品添加剂作为辅料制成,辅料应符合相应的食品安全国家标准。
商品化(6S)-5-甲基四氢叶酸,氨基葡萄糖盐的含量应符合相应标示值。
附 录 A
检验方法
A.1 安全提示
本标准中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性,操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲
洗,严重者应立即治疗。在使用挥发酸时,要在通风橱中进行。
A.2 一般规定
本标准所用试剂和水,在没有注明其他要求时,均指分析纯试剂和GB/T 6682中规定的三级水。
试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及其制品,在没有注明其他要求时,均按GB/T 601、
GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。
A.3 鉴别试验(红外光谱法)
采用溴化钾压片法,按照GB/T 32199进行试验,试样的红外光谱图应与对照品的谱图一致(对照
品图谱见图B.1)。
A.4 (6S)-5-甲基四氢叶酸,氨基葡萄糖盐和(6S)-5-甲基四氢叶酸(以干基计)的测定
A.4.1 方法提要
试样用水溶解后,采用液相色谱分离,紫外检测器或其他等效检测器检测,标准单点法定量。
A.4.2 试剂和材料
A.4.2.1 水:GB/T 6682规定的一级水。
A.4.2.2 乙腈:色谱纯。
A.4.2.3 磷酸二氢钾。
A.4.2.4 氢氧化钾。
A.4.2.5 (6S)-5-甲基四氢叶酸钙标准品:纯度≥98.0%,CAS号:151533-22-1,或经国家认证并授予标
准物质证书的标准品。
A.4.2.6 氢氧化钾溶液(20g/100mL):称取20g氢氧化钾,加水溶解,并定容至100mL。
A.4.2.7 磷酸二氢钾溶液(pH6.5):称取约6.80g磷酸二氢钾,精确至0.0001g,加水900mL溶解,用
氢氧化钾溶液(A.4.2.6)调节pH至6.5,加水定容至1000mL,摇匀,过滤并超声后备用。
A.4.2.8 磷酸二氢钾-乙腈溶液(pH8.0):称取约4.08g磷酸二氢钾,精确至0.0001g,加水600mL溶
解,与350mL乙腈混合,用氢氧化钾溶液(A.4.2.6)调节pH至8.0,加水定容至1000mL,摇匀,过滤并
超声后备用。
A.4.3 仪器和设备
A.4.3.1 高效液相色谱仪:配备紫外吸收检测器,或其他等效的检测器。
A.4.3.2 电子天平:感量为0.0001g。
A.4.3.3 酸度计:精度为±0.02pH。
A.4.3.4 超声波清洗器。
A.4.4 色谱参考条件
A.4.4.1 色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm,粒径5μm;或其他等效的色谱柱。
A.4.4.2 流速:1.0mL/min。
A.4.4.3 检测波长:280nm。
A.4.4.4 柱温:25℃。
A.4.4.5 进样量:10μL。
A.4.4.6 流动相:流动相A为磷酸二氢钾溶液(pH6.5)(A.4.2.7),流动相B为磷酸二氢钾-乙腈溶液
(pH8.0)(A.4.2.8),采用梯度洗脱,梯度洗脱程序如表A.1所示。
表A.1 梯度洗脱程序
时间/min 流动相A/% 流动相B/%
0 100 0
15 60 40
17 30 70
22 30 70
31 100 0
36 100 0
A.4.5 分析步骤
A.4.5.1 标准溶液的制备
称取0.0433g的(6S)-5-甲基四氢叶酸钙标准品[相当于0.0400g(6S)-5-甲基四氢叶酸],精确至
0.0001g,置于100mL容量瓶中,先用少量水溶解,再用水稀释至刻度,摇匀。所得溶液在低于20℃
环境下(在超声浴中放入冰块)超声2min,经0.45μm滤膜过滤后立即进样。
A.4.5.2 试样溶液的制备
称取约0.070g试样,精确至0.0001g,置于100mL容量瓶中,先用少量水溶解,再用水稀释至刻
度,摇匀。所得溶液在低于20℃环境下(在超声浴中放入冰块)超声2min,经0.45μm滤膜过滤后立
即进样。平行配制两份。
注:溶液均需现配现用,不能长时间存放。
A.4.5.3 系统适用性试验
按照如下步骤执行系统适用性试验:使用带冷却功能的自动进样器,设置温度低于8℃;若使用不
带冷却功能的进样器,进样前需将溶液在2℃~8℃下储存。进行6次标准溶液进样,计算表 A.2
参数。
表A.2 系统适用性试验参数
参 数 限 值
RSD(峰面积)/% ≤ 2.0
RSD(保留时间)/% ≤ 1.0
拖尾因子 ≤ 2
理论塔板数 ≥ 40000
A.4.5.4 测定
在A.4.4色谱条件下,将水(不含溶质)注入,按照上述色谱条件运行色谱仪。然后分别对标准溶液
和试样溶液进行色谱分析。以保留时间定性,以峰面积定量。(6S)-5-甲基四氢叶酸参考色谱图见
图C.1,(6S)-5-甲基四氢叶酸的保留时间约为11min。
注:分析结束后,使用乙腈和水(65∶35,体积比)的混合溶液冲洗色谱柱,随后用乙腈和水(65∶35,体积比)混合溶
液封柱。
A.4.6 结果计算
(6S)-5-甲基四氢叶酸(以干基计)的质量分数w1,按公式(A.1)计算:
w1=
Ac1×mstd1×T
Astd1×mc1×(100%-M)×
100% (A.1)
式中:
Ac1 ---试样溶液色谱图中(6S)-5-甲基四氢叶酸的峰面积;
mstd1---标准品的质量,单位为克(g);
T ---(6S)-5-甲基四氢叶酸钙盐标准品中(6S)-5-甲基四氢叶酸的质量分数,%;
Astd1---标准溶液色谱图中(6S)-5-甲基四氢叶酸的峰面积;
mc1 ---试样的质量,单位为克(g);
M ---试样中水分的质量分数,%。
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差
值不应超过算术平均值的2%。
(6S)-5-甲基四氢叶酸,氨基葡萄糖盐(以干基计)的质量分数w2,按公式(A.2)计算:
w2=
w1×M1
M2
(A.2)
式中:
w1---(6S)-5-甲基四氢叶酸(以干基计)的质量分数,%;
M1---(6S)-5-甲基四氢叶酸,氨基葡萄糖盐的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol)
(MC32H51N9O16=817.80);
M2---(6S)-5-甲基四氢叶酸的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol)(MC20H25N7O6=459.45)。
A.5 氨基葡萄糖(以干基计)的测定
A.5.1 方法提要
试样用乙腈-水溶液溶解后,采用液相色谱分离,紫外检测器或其他等效检测器检测,标准单点法
定量。
A.5.2 试剂和材料
A.5.2.1 水:GB/T 6682规定的一级水。
A.5.2.2 乙腈:色谱纯。
A.5.2.3 氢氧化钾。
A.5.2.4 磷酸二氢钾。
A.5.2.5 D-(+)-氨基葡萄糖盐酸盐标准品:摩尔质量(MC6H13NO5·HCl)为215.63g/mol,纯度≥98.0%,
CAS号:66-84-2,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
A.5.2.6 50%乙腈溶液:量取500mL水和500mL乙腈,混匀。
A.5.2.7 氢氧化钾溶液(20g/100mL):称取20g氢氧化钾,加水溶解,并定容至100mL,摇均备用。
A.5.2.8 磷酸盐缓冲溶液(20mmol/L):称取2.72g磷酸二氢钾溶于900mL水中,用氢氧化钾溶液
(A.5.2.7)调pH至7.5,加水定容至1000mL,摇匀,过滤并超声后备用。
A.5.3 仪器和设备
A.5.3.1 高效液相色谱仪:配备紫外吸收检测器,或其他等效的检测器。
A.5.3.2 电子天平:感量为0.0001g。
A.5.4 色谱参考条件
A.5.4.1 色谱柱:NH2 柱,250mm×4.6mm,粒径5μm;或其他等效的色谱柱。
A.5.4.2 流动相:乙腈+20mmol/L磷酸盐缓冲溶液(75∶25,体积比)。
A.5.4.3 流速:1.5mL/min。
A.5.4.4 检测波长:195nm。
A.5.4.5 柱温:35℃。
A.5.4.6 进样量:10μL。
A.5.5 分析步骤
A.5.5.1 氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液的制备
称取0.375g氨基葡萄糖盐酸盐标准品,精确至0.0001g,置于100mL容量瓶中,加50mL50%
乙腈溶液溶解后,再用50%乙腈溶液定容至刻度,摇匀,经0.45μm滤膜过滤后立即进样。
A.5.5.2 试样溶液的制备
称取0.350g试样,精确至0.0001g,置于100mL容量瓶中,加50mL50%乙腈溶液溶解后,再用
50%乙腈溶液定容至刻度,摇匀,经0.45μm滤膜过滤后立即进样。
注:溶液均需现配现用,不能长时间存放。
A.5.5.3 系统适用性试验
氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液进样6次,确定峰面积相对标准差(RSD)、拖尾因子和理论塔板数。合
格标准:RSD≤2.0%,拖尾因子≤2.0,理论塔板数≥1500。
A.5.5.4 测定
在A.5.4色谱条件下,先注入氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液,根据上述色谱条件进行色谱测定,记录
色谱图,另取试样溶液,同法测定。氨基葡萄糖标准溶液的参考色谱图见图C.2。氨基葡萄糖的保留时
间约为12.1min。
A.5.6 结果计算
氨基葡萄糖盐(以干基计)的质量分数w3,按公式(A.3)计算:
w3=
Ac2×mstd2×T
Astd2×mc2×(100%-M)×
100% (A.3)
式中:
Ac2 ---试样溶液色谱图中氨基葡萄糖盐的峰面积;
mstd2---标准品的质量,单位为克(g);
T ---D-(+)氨基葡萄糖盐酸盐标准品中D-(+)氨基葡萄糖的质量分数,%;
Astd2---标准溶液色谱图中氨基葡萄糖的峰面积;
mc2 ---试样的质量,单位为克(g);
M ---试样中水分的质量分数,%。
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差
值不应超过算术平均值的2%。
A.6 非对映异构体[(6S)-5-甲基四氢叶酸]的测定
A.6.1 方法提要
试样用水溶解后,采用液相色谱分离,紫外检测器或其他等效检测器检测,标准单点法定量。
A.6.2 试剂和材料
A.6.2.1 水:GB/T 6682规定的一级水。
A.6.2.2 异丙醇:色谱纯。
A.6.2.3 磷酸二氢钠。
A.6.2.4 氢氧化钠。
A.6.2.5 (6R,S)-5-甲基四氢叶酸钙标准品:纯度≥98.0%,CAS号:26560-38-3,或经国家认证并授予
标准物质证书的标准品。
A.6.2.6 氢氧化钠溶液(10g/100mL):称取10g氢氧化钠,加水溶解,并定容至100mL。
A.6.2.7 100mmol/L磷酸钠缓冲溶液:精确称取12.0g磷酸二氢钠溶于900mL水中,用氢氧化钠溶
液(A.6.2.6)将pH准确调至7.0,加水定容至1000mL,摇匀,过滤并超声后备用。
A.6.3 仪器和设备
A.6.3.1 高效液相色谱仪:配备紫外吸收检测器,或其他等效的检测器。
A.6.3.2 电子天平:感量为0.1mg。
A.6.3.3 pH计。
A.6.3.4 超声波清洗器。
A.6.4 色谱参考条件
A.6.4.1 色谱柱:HSA手性柱,100mm×4.0mm,粒径5μm;或其他等效的色谱柱。
A.6.4.2 流动相:异丙醇+100mmol/L磷酸钠缓冲溶液(6∶94,体积比)。
A.6.4.3 流速:0.7mL/min,调整流速,使(6S)-5-甲基四氢叶酸保留时间约为4.0min。
A.6.4.4 检测波长:225nm。
A.6.4.5 柱温:30℃。
A.6.4.6 进样量:5μL。
A.6.4.7 时间:20min。
A.6.5 分析步骤
A.6.5.1 标准溶液的制备
称取约0.025g(6R,S)-5-甲基四氢叶酸钙标准品,精确至0.0001g,置于100mL容量瓶中,用
90mL水溶解,20℃ 超声1min,用水定容至刻度。移取5mL该溶液至10mL容量瓶中,用流动相定
容,经0.45μm 滤膜过滤后立即进样。
A.6.5.2 试样溶液的制备
称取约0.035g试样,精确至0.0001g,置于100mL容量瓶中,用90mL水溶解。20℃ 超声
1min,用水定容至刻度。移取5mL该溶液至10mL容量瓶中,用流动相定容,经0.45μm滤膜过滤后
立即进样。
注:溶液均需现配现用,不能长时间存放。
A.6.5.3 测定
在A.6.4色谱条件下,先注入标准溶液,检查系统适用性。(6S)-5-甲基四氢叶酸和(6R)-5-甲基四
氢叶酸的分离度应不小于2。另取试样溶液,同法测定。(6S)-5-甲基四氢叶酸和(6R)-5-甲基四氢叶酸
标准溶液的参考色谱图见图C.3。(6S)-5-甲基四氢叶酸保留时间约为4.0min。(6R)-5-甲基四氢叶酸
保留时间约为7.4min。分离度R,按式(A.4)计算:
R=
1.18×(T2-T1)
W1+W2
(A.4)
式中:
1.18---分离度系数;
T2 ---相邻两色谱峰中后一峰的保留时间,单位为分(min);
T1 ---相邻两色谱峰中前一峰的保留时间,单位为分(min);
W1 ---相邻两色谱峰中前一峰的半高峰宽;
W2 ---相邻两色谱峰中后一峰的半高峰宽。
A.6.6 结果计算
非对映异构体(6S)-5-甲基四氢叶酸的含量w4,按公式(A.5)计算:
w4=
AS
AS+AR×
100% (A.5)
式中:
AS---试样溶液色谱图中 (6S)-5-甲基四氢叶酸的峰面积;
AR---试样溶液色谱图中 (6R)-5-甲基四氢叶酸的峰面积。
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差
值不应超过算术平均值的2%。
A.7 杂质的测定
A.7.1 方法提要、试剂和材料、仪器和设备、色谱参考条件及分析步骤同 A.4.1、A.4.2、A.4.3、A.4.4、
A.4.5。相关物质参考色谱图见图C.4。
A.7.2 单个杂质的参考保留时间和相对保留时间见表 A.3。
表A.3 单个杂质的参考保留时间和相对保留时间
相关物质名称 参考保留时间/min 相对保留时间
4-氨基苯甲酰谷氨酸(ABGA) 3.31 0.30
4α-羟基-5-甲基四氢叶酸(HOMeTHFA) 4.23 0.39
(6S)-吡嗪-s-三嗪衍生物 [(6S) Mefox] 6.18 0.56
5-甲基四氢叶酸 (5 MTHF) 10.98 1.00
5-甲基四氢碟酸(MeTHPA) 12.30 1.12
A.7.3 利用试样溶液色谱图计算所有单个杂质的质量分数Xi,范围包括除主峰以外的所有色谱峰,并
忽略试样溶液(0.1%)色谱图中峰面积为主峰面积0.05倍的所有峰。
单个杂质的质量分数Xi,按式(A.6)计算:
Xi=
Ai×mstd3×T×(RF)i
Astd3×mc3
(A.6)
式中:
Ai ---试样溶液色谱图中单个杂质的峰面积;
mstd3 ---标准品的质量,单位为克(g);
T ---(6S)-5-甲基四氢叶酸钙盐标准品中(6S)-5-甲基四氢叶酸的质量分数,%;
(RF)i---单个杂质的响应因子;
Astd3 ---标......
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